Name: Implantación de la ingeniería tisular en el corazón de rata (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-06-24T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: Aprende a implantar tejido ingenierizado en el corazón de rata mediante toracotomía derecha en el quinto espacio intercostal. Este protocolo quirúrgico establece una vía de conducción eléctrica alternativa con tasa de recuperación superior al 90%.

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Este trabajo es apoyado por becas de investigación de los Institutos Nacionales de Salud (HL068915; HL088206) y las contribuciones al Fondo de conducción cardiaca en el Hospital de Niños de Boston.

Parte 1: La inducción de la anestesia general <ol><li> A 200-250 g de ratas Lewis es anestesiados con 50 mg / kg de ketamina y 4 mg / kg de xilazina inyecta con una aguja de 30 G en la cavidad intraperitoneal. La parte superior del abdomen y el pecho derecho se recorta para eliminar el vello y la zona de la incisión limpiado a fondo con el 70% de etanol y una solución de yodo-povidona antiséptico tópico. </li><li> El animal está intubado por vía endotraqueal utilizando un catéter de 16 G por vía intravenosa conectada a un respirador de pequeños animales (Harvard Apparatus). El respirador se conecta a un vaporizador para suministrar 0,5 a 1,0% isoflurano (Baxter), mezclado con oxígeno al 100% para mantener la anestesia general. La tasa de respiración y el volumen corriente se ajusta de acuerdo al peso corporal de la rata. El animal se coloca en una almohadilla térmica (Hood Thermo-Pad) para mantener la temperatura corporal durante el procedimiento quirúrgico. </li><li> Para controlar la frecuencia cardíaca y saturación de oxígeno a través de la intervención quirúrgica de un dispositivo pulsoximeter (Nellcor) se fija a uno de los miembros posteriores. </li></ol> Parte 2: La toracotomía y la implantación de la ingeniería tisular <ol><li> El sitio quirúrgico se prepara con drapeado quirúrgico estéril que se lleva a cabo en su lugar con abrazaderas toalla. </li><li> Se hace una incisión de la antero-lateral a la pared lateral de la parte derecha del pecho, justo encima del espacio intercostal 5 º. El interior del pecho se accede a través del espacio intercostal 5 º y un retractor pequeño (Roboz) está posicionada para maximizar la vista. </li><li> El pericardio se corta justo por encima del apéndice de la aurícula derecha y el ventrículo derecho desde la base hacia el ápice del corazón. Después, el surco AV se identifica y la capa epicárdica adyacente al triángulo aorto-atrio-ventricular es suavemente bromas aparte. </li><li> Un 7-0 Prolene sutura (Ethicon) se coloca en el hombro basal del ventrículo derecho. A 2 x 2 x 2 mm pieza es disecado de la construcción de la ingeniería tisular y se coloca en el surco AV y suavemente atado con la sutura de Prolene. </li><li> El campo quirúrgico se comprueba la sangría y dos puntos de sutura Vicryl 4-0 (Ethicon) se colocan entre la parte superior e inferior del espacio intercostal para el cierre de la caja torácica. </li><li> Cualquier neumotórax aparente se excava mediante la expansión de los pulmones a través del ventilador. </li><li> La pared torácica se cierra por planos. </li></ol> Parte 3: Recuperación <ol><li> Mientras que el animal se recupera de la cirugía, el sitio de la incisión se infiltra con bupivacaína 0,25% 5 ml [2]. </li><li> El animal es extubado después de la retirada del respirador y se devuelve a una jaula con material limpio, una vez que esté totalmente despierto y esternal. La rata se administre posteriormente 0,01 mg / kg de buprenorfina analgesia por vía subcutánea cada 12 horas durante 3 días. </li></ol> Parte 4: Los resultados representativos Si se realiza correctamente, la describe la implantación quirúrgica de la ingeniería tisular en la AV-surco del corazón (Figura 1) los resultados en la recuperación de más del 90% de los animales. <img src="/files/ftp_upload/1139/Figure1.jpg" alt="Figura 1"> Figura 1. Una fotografía del corazón expuesto que muestra el sitio de implantación de la ingeniería tisular.

<ol><li>Choi, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+conduction+through+engineered+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Cardiac conduction through engineered tissue.</a> Am J Pathol. 169, 72-85 (2006).</li>
<li>Shin, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-dose+systemic+bupivacaine+prevents+the+development+of+allodynia+after+thoracotomy+in+rats.+Anesth+Analg%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Low-dose systemic bupivacaine prevents the development of allodynia after thoracotomy in rats. Anesth Analg.</a> 107, 1587-1591 (2008).</li>
<li>Horstick, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+procedure+affects+physiological+parameters+in+rat+myocardial+ischemia%3A+need+for+mechanical+ventilation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Surgical procedure affects physiological parameters in rat myocardial ischemia: need for mechanical ventilation.</a> Am J Physiol. 276, H472-H479 (1999).</li>
</ol>

Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices y normas establecidas por el Cuidado de Animales institucional y el empleo en el Hospital Infantil de Boston s.

