Name: Cáncer de Borealis Stomatogastric disección del sistema nervioso (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-03-23T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 37 s
Description: Aprende a disecar el sistema nervioso estomatogástrico de Cancer borealis para preparar el ganglio STG y nervios asociados en estudios de electrofisiología. Este protocolo detallado permite investigar circuitos neuronales y generadores de patrones motores en neurobiología.

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Queremos agradecer a los miembros del Laboratorio de Marder. Agradecemos a nuestro asesor, el Dr. Marder Eva, por su apoyo y aliento. Esta investigación fue financiada por el Instituto Nacional de Trastornos Neurológicos y Apoplejía Becas NS y NS-17813-058110.

1. La disección bruto <ol><li> Coloque un cangrejo en hielo durante 30 minutos para calmar los sistemas sensoriales y motoras del animal. Lo rodean por todas partes con hielo. Se deben usar guantes al manipular el cangrejo. </li><li> Prepararse para la disección bruto por colocar la bandeja de disección y las herramientas que va a utilizar. Gubias, tijeras de corte de hueso, pequeñas tijeras, pinzas dentadas, una espátula con un borde afilado, un plato negro Sylgard recubiertos, y los pernos de insectos son necesarios. </li><li> Quitar el cangrejo del cubo de hielo por sus patas traseras para evitar pellizcos y colocarlo en la bandeja de disección. </li><li> Quitar las garras por primera vez por cada giro hacia el interior una. A continuación, retire cada pierna con el mismo movimiento de torsión. </li><li> Uso de la gubia, retire el maxilar superior que cubre la boca. También quite la maxillule suave. </li><li> Uso de la gubia de nuevo, empezar desde el extremo lateral posterior del caparazón y obtener un buen agarre en el borde de la misma. Medidas drásticas con la gubia y romper ese trozo de caparazón de. Asegúrese de eliminar suficiente del caparazón para permitir la espátula para entrar en la apertura. Continuar con la eliminación del borde del caparazón, hasta los ojos y repetir en el otro lado. </li><li> Con el lado afilado de la espátula, raspar suavemente el tejido interior suave contacto con el techo del caparazón dorsal. Mantenga la espátula en contacto con el caparazón para evitar dañar la STNS. Utilice la gubia de romper con las partes de la caparazón que han sido separados de los tejidos. También por separado algunos de los tejidos blandos de la caparazón ventral asegurarse de separar los músculos aductores de colocar el tejido de la caparazón. </li><li> Romper el caparazón dorsal en lo posterior como el corazón, donde hay dos pequeños huesecillos que sobresale del caparazón. Cortar por lo anterior como sea posible. Estabilizar la Cephalon (la &quot;cara&quot;) con un dedo, mientras que romper la parte más anterior del caparazón dorsal. </li><li> En la parte ventral del caparazón, sacar la mandíbula a la vez, el anclaje de la gubia en la mandíbula, torciendo hacia el exterior para desalojar a la mandíbula de la epistome adjunta, y tirar a la basura. Dos huesecillos de largo con músculos deben estar unidos a la mandíbula extraída si se hace correctamente. </li><li> Aparte el tejido de los lados de la Cephalon cerca de los ojos con la espátula. Con tijeras de disección pequeñas, atraviesan el tejido tan cerca de la cordillera de los huesecillos como capa por capa, es posible. </li><li> El resto de cangrejo en una pared de la olla de disección y mantenerla hasta asegurarlo en su lugar (las garras se pueden utilizar para esto). Cortar el labrum (&quot;el labio superior&quot;) de la epistome asegurándose de no dejar ningún tejido adherido. Utilizando tijeras de corte de hueso hacer dos cortes diagonales en el caparazón ventral para eliminar el Cephalon. </li><li> Tome el labrum con pinzas dentadas y cortar el labio (&quot;labio inferior&quot;) de la huesecillos en la parte ventral. A continuación, levante suavemente el labio lejos del caparazón ventral restantes. Use las tijeras pequeñas para separar la parte ventral del estómago del tejido que recubre el caparazón. Cuando las ampollas pilórica son visibles, cortes en el estómago fuera de los tejidos a ambos lados de la misma hasta que el estómago se extrae de los cangrejos. </li><li> Todavía con el estómago por el labio con unas pinzas, descansar al estómago contra la palma de la mano y se vierte solución salina en la boca. Esto expande el estómago y hace que sea más fácil de abrir. Corte de la abertura de la boca hacia abajo entre el derecho a través del píloro huesecillos entre las ampollas. Luego se corta en diagonal hacia abajo a través de las dos ramas cardial. Cortar las puntas de los tres dientes en el interior del estómago. </li><li> Coloque el estómago a un grande, negro, recubierto Sylgard plato con el interior del estómago hacia abajo. Precisar las cinco esquinas de la preparación con alfileres de insectos y llenar el recipiente con solución salina fría, sumergir toda la preparación (ver figura 1). </li></ol> 2. La disección fina <ol><li> , Micro-disección se necesitan instrumentos para la disección fina. En particular, pinzas y tijeras de primavera son necesarias, así como un soporte de pasador con una aguja de tungsteno. Un claro Sylgard recubiertos, placa de Petri y algunos pines de alambre fino también debería haber estado preparado. </li><li> A partir del el aumento más bajo, comience por la fijación abajo las aletas cerca del borde que se utiliza para la apertura de la boca. Reorganizar el resto de los pines para hacer la preparación tensa y pin cualquier área que sea necesaria. </li><li> Levante con cuidado la hipodermis vio que cubre la parte inferior de la preparación y el ajuste que a través de dejar un trozo de la hipodermis, con dos puntos blancos. </li><li> Pelar el amarillo, el tejido ralo, membranosa en la parte inferior de la preparación. El mvns están débilmente unidas a la parte inferior de este tejido. Separe cuidadosamente los mvns del tejido amarillo que se levanta. Siga el tejido