Name: A largo plazo de imágenes usando las células de mamíferos Wide-Field Microscopía (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min
Description: Aprende a realizar imágenes de larga duración en células de mamíferos utilizando microscopía de campo amplio invertida a 37°C. Este método permite estudiar la progresión mitótica en tiempo real con control de temperatura y CO2.

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Los autores no tienen nada que revelar.

a largo plazo de imágenes usando las células de mamíferos wide-field microscopía

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

A largo plazo de imágenes usando las células de mamíferos Wide-Field Microscopía

En realidad, lo que voy a hacer es montarlo aquí primero y luego cambiarte a ti. Ahora voy a aspirar, intentando ser lo más cuidadoso posible. Bien. Unos segundos sosteniendo. De acuerdo. Muy bien.Entonces, las características importantes de nuestra rejilla de imagenología vital son las siguientes: se trata de un microscopio invertido, lo que significa que el objetivo, las muestras aquí en el objetivo están debajo. Por lo tanto, el objetivo apunta hacia arriba y todo el microscopio, o prácticamente todo, incluyendo los objetivos y la muestra, se encuentra a 37 grados. Así, todo dentro de esta caja de plástico está a 37 grados.Y justo encima del escenario tenemos una mezcla de aire y CO₂. Eso es 5 % CO₂. Así que la idea es que la muestra está realmente en una célula, es como un incubador de células.Y así tenemos, este es nuestro mezclador para el aire y el CO₂, que luego se humidifica y calienta, y después se canaliza hacia la muestra en la platina. Bien. Hoy simplemente realizaremos fluorescencia en un solo canal, la fluorescencia GFP. Esta es la manguera por donde entra el CO₂ y el 5 % de CO₂, y simplemente se ajusta al soporte de la platina.Eso es importante. Luego podemos cerrar

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Tisular embrionario en tiempo real es un reto durante largos períodos de tiempo. Aquí presentamos un ensayo para el seguimiento de los cambios celulares y subcelulares en la médula espinal de pollo durante largos periodos con alta resolución espacial y temporal. Esta técnica puede ser adaptado para otras regiones del sistema nervioso y embrión en desarrollo.

Imágenes de alta resolución en vivo del comportamiento de las células en el desarrollo de neuroepitelio

Imagen de lapso de tiempo se utiliza para evaluar el comportamiento de las células mamarias preneoplásicas primarias epiteliales derivadas de los modelos de ratón genéticamente modificadas de riesgo de cáncer de mama para determinar si existen correlaciones entre los parámetros de comportamiento específicas y distintas lesiones genéticas.

Time-lapse de imágenes de Primaria preneoplásicas células epiteliales mamarias derivadas de los modelos de ratones genéticamente modificados del cáncer de mama

La matriz extracelular se somete a la remodelación sustancial durante la cicatrización de heridas, la inflamación y la tumorigénesis. Se presenta un novedoso enfoque de inmunofluorescencia microscopía intravital de visualizar la dinámica de fibrilar, así como componentes de la matriz de tipo malla con una alta resolución espacial y temporal mediante epifluorescencia o microscopía de dos fotones.

A largo plazo intravital Inmunofluorescencia imágenes de tejido Componentes de Matriz con epifluorescencia y microscopía de dos fotones

Imágenes en vivo de la cóclea de mamíferos embrionario es un reto porque los procesos de desarrollo en la mano operan en un gradiente temporal de más de diez días. Aquí presentamos un método para cultivar y luego la formación de imágenes de embriones tejido explante coclear tomado de un ratón reportero fluorescente en cinco días.

A largo plazo Lapso de tiempo de imágenes de Ratón cocleares explantes

Este protocolo describe el uso de la microscopía multifotónica para realizar imágenes unicelulares de alta resolución a largo plazo del pulmón intacto en tiempo real utilizando una ventana de imagen estabilizada por vacío.

A largo plazo de alta resolución Microscopia intravital en el pulmón con una ventana de imagen vacío Estabilizado

El método presentado aquí utiliza micropatrones junto con imágenes cuantitativas para revelar la organización espacial dentro de los cultivos de mamíferos. La técnica es fácil de establecer en un laboratorio de biología celular estándar y ofrece un sistema manejable para estudiar el patrón in vitro.

Mapeo de la Organización Espacial Emergente de Células De mamíferos usando Micropatrones e Imágenes Cuantitativas

Aquí se presenta un protocolo para la implantación de una ventana craneal crónica para la obtención de imágenes longitudinales de células cerebrales en ratones despiertos y con la cabeza restringida.

Implantación de una ventana craneal para imágenes repetidas in vivo en ratones despiertos

Aquí se presenta un enfoque para imágenes intravitales a largo plazo utilizando ventanas de silicona ópticamente transparentes que se pueden pegar directamente al tejido / órgano de interés y la piel. Estas ventanas son más baratas y versátiles que otras utilizadas actualmente en el campo, y la inserción quirúrgica causa inflamación y angustia limitadas a los animales.

Imágenes intravitales longitudinales a través de ventanas de silicona transparente

Este protocolo describe una nueva ventana de imágenes mamarias con una tapa reemplazable (R.MIW). La microscopía intravital después de la implantación del R.MIW permite obtener imágenes longitudinales y de varios días de la glándula mamaria sana y enferma con una resolución celular durante las diferentes etapas del desarrollo.

Microscopía intravital longitudinal con una ventana de imágenes mamarias con tapa reemplazable

El presente protocolo describe la fabricación de una ventana craneal grande (6 x 3 mm2) utilizando envoltura de alimentos, silicona transparente y vidrio de cubierta. Esta ventana craneal permite experimentos in vivo de imágenes de calcio de campo amplio y dos fotones en el mismo ratón.

In vivo Imágenes de calcio de campo amplio y dos fotones de un ratón usando una ventana craneal grande

Los protocolos actuales describen nuevas imágenes de montaje completo para la visualización de estructuras periféricas en el cristalino ocular con métodos para la cuantificación de imágenes. Estos protocolos se pueden utilizar en estudios para comprender mejor la relación entre las estructuras a microescala del cristalino y el desarrollo/función del cristalino.

Imágenes de montura completa para visualizar y cuantificar la estructura, la morfología y la organización de las lentes periféricas

Aprende a realizar imágenes de larga duración en células de mamíferos utilizando microscopía de campo amplio invertida a 37°C. Este método permite estudiar la progresión mitótica en tiempo real con control de temperatura y CO2.

A largo plazo de imágenes usando las células de mamíferos Wide-Field Microscopía

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