Name: Sabiendo lo que cuenta: Estereología imparcial en el cerebro de los primates no humanos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-14T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 25 s
Description: Aprende estereología imparcial para cuantificar neuronas en cerebro de primates no humanos usando atlas estereotáxico y disector óptico. Este método proporciona estimaciones precisas de poblaciones celulares en neurociencia.

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Los autores desean agradecer a Ikiel Ptito por su apoyo técnico continuo. NSERC otorgar a MP.

Parte 1: Pre-procesamiento de los tejidos se debe hacer de acuerdo con Burke et al. (2009) 5. <ol><li> En pocas palabras, el tejido debe estar bien perfundidos con paraformaldehido, glutaraldehido, o formalina. Esto se puede lograr a través de la perfusión estándar transcardial normalmente se utiliza para la cosecha de otros órganos. En el presente estudio el tema fue profundamente sedado con clorhidrato de ketamina (10 mg / kg, im), sacrificados con una sobredosis de pentobarbital sódico (25 mg / kg, iv) y perfundidos transcardially con PBS 0,1 M hasta que esté completamente desangrado. Esto es seguido por una solución de paraformaldehído al 4% en PBS durante 5 minutos (aproximadamente 1 litro). El tejido debe estar bien perfundidos con paraformaldeyhde, glutaraldehído, o formalina. El cerebro debe ser stereotaxically bloqueado, removido del cráneo, se pesa, volumen determinado, crioprotegieron y congelado 5. </li></ol> Parte 2: Muestreo sistemático de tejido, de acuerdo con Burke et al. (2009) 6. <ol><li> En este ejemplo nos hemos centrado en el lóbulo frontal del cerebro, los monos verdes. El espacio de referencia se ha definido para incluir tejido cortical del surco central en el polo frontal del hemisferio izquierdo. Para nuestros propósitos, la serie se fija en 1 / 10 secciones a lo largo de la corteza, en secciones de 50 micras. Una serie completa se tiñó con violeta de cresilo (serie n º 1). Serie 2 se dividió de manera que la mitad de las secciones fueron teñidas con cloruro de oro para la revelación de la mielina y la otra mitad para el teñido de la acetilcolinesterasa (por la delimitación de ciertas áreas subcorticales). Todas las otras series fueron donados al banco de antígenos preservar como parte de nuestros planes de investigación a largo plazo. </li></ol> Parte 3: Estereología (para más detalles, consulte Mouton 2002) 4 <ol><li> La estimación total de número de células (N) se calcula con base en la siguiente ecuación: N = ssf -1 x -1 x asf tsf -1 x Σ Q - Ssf donde es la fracción de muestreo sección, asf es la fracción de muestreo por áreas, TSF, si la fracción de muestreo de espesor (en el que se mida su espesor del tejido se divide por la altura disector), y Q Σ - es el número total de objetos de interés contar en el disector. Las siguientes secciones de este protocolo se muestra cómo determinar el ssf, asf, TSF y Q Σ. </li><li> Sección fracción de muestreo (sin computadora) <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> El espacio de referencia en su totalidad debe estar bien definido de anterior a posterior y dorsal a ventral. En este ejemplo estamos interesados ​​en el lóbulo frontal y lo han definido como la región de la punta del polo frontal (anterior) con el surco (posterior) y el surco lateral (ventral) y se excluyó la ínsula. </li><li> Para el lóbulo frontal de este tema en particular un total de 760 secciones se recogieron de forma sistemática con 76 teñidas con violeta de cresilo. Puesto que el objetivo era de 10 secciones en todo el espacio de referencia en las secciones 6.1 cresil violeta manchado en la muestra, dando lugar a una fracción de la muestra la sección de alrededor de 1 / 60. Aleatoriamente se inició con uno de los primeros seis secciones cresil violeta manchado y muestreos sistemáticos 01.06 en adelante. Un total de 13 secciones se tomaron muestras para el motivo seleccionado (Figura 2). </li></ol></li><li> Área de fracción de la muestra (computer-based) <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Un estudio piloto indica el tamaño de la malla óptima, la fracción de muestreo de Área, a la muestra el espacio de referencia con alrededor de 100-300 disectors. En