amarillo y corte junto con el cerebro. </li><li> Seguir los procesos de espesor de salir del cerebro que se extienden laterally. Estos son los nervios commisural. Una vez que el extremo del nervio comisural se alcanza, quite la masa de esponjosa, blanco tejido que ha sido cortada de la parte del cerebro. </li><li> Donde los iones y los hijos de cumplir con los engranajes, cortar el músculo y el tejido para revelar la duración de los iones y los hijos. </li><li> Volver a la revisión de la hipodermis visto y lo cortó. Esto debería dejar una abertura en la arteria que rodea el STG. Corte a través de la apertura para separar los dos músculos que flanquean el STG. Levante los extremos de estos músculos y cortado a la derecha por debajo de ellos para separarlos de la arteria y para exponer la alns y agns. Separar los músculos que flanquean tan arriba como el cartílago que está sobre la STN. </li><li> Cortar el tejido que rodea el STG arterial hasta donde el mvns, dgn, y dvn cumplir. Trabajar por la DVN a la LVNs y cortar a través del tejido blanquecino, delicada que cubre el LVN. </li><li> Localice el PSN en los huesecillos en la parte inferior de la preparación. El PSN se puede utilizar para localizar el LVN y la unión dlvn. </li><li> A continuación vienen las dlvn abajo para localizar el PYN y PDN. El PYN a menudo envuelve a la ampolla de la apertura del píloro. El PDN bifurca de la dlvn y se encuentra entre el píloro ampolla y los músculos cardio pilórica válvula. Deje un poco de músculo unido a uno de estos nervios, ya que pueden confundirse fácilmente cuando la preparación se transfiere a la clara fuente Sylgard. </li><li> Una vez que todos los nervios se han descubierto, separar las conexiones entre el resto de STNS y los nervios del tejido no deseado y del estómago. Cuidadosamente mueva el STNS lejos del resto del estómago, cortando las conexiones perdidas. </li><li> La condición del plato Sylgard claro con la masa restante de tejido del estómago por el roce sobre la superficie de la Sylgard hasta el Sylgard ya no se siente demasiado seca o pegajosa. Sylgard es hidrofóbica y la STNS se adhieren fuertemente a que si el plato Sylgard recubiertos no está condicionada de esta manera. </li><li> Agregue un poco de solución salina fría para el plato. Coge los extremos superiores de los nervios comisurales con fórceps y llevar a los STNS a la clara fuente Sylgard. </li><li> Pin de la STNS abajo sobre el Sylgard. Cortar el cerebro de los nervios comisurales y el uso de los pines minuten para asegurar los cuatro extremos de los engranajes en primer lugar. Asegúrese de que la preparación es la orientación adecuada, al verificar que la red IVN está apuntando hacia arriba fuera de la Sylgard. La DGN debería salir un poco por debajo de la STG, cuando el STG es lado derecho hacia arriba. Pin el resto de las terminaciones nerviosas hacia abajo con las patas de alambre fino. </li><li> Limpie cualquier resto de músculo o tejido del STNS. </li><li> Desheath la STG utilizando un soporte de pasador y un poco enganchado, con aguja fina, el tungsteno. Haz un pequeño agujero en un rincón de la vaina de STG lejos de los cuerpos celulares y el uso de ese agujero para llegar entre las capas de la vaina. Con cuidado, cortar una solapa de la cubierta separados para exponer el neuropilo STG y cuerpos celulares. </li><li> Pin cualquier solapas de la cubierta hacia abajo para aumentar la accesibilidad a los cuerpos celulares y para estabilizar la STG de registros intracelulares. Re-pin el resto de la STNS asegurar que cada nervio se tensa y repartidas para el registro extracelular (ver figura 3). </li></ol> 3. Resultados <ol><li> Lo ideal sería que todos los nervios deben estar libres de rasguños y daños, en particular los que se registrarán a partir. Ninguno de los nervios deben ser enredado o retorcido. El STG debe estar intacto con todas las células dispuestas en forma de barbas de todo el neuropilo. El STNS intacta es de simetría bilateral y se ve como un homúnculo con la LVNs como las piernas, la mvns como los brazos y el extremo anterior de la cabeza. </li></ol> Abreviaturas: <table border="1"><tbody><tr><td> STNS </td><td> Sistema nervioso Stomatogastric </td></tr><tr><td> STG </td><td> Ganglio Stomatogastric </td></tr><tr><td> COG </td><td> Ganglio comisural </td></tr><tr><td> OG </td><td> Ganglio esofágico </td></tr><tr><td> mvn </td><td> Nervio ventricular mediana </td></tr><tr><td> ion </td><td> Los nervios del esófago inferior </td></tr><tr><td> hijo </td><td> Los nervios del esófago superior </td></tr><tr><td> agn </td><td> Nervio anterior del estómago </td></tr><tr><td> aln </td><td> Nervio lateral anterior </td></tr><tr><td> dgn </td><td> Nervio dorsal gástrico </td></tr><tr><td> dvn </td><td> Nervio dorsal del ventrículo </td></tr><tr><td> LVN </td><td> Nervio lateral del ventrículo </td></tr><tr><td> psn </td><td> Los nervios del estómago posterior </td></tr><tr><td> PYN </td><td> Nervio pilórica </td></tr><tr><td> PDN </td><td> Nervio dilatador pilórica </td></tr><tr><td> dlvn </td><td> Rama dorsal del nervio lateral del ventrículo </td></tr><tr><td> ivn </td><td> Nervio inferior del ventrículo </td></tr></tbody></table><img src="/files/ftp_upload/1207/figure_1_90ppi.jpg" alt= &quot;Figura 1&quot; /&gt; Figura 1: Diagrama que muestra la ubicación aproximada de la STNS en el estómago antes de la disección. <img src="/files/ftp_upload/1207/figure_2_90ppi.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2: Diagrama de los distintos músculos en la parte inferior del estómago y una superposición de las STNS en verde claro. Cada tipo de célula en el STG está en la lista con los músculos que se sabe que inervan. Este mapa es útil en la planificación de la disección de un nervio que lleva la señal de una célula (cortesía del laboratorio de Nadim). <img src="/files/ftp_upload/old/1207_2009_1_12_5/figure_3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3: Diagrama esquemático de la STNS con electrodos intracelulares y extracelulares pozos (de Marder y Bucher, 2007).