Para obtener un resultado favorable a la intervención quirúrgica, es fundamental para intubar correctamente y invasiva ventilar el animal. Si la rata es simplemente sedado para permitir que respire de forma espontánea, los dos pulmones se derrumbará inevitablemente, mientras que el tórax se abre debido a la pleura común en roedores. Antes de cerrar el pecho, cualquier neumotórax debe ser eliminado por completo y los pulmones totalmente expandida para reducir la atelectasia. De lo contrario, el destete del respirador y l...

<table><tbody><tr><td>7x4 Thermo Pad 4/caja</td><td>Equipo</td><td>Hood Thermo-Pad, Summerland, BC Canadá</td><td>MODELO 704R</td><td></td></tr><tr><td>Ventilador Inspira ASV</td><td>Equipo</td><td>Harvard Apparatus</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oxímetro de pulso portátil</td><td>Equipo</td><td>Nellcor</td><td>N20PA</td><td></td></tr><tr><td>Retractor</td><td>Equipo</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-6514</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano (Forane)</td><td>Reactivo</td><td>Baxter International Inc.</td><td>1001936040</td><td></td></tr><tr><td>Clorhidrato de ketamina</td><td>Reactivo</td><td>Hospira Inc.</td><td>RL-0065</td><td></td></tr><tr><td>Xilazina (AnaSed)</td><td>Reactivo</td><td>Lloyd, Inc.</td><td>LB15705A</td><td></td></tr><tr><td>Inyección de clorhidrato de buprenorfina</td><td>Reactivo</td><td>Bedford Laboratories</td><td>Div-BUP-P00</td><td></td></tr><tr><td>Bupivacaína 0,25 %</td><td>Reactivo</td><td>Hospira Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

implantación de la ingeniería tisular en el corazón de rata

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

La cirugía de roedores es a menudo un componente importante en la evaluación de la utilidad de los tejidos de ingeniería. Una amplia variedad de procedimientos quirúrgicos pueden ser realizados en ratas o ratones de laboratorio común y estas muy a menudo sirven como un paso intermedio entre el de sobremesa experimentos y pruebas con animales grandes o los ensayos en humanos. Teniendo en cuenta que los roedores disponer de un sistema modelo establecido, rentable, y fisiológicamente relevantes en los que probar nuevas combinaciones de materiales del armazón y las células, que son especialmente adecuados para los estudios de ingeniería de tejidos cardiovasculares. En la actualidad, se describe un procedimiento quirúrgico de corazón abierto para la implantación de la ingeniería tisular con células miogénicas progenitoras en el auriculoventricular (AV) ranura de un corazón de rata. Estos implantes tienen la intención de crear un conducto eléctrico entre la aurícula y el ventrículo derecho, con el objetivo último de proporcionar un tratamiento alternativo a la implantación de un marcapasos convencional en pacientes pediátricos con bloqueo cardíaco completo [1]. La ingeniería tisular se implanta en la AV-surco por medio de una toracotomía. Para nuestros propósitos, las ratas Lewis son anestesiados y ventilados invasiva para mantener la presión positiva de aire durante el procedimiento quirúrgico estéril. El enfoque hacia el corazón se realiza una toracotomía derecha a través de una incisión antero-lateral en el 5<sup&gt; °</sup&gt; Espacio intercostal. La construcción de tejido se fija en el surco AV con una sola sutura de Prolene 7-0 y se coloca entre el ventrículo derecho y el atrio en la parte ventral del corazón. El epicardio es parcialmente removido para permitir el contacto directo entre las células receptoras de miocardio y los contenidos en la ingeniería tisular. Tras el implante, la pared torácica se cierra por planos, cualquier neumotórax es evacuado, y el animal es extubado y se tratan con analgésicos.

Aquí se describe un procedimiento de cirugía cardiaca para implantar la ingeniería tisular en el auriculoventricular (AV) con ranura de un adulto de rata Lewis.

Implantación de la ingeniería tisular en el corazón de rata

La cirugía en roedores suele ser un componente importante para evaluar la utilidad de los tejidos de ingeniería. Se puede llevar a cabo una amplia variedad de procedimientos quirúrgicos en...

Hola, soy Zu del laboratorio de Douglas Cowan en el Departamento de Anestesiología del Hospital Pediátrico y la Escuela de Medicina de Harvard. Hoy les mostraremos un procedimiento para implantar tejido ingenierizado en el corazón rojo. Utilizamos este procedimiento en nuestro laboratorio para crear una vía alternativa de conducción eléctrica aurículo-ventricular.Así que comencemos. Este video describe la implantación quirúrgica de un constructo de tejido ingenierizado que contiene mioblastos. Este protocolo experimental de prueba de principio proporciona evidencia de que los moldes de tejido pueden fabricarse in vitro y trasplantarse in vivo a receptores que requieren la reparación de un órgano no funcional.Y el video adjunto describe cómo se sembraron las células en el molde que se ajusta al surco AV del corazón de una rata adulta. El protocolo comienza anestesiando una rata Lewis de 200 a 250 gramos con una mezcla de ketamina y xilazina inyectada mediante una aguja de calibre 30 en la cavidad intraperitoneal. Una vez que la rata está completamente anestesiada y no responde a un pellizco en la pata, prepárese para el procedimiento quirúrgico afeitando el vello del abdomen superio

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Los métodos para preparar una matriz de gel inyectable de tejidos descelularizada e inyectarlo en ratas...