el lóbulo frontal, una malla de 2500 m 2 se obtuvo un promedio de 254 disectors para este tema (Figura 2). El tamaño del disector debe producir entre alrededor de 0-5 objetos contados, en este caso, las neuronas. </li></ol></li><li> Espesor fracción de la muestra (computer-based) <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> En cada lugar disector, la altura de los tejidos se mide, y una fracción de esta muestra es la altura, lo que se conoce como la fracción de muestreo de espesor. Para determinar el espesor medido, el enfoque a través del plano z hasta la primera celda se enfoca, de nuevo hacia arriba un poco a la parte superior de la sección, es decir, hasta el último objeto que aparece justo fuera de foco. Para determinar la parte inferior del tejido, el enfoque a través del plano z hasta que las células son poco fuera de foco. </li><li> Centrándose por el plano z, las células deben teñirse en todas las profundidades, si no, esto puede indicar una penetración incompleta de la deshidratación mancha o no uniforme de los tejidos, en cuyo caso las secciones deben ser re-manchado. Esta precaución es especialmente importante para el tejido immunostained que requiere la penetración de immunoprobes a través de secciones de tejido relativamente grueso. Por esta razón, el tejido immunostained debe ser ligeramente counterstained con una mancha de basófilos (violeta, por ejemplo, cresilo, hematoxylin) con el fin de determinar con precisión la parte superior e inferior de la sección y para confirmar la penetración de los anticuerpos. En este estudio, las secciones fueron cortadas con un ajuste de microtomo de 50 micras. Después de todo el procesamiento del tejido se completa, el grosor del tejido mide un promedio de 17.9μm (Figura 2), con una contracción promedio de alrededor del 65%. Tenga en cuenta que estos resultados representan la contracción típica de los tejidos procesados ​​para la preparación histológica de rutina 7. </li><li> La altura del disector por defecto para el estudio típico es 10μm. La diferencia entre la altura del disector y el espesor de corte se mide la altura de guardia, el volumen de tejido en las características biológicas no son contados. El uso de una altura de guardia evita daños en los tejidos en las superficies de corte (por ejemplo, pérdida de tapas). </li></ol></li><li> El número total de objetos contados, Σ Q - <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Para evitar el sesgo de los errores de reconocimiento, es imperativo que una definición estándar es seguido por la particularidad biológica de interés. En este caso, estamos interesados ​​en contar las neuronas. Por lo tanto, una neurona se define como tener un nucléolo visible situado en el centro y un citoplasma bien definido, mientras que las células gliales en general carecían de nucléolos visibles y el citoplasma. Para este tema 457 neuronas fueron contados. </li></ol></li></ol> Parte 4: Stereologer - Un sistema computarizado Estereología (Estereología Centro de Recursos, Chester, MD) <ol><li> El Sistema de Stereologer pide al usuario que rellene la información necesaria en una manera paso a paso. En el &quot;Estudio de la información&quot; sección de los parámetros del estudio se han establecido. Desde un espacio de referencia debe estar definido para el estudio, el parámetro de volumen deben ser seleccionados (para el espacio de referencia en el estimador de Cavalieri debe estar seleccionado). El volumen de objetos también pueden ser seleccionados desde aquí para calcular el número ponderado por el volumen de la población de objetos de interés. Para nuestro ejemplo, sólo el volumen del espacio de referencia seleccionado. Para cada objeto, seleccionar el número y definir la característica de interés, en este caso las neuronas. </li><li> Inicialización caso: En esta sección la información de muestreo se ha establecido. Introduzca el intervalo de muestreo de la losa (si las losas separadas de tejido fueron cortadas de manera exhaustiva y cada sección se coloca en orden secuencial a continuación, introduzca una aquí). Escriba el número total de secciones tomadas a través del espacio de referencia (en este caso 760). A continuación, introduzca el intervalo de muestreo sección (en este caso 59). El