<ol><li>Harris-Warrick, R. M., Marder, E., Selverston, A. I., Moulins, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHarris-Warrick%2C+RM+%22Dynamic+Biological+Networks%3A+The+stomatogastric+nervous+system%22">Dynamic Biological Networks: The stomatogastric nervous system</a>. , MIT Press. Boston. (1992).</li>
<li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+circuit+dynamics+using+the+stomatogastric+nervous+system+of+lobsters+and+crabs%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.</a> Annu. Rev. Physiol. 69, 291-316 (2007).</li>
<li>Maynard, D. M., Dando, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+structure+of+the+stomatogastric+neuromuscular+system+in+Callinectes+sapidus%2C+Homarus+Americanus+and+Panulirus+argus+%28Decapoda+crustacean%29%5BTitle%5D)+AND+%22Philos.+Trans.+R.+Soc.+Lond.+B+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The structure of the stomatogastric neuromuscular system in Callinectes sapidus, Homarus Americanus and Panulirus argus (Decapoda crustacean).</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 268 (892), 161-220 (1974).</li>
<li>Selverston, A. I., Russell, D. F., Miller, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Stomatogastric+Nervous+System%3A+Structure+and+function+of+a+small+neural+network%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">The Stomatogastric Nervous System: Structure and function of a small neural network.</a> Prog. Neurobiology. 7, 215-290 (1976).</li>
</ol>