Fabricación de materiales de origen biológico inyectable para ingeniería de tejidos del miocardio

Bioluminiscencia de imágenes para la evaluación de la respuesta inmune después de la implantación de tejido cardiaco de Ingeniería (EHT)

Implantación de un biograft para tratar el infarto de miocardio inducido por ligadura de LAD en un modelo de roedor ha requerido convencionalmente dos cirugías a corazón abierto. Con el fin de reducir la mortalidad y proporcionar las condiciones óptimas para la fijación de biomatrices sólidos gelatinosos y asociados con las células, se han desarrollado procedimientos mínimamente invasivos.

Terapia basada en células de la insuficiencia cardiaca en rata: Doble toracotomía para infarto de miocardio y epicardio implantación de células y Biomatrix

Esta es una guía para construir tejido vascularizado in vivo utilizando un asa arteriovenosa microquirúrgica o una configuración de pedículo de flujo continuo dentro de una cámara de ingeniería de tejidos. Los tejidos vascularizados generados se pueden emplear para la regeneración de órganos y el reemplazo de defectos tisulares, así como para pruebas de medicamentos y modelado de enfermedades.

Ingeniería de tejidos por intrínseca Vascularización en una<em&gt; En Vivo</em&gt; Cámara Ingeniería de Tejidos

Aquí presentamos un protocolo para la inducción de la criocauterización ventricular izquierdo seguido de la implantación de un parche de músculo cardiaco, derivado de los cardiomiocitos células iPS humanas en un modelo del conejillo de Indias.

Implantación de parches hiPSC derivado de músculo cardiaco después de lesión del miocardio en un modelo del conejillo de Indias

Describimos un modelo de trasplante de corazón abdominal heterotópico en ratas, lo que implica modificaciones de las estrategias actuales, que conducen a un enfoque quirúrgico simplificado. Además, describimos un nuevo modelo de rechazo mediante inyección en la oreja de células musculares cardíacas vitales, permitiendo análisis inmunológicos de trasplante adicionales en ratas.

Un modelo inmunológico para el trasplante heterotópico de células musculares cardíacas y cardíacas en ratas

Este protocolo describe la implantación de stents coronarios humanos en la aorta abdominal de ratas con un apoE-/- fondo usando un acceso transporte-femoral. En comparación con otros modelos animales, los modelos murinos tienen las ventajas de un alto rendimiento, reproducibilidad, facilidad de manejo y alojamiento, y una amplia disponibilidad de marcadores moleculares.

Implantación De Stents Coronarios De Tamaño Humano En La Aorta Abdominal De Rata Usando Un Acceso Trans-Femoral

Este protocolo describe un método simple y eficiente para el trasplante de valvas de la válvula aórtica debajo de la cápsula renal para permitir el estudio de la alorreactividad de las válvulas cardíacas.

Un modelo simplificado para el trasplante heterotópico de válvulas cardíacas en roedores

El presente protocolo describe métodos para la expresión transgénica en corazones de rata y ratón mediante inyección intramiocárdica directa del virus bajo guía ecocardiográfica. Los métodos para la evaluación de la susceptibilidad de los corazones a las arritmias ventriculares mediante la estimulación eléctrica programada de corazones aislados, perfundidos con Langendorff, también se explican aquí.

Expresión de transgenes virales en corazones de roedores y la evaluación del riesgo de arritmia cardíaca

En este trabajo se presenta un modelo animal de fibrosis inducida por transición endotelial-mesenquimatosa, como se observa en defectos cardíacos congénitos como la estenosis aórtica crítica o el síndrome del corazón izquierdo hipoplásico, que permite la evaluación histológica detallada del tejido, la identificación de vías de señalización reguladoras y la prueba de opciones de tratamiento.

Un modelo de trasplante de corazón de rata heterotópico neonatal para el estudio de la transición endotelial a mesenquimal

Aquí, se presenta un protocolo para la implantación de un injerto vascular de ingeniería tisular en la arteria carótida del ratón utilizando la técnica del manguito, proporcionando un modelo animal adecuado para investigar los mecanismos de regeneración del tejido vascular.

Implantación de un injerto vascular de ingeniería tisular en la arteria carótida de ratón mediante la técnica del manguito

Aprende a implantar tejido ingenierizado en el corazón de rata mediante toracotomía derecha en el quinto espacio intercostal. Este protocolo quirúrgico establece una vía de conducción eléctrica alternativa con tasa de recuperación superior al 90%.

Implantación de la ingeniería tisular en el corazón de rata

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