sistema calcula el número de secciones que se muestra (en este caso 13). </li><li> Los parámetros de la sonda: En esta sección se define la red y el tamaño del disector. Para el volumen, utilice un bajo aumento de 2.5x-10x para definir el espaciado de cuadrícula en el menú de edición. Ampliación del objeto debe realizarse a 100x (NA 1.3 o 1.4). Área de marco es el tamaño de la disector, en este caso se utilizó el 50% de la pantalla. La altura del marco es el espesor de la disector, fijado en 10μm aquí. La clara de cuadernas es el tamaño de la cuadrícula. En nuestro estudio piloto se encontró que los rendimientos de entre 150-200 2500μm marcos separados de una manera sistemática, uniforme a través de un espacio de referencia relativamente grande. Para áreas más pequeñas, un tamaño de malla más pequeña debe ser utilizado. Un estudio piloto identificará los parámetros de la sonda óptica para cada estudio en particular. </li><li> Una vez que los parámetros del estudio se han establecido, a través de la toma de muestras de tejidos puede continuar. El programa le pedirá que muestra la primera sección. Paso 1: El programa le pedirá al usuario, con bajo aumento, para rastrear el espacio de referencia en la sección. Entonces, el sistema colocará una malla en la sección sobre la base de los parámetros de la sonda y el usuario se va a verificar que los puntos comprendidos en el espacio de referencia. Si un punto no se encuentra dentro del espacio de referencia, simplemente haga clic en el punto y no aparecen calculados en el volumen. Paso 2: El sistema coloca una nueva red en el espacio de referencia, en base a los parámetros de marco espacio. Verifique que las intersecciones están comprendidas en el espacio de referencia. Paso 3: El sistema le pedirá al usuario que cambie con el objetivo de aumento más alto y mover el escenario para el disector primero. Paso 4: En este punto, el sistema solicita al usuario definir el superior e inferior de la sección, entonces el sistema establece el espacio de muestreo en el Paso del eje z 5:. El usuario hará clic en cada objeto que cae en el disector por el plano z. Los objetos que tocan las líneas rojas o la parte inferior de la disector no podrán ser contados. Una vez que cada objeto se cuenta, haga clic en siguiente. El escenario se moverá a la siguiente disector y los pasos 4 y 5 se repetirá. Una vez que todos los disectors de la sección han sido contadas, el sistema le pedirá al usuario que inserte la sección siguiente secuencia que se probaron. Los pasos 1-5 se repite hasta que todas las secciones secuenciales tienenhan tomado muestras. Entonces, el sistema proporcionará a los cálculos de la ASF, SSF, TSF, y Q Σ. En base a estos parámetros, el sistema generará un estimado de N, el volumen de referencia y la CE, tanto para el número estimado y el volumen. También se dan recomendaciones para ser más eficientes o para reducir la CE (Figura 2). </li></ol> Parte 5: Resultados del representante: Estereología imparcial proporciona estimaciones eficientes y fiables de las poblaciones de células dentro de un espacio de referencia. Hay una serie de sistemas basados ​​en computadoras estereológica disponibles, todos los cuales se basan en un muestreo sistemático y un espacio de referencia definidos. Hemos utilizado el sistema de vida Bioquant Ciencias para estimar el total de la población neuronal de la corteza cerebral de 2 años de edad, los monos verdes a más de 828 millones (Figura 3) con un promedio de 0,042 CE. Posteriormente hemos utilizado el sistema Stereologer para estimar que las cuentas del lóbulo frontal cerca de la mitad el número de neuronas corticales 8. <img src="/files/ftp_upload/1262/1262fig1.jpg" alt="la figura 1" /> Figura 1 Los sistemas computarizados de Estereología. La configuración básica de los sistemas de estereología es lo mismo, un microscopio con una platina motorizada (xyz), un controlador de fase, una cámara de vídeo, ordenador y software. El sistema que finalmente se escogerán en función de la eficiencia, las necesidades y análisis de costos. <div style="border:1px #000000 solid"><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> ESTUDIO DE LA INFORMACIÓN </td></tr><tr><td> Nombre del estudio </td><td> La corteza frontal </td></tr><tr><td> Investigador