La disección STNS es el primer paso en la realización de un experimento de electrofisiología o inmunohistoquímica, o para la obtención de células para el cultivo celular. Independientemente del experimento previsto, la disección bruto se mantendrá sin cambios. Sin embargo, la disección fina puede variar. Es importante planificar de antemano que las células y los nervios que va a grabar desde. La mayoría de las neuronas en el STG tienen procesos que inervan al menos un músculo en el estómago (ver figura 2) y se clasifica...

<table><tbody><tr><td>Sylgard negro 170</td><td>Otro</td><td>Dow Corning</td><td>170</td><td>Diseción gruesa</td></tr><tr><td>Tijeras finas</td><td>Cirugía</td><td>Fine Science Tools</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>Alfileres para insectos tamaño 6</td><td>Cirugía</td><td>Fine Science Tools</td><td>26000-65</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras Mayo</td><td>Cirugía</td><td>Fine Science Tools</td><td>14110-17</td><td></td></tr><tr><td>Microespátula</td><td>Cirugía</td><td>WARD&amp;rsquo;s Natural Science</td><td>15 V 4313</td><td></td></tr><tr><td>Rongeur</td><td>Cirugía</td><td>Fine Science Tools</td><td>16000-14</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas para tejidos</td><td>Cirugía</td><td>Fine Science Tools</td><td>11021-12</td><td></td></tr><tr><td>Alambre fino de tungsteno (diámetro de 0,001 in)</td><td>Cirugía</td><td>California Fine Wire Company</td><td></td><td>Diseción fina</td></tr><tr><td>Pinzas n.º 5</td><td>Cirugía</td><td>Fine Science Tools</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>Minutien Nadel</td><td>Cirugía</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte Moria (cuchillas de 7 mm)</td><td>Cirugía</td><td>Fine Science Tools</td><td>15370-52</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri (100x15 mm)</td><td>Otro</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>Soporte para alfileres</td><td>Cirugía</td><td>Fine Science Tools</td><td>26018-17</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas súper finas n.º 5SF</td><td>Cirugía</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 182</td><td>Otro</td><td>Dow Corning</td><td>182</td><td></td></tr><tr><td>Agujas de tungsteno</td><td>Cirugía</td><td>Fine Science Tools</td><td>10130-05</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio de disección</td><td>Microscopio</td><td>Wild</td><td>MC3</td><td>Varios</td></tr><tr><td>Cangrejo Jonah (&lt;em&gt;C. borealis&lt;/em&gt;)</td><td>Animal</td><td>Commercial Lobster</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

