Name: Gene-gun Transfección de las neuronas del hipocampo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: Aprende a realizar transfección con pistola de genes en neuronas del hipocampo. Este protocolo detalla el aislamiento de tejido cerebral y la preparación de muestras para estudios de neurociencia.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Los autores no tienen nada que revelar.

gene-gun transfección de las neuronas del hipocampo

Gene-gun Transfection of Hippocampal Neurons

Gene-gun Transfección de las neuronas del hipocampo

Hola, soy Kma. Trabajo en el Laboratorio Case de la Universidad de Brown. Etapa de limpieza con etanol al 70 %. Coloque la placa inserto en seis.Placa de cultivo con medio e incubar a 37 grados. Cerebro completo con pinzas entre el mesencéfalo y el cuarto ventrículo. Aislar el hipocampo de un lado, aislar el hipocampo del segundo lado. Colocar los hipocampos sobre una gota de PBS A.Aspire el PBS y realice secciones sagitales utilizando el cortador de tejidos. Transfiera repetidamente los cortadores a un recipiente con PBS, lavando las secciones mediante la adición y aspiración suave de PBS y medio. Separe las secciones con pinzas.Lave las secciones con PBS y medio. Nuevamente, transfiera las secciones a la placa e insértelas. Aspire el medio de las secciones utilizando pinzas.Conecte la manguera del cañón génico al cilindro de helio. Conecte el barril al cañón génico. Llene la recámara con balas.Inserte la cápsula en la pistola Jing. Ajuste la presión del tanque de helio para disparar. Aplique perlas recubiertas con EGFP sobre las secciones.Y ahora.

gene-gun-transfection-of-hippocampal-neurons

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Se describe un método para la preparación de las balas recubiertas de oro de ADN y demostrar el uso de balas como para transfectar biolistically neuronas en cultivos de rodajas de hipocampo.

Preparación de balas de cañón de genes y transfección biolística de neuronas en cultivo Cortar

Imágenes de células vivas es de particular utilidad en el estudio de la dinámica del tráfico de orgánulos. A continuación se describe un protocolo para obtener imágenes en vivo de alta densidad de núcleo vesículas en las neuronas cultivadas con amplio campo de la microscopía de fluorescencia. Este protocolo es flexible y puede adaptarse a los orgánulos de imagen como las mitocondrias, endosomas, y peroxisomas.

Imágenes en vivo del denso núcleo de vesículas en la Primaria neuronas del hipocampo cultivadas

Este protocolo describe los pasos necesarios para analizar, a través de la electroporación y transfectar neuronas del hipocampo del ratón y la cultura cortical. Corto plazo, las culturas pueden ser utilizados para los estudios del axón y la orientación, mientras que a largo plazo las culturas pueden ser utilizados para estudios de la sinaptogénesis y el análisis espina dendrítica.

Nucleofection y cultivos primarios de neuronas del hipocampo de embriones de ratón y corticales

Fuente: Keener, D. G., et al. Electroporación unicelular a través de diferentes cultivos de cortes organotípicos de neuronas inhibidoras excitadoras y específicas de clase del hipocampo de ratón. J. Vis. Exp. (2020).Este video demuestra el proceso de electroporación unicelular para introducir ADN plasmídico en las neuronas dentro de cultivos de cortes de hipocampo de ratón. El procedimiento implica un posicionamiento preciso de la pipeta, ajustes de presión y pulsos de electroporación para...

Expresión génica mediante electroporación unicelular en cultivos de cortes de hipocampo de ratón

Fuente: Denaxa, M., el al., Trasplante de progenitores interneuronales corticales modificados quimiogenéticamente en cerebros de ratón posnatales tempranos. J. Vis. Exp. (2019)Este video demuestra el procedimiento para inyectar un vector plásmido que lleva el gen de interés en progenitores interneuronales en un corte de cerebro embrionario, seguido de electroporación para la entrada de plásmidos y la expresión génica. Estos progenitores modificados se pueden usar más tarde para tratar...

Transferencia de genes asistida por electroporación integrada en agarosa en progenitores de interneuronas corticales de ratón

Precipitación con fosfato de calcio es un método conveniente y económico para la transfección de células cultivadas. Con la optimización, es posible utilizar este método en las células difíciles de transfectar tales como neuronas primarias. A continuación se describe el protocolo detallado para la transfección de fosfato de calcio de las neuronas del hipocampo cocultured con células astroglial.

Fosfato de Calcio La transfección de Primaria neuronas del hipocampo

Las recientes mejoras en las preparaciones organotípicas de cortes de cerebro han permitido su explotación para aplicaciones biotecnológicas. Los cortes organotípicos mantienen las características estructurales locales de la biología in vivo, incluidas las conexiones sinápticas funcionales. En este trabajo se presenta un método de administración biolística regioselectiva para etiquetar y manipular genéticamente estos cortes.

Regioselectiva biolística Focalización en Organotípicos cerebro rebanadas Usando una pistola de genes Modificado

Presentado aquí es un método de tubo de rodillo modificado para cultivo e intermitente proyección de imagen de alta resolución del cerebro de roedor rodajas durante muchas semanas con reposicionamiento preciso en photoetched cubreobjetos. Viabilidad neuronal y la morfología de la rebanada se mantienen bien. Se proporcionan aplicaciones de este sistema totalmente cerrado con virus para la expresión específica de tipo celular.

Método de tubo de rodillo modificado precisamente localizada y repetitiva imagen intermitente durante el cultivo a largo plazo de las rebanadas de cerebro en un sistema cerrado

Aquí se presenta un protocolo para la electroporación unicelular que puede entregar genes en neuronas excitatorias e inhibitorias a través de un rango de edades in vitro de cultivo de rebanadas de hipocampo. Nuestro enfoque proporciona una expresión precisa y eficiente de genes en células individuales, que se pueden utilizar para examinar las funciones intercelulares y autónomas de la célula.

Electroporación Unicelular A Través De Diferentes Cultivos Organotípicos Slice De Ratón Excitatorio Hipocampal Y Neuronas Inhibitorias Específicas De Clase

Esta técnica demuestra una forma eficiente de preparación defectuosa replicación retroviral acciones que codifica un oncogén humano, y, posteriormente, utilizado para la inducción de la enfermedad mieloproliferativa en el modelo de ratón.

La producción de replicación defectuosa Retrovirus por transfección transitoria de células 293T

Aprende a realizar transfección con pistola de genes en neuronas del hipocampo. Este protocolo detalla el aislamiento de tejido cerebral y la preparación de muestras para estudios de neurociencia.

Gene-gun Transfección de las neuronas del hipocampo

Explorar más videos