Principal </td><td> MB </td></tr><tr><td> Especies </td><td> AG </td></tr><tr><td> Referencia del espacio frontal </td><td> Corteza </td></tr><tr><td colspan="2"> Notas </td></tr><tr><td colspan="2"> CASO DE INFORMACIÓN </td></tr><tr><td> Recopiladores de datos </td><td> MB </td></tr><tr><td> Fecha </td><td> Miércoles, 30 de abril 2008 </td></tr><tr><td> Grupo </td><td> Control </td></tr><tr><td> Tema </td><td> O26 </td></tr><tr><td colspan="2"> Notas </td></tr><tr><td colspan="2"> CARACTERÍSTICAS DE MUESTREO </td></tr><tr><td> Intervalo de muestreo de la losa </td><td> 1 </td></tr><tr><td> Número total de las secciones </td><td> 760 </td></tr><tr><td> Sección Intervalo de Muestreo </td><td> 59 </td></tr><tr><td> Sección de partida </td><td> 2 </td></tr><tr><td colspan="2"> FRACCIONES </td></tr><tr><td> ASF </td><td> 0,0002 </td></tr><tr><td> SlabSF </td><td> 1,0000 </td></tr><tr><td> SSF </td><td> 0,0169 </td></tr><tr><td> TSF </td><td> 0,5587 </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="6"> RESUMEN DE LOS RESULTADOS </td></tr><tr><td> Parámetro </td><td> Sonda </td><td> Nombre </td><td> Resultado </td><td> CE </td><td> SD </td></tr><tr><td> Espesor </td><td> --- </td><td> --- </td><td> 17.8996 μ </td><td> --- </td><td> --- </td></tr><tr><td> Número </td><td> Disector </td><td> neurona </td><td> 243833769.1473 </td><td> 0,0474 </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Volumen </td><td> Cavalieri punto de la cuadrícula </td><td> volumen </td><td> 1719769397954.1284 μ ^ 3 </td><td> 0,0078 </td><td> N / A </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> RECOMENDACIONES </td></tr><tr><td> Sonda </td><td> Número de objetos (las neuronas) </td></tr><tr><td> CE </td><td> 0,0474 </td></tr><tr><td> Recomendaciones </td><td> CE es aceptable. </td></tr></tbody></table&gt; <table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> Número de Disectors visto es muy alto, aumentar el espaciado Disector. </td></tr><tr><td> Sonda </td><td> Región de volumen (volumen) </td></tr><tr><td> CE </td><td> 0,0078 </td></tr><tr><td> Recomendaciones </td><td> CE es aceptable. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="3"> RESULTADOS SECCIÓN </td></tr><tr><td> Sección </td><td> neurona NumObjects NumCorners neurona </td><td> RegPoints volumen </td></tr><tr><td> 1. 40 </td><td> 48 </td><td> 34 </td></tr><tr><td> 2. 26 </td><td> 52 </td><td> 44 </td></tr><tr><td> 3. 29 </td><td> 56 </td><td> 48 </td></tr><tr><td> 4. 39 </td><td> 100 </td><td> 83 </td></tr><tr><td> 5. 49 </td><td> 112 </td><td> 83 </td></tr><tr><td> 6. 53 </td><td> 156 </td><td> 120 </td></tr><tr><td> 7. 65 </td><td> 128 </td><td> 106 </td></tr><tr><td> 8. 45 </td><td> 108 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> 9. 52 </td><td> 100 </td><td> 77 </td></tr><tr><td> 10. 26 </td><td> 64 </td><td> 60 </td></tr><tr><td> 11. 21 </td><td> 44 </td><td> 44 </td></tr><tr><td> 12. 11 </td><td> 36 </td><td> 32 </td></tr><tr><td> 13. 1 </td><td> 12 </td><td> 6 </td></tr></tbody></table></div> Figura 2 Resultados de la Lobe Fontal obtenidos con el sistema Stereologer. Para el lóbulo frontal, la parte más larga del proceso estereológica estaba en el muestreo sistemático y el corte. Estimación de la topografía, el volumen y neuronal se completa en aproximadamente un día por cada tema. El hemisferio izquierdo se muestra y el número se duplica en el texto de una estimación aproximada de los dos hemisferios. <img src="/files/ftp_upload/1262/1262fig3.jpg" alt="la figura 3" /> Figura 3 Estimación de la corteza de la población neuronal obtenidos con Bioquant. El sistema Bioquant requiere una topografía exacta antes de que el recuento de células. Aquí un promedio de 13 secciones se tomaron muestras. Topografía cortical y la estimación del volumen posterior se entre 15-20 horas para cada tema. La topografía se realizó bajo un objetivo 2,5 x y el recuento se realizó con un objetivo de inmersión 100x (NA 1.3). Cada sección 100a fue elegido en todo el hemisferio izquierdo, con un promedio de 180 disectors la muestra. Una vez que la topografía se terminó de contar neuronal tomó cerca de un día. El hemisferio izquierdo se muestra y el número se duplica en el texto de una estimación aproximada de los dos hemisferios.