cáncer de borealis stomatogastric disección del sistema nervioso

Cancer Borealis Stomatogastric Nervous System Dissection

El ganglio stomatogastric (STG) es un excelente modelo para el estudio de las interacciones celulares y la red, ya que contiene un número relativamente pequeño de las células (aproximadamente 25 en C. borealis), que están bien caracterizados. Las células de la STG exhiben una amplia gama de productos y son responsables de las acciones motrices del estómago. El estómago contiene el molino gástrico, que descompone los alimentos con tres dientes internos, y el píloro, que filtra los alimentos antes de llegar al intestino. El STG produce dos salidas para controlar el ritmo del molino gástrico y el píloro conocido como generadores de patrones centrales (GPC). Cada celda de la STG se puede participar en uno o ambos de estos ritmos. Estas GPC permiten el estudio de la neuromodulación, la homeostasis, la variabilidad celular y de redes, desarrollo de redes, y la recuperación de la red. La disección del sistema nervioso stomatogastric (STNS) del cangrejo de Jonás (cáncer borealis) se realiza en dos partes: la disección fina y gruesa. En la disección bruto de todo el estómago se diseca del cangrejo. Durante la disección fina del STNS se extrae del estómago usando un microscopio de disección y la disección de micro-herramientas (ver figura 1). El STNS incluye la STG, el ganglio esofágico (OG), y los ganglios de la comisura (COG), así como los nervios que inervan los músculos del estómago. Aquí, se muestra cómo realizar una disección completa de los STNS en la preparación de un experimento de electrofisiología en las células de la STG se registrará a partir de la célula y los nervios periféricos se utilizan para las grabaciones extracelular. La técnica adecuada para encontrar los nervios deseada se muestra, así como nuestra técnica de desheathing el ganglio para revelar la somata y neuropilo.

El sistema nervioso stomatogastric (STNS) del cangrejo de Jonás (<em&gt; C. boreal</em&gt;) Se puede utilizar para electrofisiología, inmunohistoquímica y estudios en cultivos celulares. La extracción STNS se realiza en dos partes: la disección fina y gruesa.

Cáncer de Borealis Stomatogastric disección del sistema nervioso

El ganglio estomatogástrico (STG) es un modelo excelente para estudiar las interacciones celulares y de red debido a que contiene un número relativamente pequeño de...

Este procedimiento comienza con una disección macroscópica del estómago del cangrejo, en la cual se eliminan las apéndices y el carpo dorsal del animal. Se extrae completo el estómago del ejemplar. A continuación, se abre el estómago y se sujeta plano sobre un platillo negro de disección.Como preparación para la disección fina, se extrae el sistema nervioso gástrico de Steamatic del estómago y se transfiere a una placa de Petri limpia recubierta con Sard, donde se desvaina en preparación para un experimento de electrofisiología. Hola, me llamo Rachel Au del Laboratorio Martyr en la Universidad de Brandeis. Y yo soy Gabrielle Gutierrez, también del Laboratorio Martyr.Hoy les mostraremos un procedimiento para diseccionar el sistema nervioso gástrico somático del cangrejo Cancer borealis. En nuestro laboratorio utilizamos el sistema nervioso del cangrejo St NS para experimentos de electrofisiología, inmunohistoquímica y cultivo celular. Mediante esta red neuronal, podemos investigar varios principios fundamentales de la neurobiología, como la homeostasis de la neuromodulación, la variabilidad de la red, el desarrollo de la red y la recuperación de la red.Así que comencemos. Antes de iniciar la disección, el cangrejo debe entumecerse enterrándolo en hielo durante 30 minutos. Asegúrese de rodearlo por todos los lados con hielo.El hielo inactiva los sistemas sensorial y motor del cangrejo, pero es posible que el cangrejo aún sea reactivo cuando se retira, mientras se enfría. Prepárese para la disección macroscópica reuniendo el equipo necesario para esta parte del protocolo. La bandeja de disección, tijeras para hueso con mandíbulas Ron, tijeras pequeñas, pinzas dentadas, una espátula con borde estrecho, un recipiente recubierto con revestimiento negro y alfileres para insectos antes de comenzar.Protéjase poniéndose guantes. Una vez transcurridos 30 minutos, retire el cangrejo del cubo de hielo por su pata trasera. Para evitar ser pellizcado y antes de colocarlo en la bandeja de disección, retire las pinzas girando cada una hacia adentro.A continuación, retire cada pata utilizando el mismo movimiento de torsión. Ahora que el animal está sin apéndices, use el Ron Jos para retirar la maxila que cubre la boca y la maxila blanda. Usando nuevamente el Ron Jos, comience desde el extremo posterior lateral del carpo y asegúrese de tener un buen agarre en su borde. Presione firmemente con el Ron Jos y rompa esa porción del carpo.Asegúrese de eliminar suficiente parte del carpo para permitir que la espátula ingrese por la abertura. Continúe eliminando el borde del carpo hasta los ojos y repita en el otro lado. Con el lado estrecho de la espátula, raspe suavemente el tejido interno blando desde el techo del carpo dorsal.Mientras hace esto, mantenga la espátula en contacto con el carus. Para evitar dañar los STNS, use el Ron Jos para desprender partes del carus que se han separado del tejido. Separe el carus dorsal hasta donde haya dos pequeños S que sobresalen del carus.Corte lo más anterior posible. Estabilice el cefalón con un dedo mientras separa las partes más anteriores del caparazón dorsal. Separe algo del tejido blando del caparazón ventral.Asegúrese de separar todos los músculos aductores que sujetan el tejido al carpo en el lado ventral del carpo. Extraiga las mandíbulas una a la vez, anclando las quijadas incorrectas en una mandíbula y girando hacia afuera, tirando hacia fuera dos obstáculos largos; los músculos deben quedar adheridos a la mandíbula extraída. Si se realiza correctamente, separe el tejido de los lados del cefalón cerca de los ojos.Con la espátula y tijeras pequeñas de disección, corte capa por capa el tejido justo al lado de la cresta del osículo. Sostenga lo que queda del cangrejo contra la bandeja de disección. Utilizando las pinzas separadas, desprenda todo el labro del epístilo.Con las tijeras pequeñas, utilizando tijeras para corte de hueso, realice dos cortes diagonales en el carpo ventral. Para retirar el cefalón, tome ahora el labro con pinzas dentadas y corte el labio inferior desde el oscio en el lado ventral. Levante suavemente el labio del resto del carpo ventral.Utilice tijeras pequeñas para separar la parte ventral del estómago del tejido que recubre el carus. Cuando las pori cánulas sean visibles, corte el estómago del tejido a ambos lados hasta extraerlo del cangrejo, sosteniendo el estómago por el labio con pinzas. Apoye el estómago contra la palma de la mano y vierta solución salina en la boca.Esto expandirá el estómago y facilitará abrirlo con las tijeras pequeñas. Corte desde la abertura de la boca hacia abajo entre el ula, atravesando el obstáculo. Luego corte diagonalmente a través de las dos ramas cardio.Por último, corte las puntas de los tres dientes dentro del estómago. Coloque el estómago sobre un recipiente negro recubierto con sard, con la cara interna del estómago hacia abajo, para prepararlo para la disección fina. Sujete las cinco esquinas del estómago con alfileres entomológicos e introduzca la preparación en solución salina fría.La disección fina se realiza bajo el estereoscopio y requiere pinzas y tijeras de resorte, así como un portaagujas con una aguja de tungsteno. Debe prepararse previamente una placa de Petri con borde claro recubierta y algunos alfileres de alambre fino. Comenzando con el aumento más bajo, sujete con alfileres las aletas cercanas al labio que antes constituían la abertura bucal. Ahora tense la preparación reorganizando y agregando alfileres según sea necesario.Con