<ol><li>West, M., Slomianka, L., Gundersen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+stereological+estimation+of+the+total+number+of+neurons+in+the+subdivisions+of+the+rat+hippocampus+using+the+optical+fractionator%5BTitle%5D)+AND+%22Aat+Rec%22%5BJournal%5D)">Unbiased stereological estimation of the total number of neurons in the subdivisions of the rat hippocampus using the optical fractionator.</a> Aat Rec. 231, 482-497 (1991).</li>
<li>Saper, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Any+way+you+cut+it%3A+a+new+journal+policy+for+the+use+of+unbiased+counting+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Any way you cut it: a new journal policy for the use of unbiased counting methods.</a> J Comp Neurol. 364, 5-5 (1996).</li>
<li>Sterio, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+unbiased+estimation+of+number+and+sizes+of+arbitrary+particles+using+the+disector%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">The unbiased estimation of number and sizes of arbitrary particles using the disector.</a> J Microsc. 134, 127-136 (1984).</li>
<li>Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMouton%2C+PR+%22Principles+and+Practices+of+Unbiased+Stereology%22">Principles and Practices of Unbiased Stereology</a>. , The Johns Hopkins University Press. Baltimore. (2002).</li>
<li>Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+the+non-human+primate+brain+in+stereotaxic+space%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissecting the non-human primate brain in stereotaxic space.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
<li>Burke, M. W., Zangenehpour, S., Boire, D., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+banking%3A+Making+the+most+of+your+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Brain banking: Making the most of your research.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
<li>Manaye, K. F., Wang, P., O'Neil, J., Huafu, S., Tizabi, Y., Thompson, N., Ottinger, M. A., Ingram, D. K., Mouton, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuropathological+Quantification+Of+Dtg+APP%2FPS1%3A+Neuroimaging%2C+Stereology%2C+And+Biochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22AGE%22%5BJournal%5D)">Neuropathological Quantification Of Dtg APP/PS1: Neuroimaging, Stereology, And Biochemistry.</a> AGE. 29, 87-96 (2009).</li>
<li>Burke, M. W., Palmour, R. M., Ervin, F. R., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuronal+reduction+in+frontal+cortex+of+primates+after+prenatal+alcohol+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Neuronal reduction in frontal cortex of primates after prenatal alcohol exposure.</a> Neuroreport. 20, 13-17 (2009).</li>
<li>Zangenehpour, S., Burke, M. W., Chaudhuri, A., Ptito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Batch+immunostaining+for+large-scale+protein+detection+in+the+whole+monkey+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Batch immunostaining for large-scale protein detection in the whole monkey brain.</a> J Vis Exp. 29, (2009).</li>
</ol>