pinzas, levante cuidadosamente la hipodermis moteada que cubre la parte inferior de la preparación y córtela transversalmente. Lo que debe quedar es un parche de hipodermis con dos puntos blancos. Ahora, retire la delgada membrana amarilla y filamentosa cerca de la parte inferior de la preparación. Los M vns están débilmente adheridos a la cara inferior de este tejido.Usando la hoja de las tijeras, separe cuidadosamente el VNS del tejido amarillo mientras se levanta. Corte el tejido amarillo junto con los pocos procesos blancos gruesos visibles del cerebro. Actualmente, la mayor parte del cerebro está enterrada en el tejido.Siga los procesos que se extienden lateralmente y hacia el labio. Estos son los dos nervios comisurales. Una vez encontrado el extremo del nervio comisural, retire el tejido esponjoso grueso de color blanco amarillento que se ha cortado del costado del cerebro.Localice el nervio óptico superior (iOS) y el sos en la unión donde se encuentran con los ganglios comisurales. Corte el músculo y el tejido para exponer la longitud de los nervios IO ns y so ns; estos dos nervios discurren medialmente desde los ganglios comisurales y se unen al nervio esofágico. Regrese al parche de hipodermis moteada y córtelo.Esto debería dejar una abertura en la arteria que rodea el STG. Corte a través de la abertura para separar los dos músculos que flanquean el STG. Levante los extremos de estos músculos y corte debajo de ellos para separarlos de la arteria. Este paso expone los ALNs.Retire los músculos laterales hasta la línea de cartílago por encima del STN. El TN es un nervio que discurre desde el STG y presenta una ligera protuberancia. A continuación, corte el tejido arterial que rodea al STG hasta el punto donde el M vns DGN y el DVN se unen.Siga el DVN mientras se divide en los dos LVN. Corte a través del tejido delicado de color blanquecino hasta que cada LVN quede completamente expuesto y se una con el DLVN. Localice el PSN sobre el Osco.Cerca de la parte inferior de la preparación, el PSN se puede utilizar para localizar la unión entre el LVN y el DLVN. De modo que el DV DLV va en esta dirección. Baja por aquí. Sí.Luego se divide y va en esta dirección. Correcto. Y entonces, lo que yo normalmente hago es localizarlos aquí abajo y voy retrocediendo hacia arriba. El PDN se separa del DLVN y se encuentra entre los músculos de la ULA y la válvula cardio pilórica. Sí. Aquí están la ampolla ula, ula ampolla, la P, la PYN justo aquí.Asegúrese de dejar algo de músculo adherido a uno de estos nervios como marcador para identificarlos entre sí. Una vez que todos los nervios hayan sido expuestos, corte cualquier conexión restante entre el STNS y el estómago. Finalmente, mueva cuidadosamente el STNS lejos del resto del estómago.Corte cualquier conexión restante. Prepare el plato protector S transparente frotando un poco de tejido estomacal sobre él hasta que se sienta húmedo y menos pegajoso. El STNS se adherirá firmemente al sogar.Si el platillo no está acondicionado de esta manera, agregue algo de solución salina fría fresca al platillo. Sujete los extremos superiores de los nervios comisurales con pinzas y mueva el NS estacionario al platillo de soagar claro. El cerebro seguirá unido a los nervios comisurales para evitar enredos.Ahora, prepare los STNS para fijarlos cortando el cerebro de los nervios comisurales. Utilice alfileres minuciosos para asegurar los cuatro extremos de los nervios comisurales al borde del soporte. Asegúrese de que la preparación esté en posición correcta verificando que el IVN apunte hacia arriba y que el DGN salga ligeramente por debajo del pin del STG.El resto del nervio se separa hacia abajo con alfileres de alambre fino utilizando pinzas y tijeras finas. Retire cuidadosamente cualquier músculo o tejido restante del STNS. Ahora el STG debe despojarse de su vaina utilizando un portaagujas con una aguja fina de tungsteno ligeramente curvada.Haga un pequeño orificio en la esquina de la vaina del STG, alejado de los cuerpos celulares. Introduzca suavemente la aguja de tungsteno en el orificio y colóquela entre la vaina y el Samara. Corte o desgarre suavemente una solapa de la vaina separada para exponer la pastilla neurogástrica del STG y los cuerpos celulares.Asegure cualquier solapa de la vaina para aumentar la accesibilidad a los cuerpos celulares y estabilizar el GTS para grabaciones intracelulares. Sujete el resto del SNTS asegurándose de que cada nervio quede tenso y bien espaciado para grabaciones extracelulares. Idealmente, todos los nervios deben estar libres de constricciones y daños, particularmente aquellos de los que realizará grabaciones.Ninguno de los nervios debe estar enredado ni torcido. El GST debe estar intacto, con todas sus células dispuestas en una formación de barba alrededor del pico del IN. El STN era bilateralmente simétrico y tiene forma de homúnculo, con las NIV como las piernas.El M vns son los brazos y el extremo anterior es la cabeza. Acabamos de mostrarle cómo diseccionar el sistema nervioso gástrico somático del cangrejo en preparación para un experimento de electrofisiología. Al realizar este procedimiento, es importante recordar diseccionar los nervios de los que planea registrar, siguiendo los nervios deseados hacia los músculos que se sabe que inervan.Asegúrese de que el STNS esté sujeto firmemente sobre el recipiente transparente tipo cigarro con el lado del STG sin vaina orientado hacia arriba. Eso es todo. Gracias por ver este video y buena suerte con sus experimentos.

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Investigación

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Biología

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La invasión perineural (PNI) es una característica común del carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (HNSCC), que confiere tasas de supervivencia más bajas. Sus mecanismos son poco conocidos. Utilizando neuritas generadas a partir de ganglios de la raíz dorsal murina confinados a una matriz semisólida, se pueden investigar las vías involucradas en el PNI de las líneas celulares HNSCC.

Un modelo para la invasión perineural en cabeza y cuello Carcinoma de células escamosas

Aquí te presentamos un protocolo para lesiones quirúrgicas mínimamente invasivas de los músculos intrínsecos al aparato de alimentación del molusco marino Aplysia californica para entender las funciones de estos músculos durante el comportamiento de alimentación.

Una técnica de lesión mínimamente invasiva para los músculos intrínsecos al odontoforo de Aplysia californica

Este protocolo presenta un método para obtener imágenes de la actividad de la población neuronal con resolución de una sola célula en especies de invertebrados no transgénicos utilizando colorantes sensibles al voltaje de absorbancia y una matriz de fotodiodos. Este enfoque permite un flujo de trabajo rápido, en el que las imágenes y el análisis se pueden realizar en el transcurso de un solo día.

Imágenes ópticas basadas en fotodiodos para registrar dinámicas de red con resolución de una sola neurona en invertebrados no transgénicos

El presente protocolo describe un modelo murino de ablación de inervación adrenérgica mediante la identificación y resección del ganglio cervical superior.

Técnica quirúrgica para la ganglionectomía cervical superior en un modelo murino

Aprende a disecar el sistema nervioso estomatogástrico de Cancer borealis para preparar el ganglio STG y nervios asociados en estudios de electrofisiología. Este protocolo detallado permite investigar circuitos neuronales y generadores de patrones motores en neurobiología.

Cáncer de Borealis Stomatogastric disección del sistema nervioso

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