Estereología imparcial en un cerebro de los primates es similar a la de otras muestras biológicas. Sin embargo, dado el tamaño del cerebro de los primates, un plan de tratamiento cuidadoso, se recomienda desde un solo hemisferio de los monos verdes se obtienen más de 1200 secciones en rodajas a 50 micras. En primer lugar se recomienda stereotaxically bloqueando el cerebro en bloques de 1 cm, que proporciona un avión estándar de la sección entre los bloques y temas, minimiza las secciones parciales entre los bloques y bl...

<table><tbody><tr><td>Stereologer</td><td>Centro de Recursos de Estereología (Chester, MD)</td><td>www.disector.com</td><td></td></tr><tr><td>Sistema Stereology Tool-Kit Stereologer</td><td>BioQuant Life Sciences (Nashville, TN)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>StereoInvestigator</td><td>MBF Bioscience</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

sabiendo lo que cuenta: estereología imparcial en el cerebro de los primates no humanos

Knowing What Counts: Unbiased Stereology in the Non-human Primate Brain

Los primates no humanos es una importante especie de traslación para entender los procesos normales de funcionamiento y las enfermedades del cerebro humano. Estereología imparcial, el método aceptado como estado de la técnica para la cuantificación de los objetos biológicos en secciones de tejido<sup&gt; 2</sup&gt;, Genera datos fiables sobre la estructura de las características biológicas en el cerebro de los mamíferos<sup&gt; 3</sup&gt;. Los componentes clave del enfoque son imparciales (sistemática aleatoria) de muestreo de las estructuras anatómicas definidas (los espacios de referencia), en combinación con la cuantificación del número de células y las longitudes de tamaño, la fibra capilar y, superficies, volúmenes regionales y la distribución espacial de los objetos biológicos en el espacio de referencia<sup&gt; 4</sup&gt;. Entre las ventajas de estos métodos estereológicos sobre los métodos anteriores es la prevención de todas las fuentes conocidas de error sistemático (no aleatorio) que surgen de suposiciones incorrectas y modelos que no son verificables. Este estudio documenta una aplicación biológica de estereología computarizado para estimar la población total de neuronas en la corteza frontal del cerebro, los monos verdes (<em&gt; Chlorocebus aethiops sabeus</em&gt;), Con la ayuda de dos programas estereología disponibles en el mercado, Ciencias de la Vida y Bioquant Stereologer (Figura 1). Además de contraste y la comparación de los resultados tanto de la Bioquant y<em&gt; Stereologer</em&gt; Sistemas, este estudio proporciona un protocolo detallado para la<em&gt; Stereologer</em&gt; Sistema.

La organización anatómica del cerebro de los primates puede proporcionar información importante sobre las condiciones normales y patológicas en los seres humanos. Estereología imparcial es un método de forma precisa y eficiente la estimación del número de neuronas total (o otro tipo de células) en un espacio de referencia dado<sup&gt; 1</sup&gt;.

Sabiendo lo que cuenta: Estereología imparcial en el cerebro de los primates no humanos

El primate no humano es una especie traslacional importante para comprender la función normal y los procesos patológicos del cerebro humano. De manera imparcial...

Este procedimiento comienza definiendo el espacio de referencia. Un atlas estereotáxico puede ser útil para determinar los límites del área de interés. A continuación, organice los portaobjetos y determine la frecuencia de muestreo de las secciones.Inserte la primera sección que se va a muestrear en el microscopio y complete los parámetros de muestreo. En el sistema estereológico, se colocará una cuadrícula sobre el espacio de referencia y en cada intersección se tomará una muestra mediante el disector óptico. Una vez que se hayan muestreado todos los disectores ópticos en cada sección, el sistema estereológico proporcionará los resultados del estudio.Hola, soy el Dr. Mark Burke del Laboratorio de Neurociencias Visuales de la Escuela de Optometría de la Universidad de Montreal. Hola, soy la Dra. Shaheen Zur, también del Laboratorio de Neurociencias Visuales de la Escuela de Optometría de la Universidad de Montreal. Hola, soy el Dr. Morris Petto, director del Laboratorio de Neurociencia Visual de la Escuela de Optometría de la Universidad de Montreal.Hoy les mostraremos un procedimiento para realizar radiología imparcial en primates no humanos. Utilizamos este procedimiento en nuest

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Biología

Los primates no humanos es una importante especie de traslación para nuestra comprensión del proceso normal del cerebro. La organización anatómica del cerebro de los primates puede proporcionar información importante sobre las condiciones normales y patológicas en los seres humanos.

La disección de cerebro de los primates no humanos en el espacio estereotáxica

Banca cerebro y el muestreo sistemático de la materia biológica constituye la base para estereología imparcial y maximiza el potencial de los datos obtenidos de cada ejemplar.

Banca cerebro: Aprovechar al máximo las muestras de su investigación

Fuente: Olesen, M. V., et al. La técnica del fraccionador óptico para estimar el número de células en un modelo de rata de terapia electroconvulsiva. J. Vis. Exp. (2017).  El video muestra la técnica para cuantificar las neuronas recién generadas en el tejido cerebral. Los cortes de tejido del hipocampo que contenían neuronas marcadas con bromodeoxiuridina (BrdU) se tiñeron mediante inmunohistoquímica y posteriormente se cuantificaron a lo largo del espesor del tejido mediante la técnica de...

Cuantificación de neuronas recién generadas en tejido cerebral de rata mediante la técnica del fraccionador óptico

Procedimientos de corte cerebrales organizados son necesarios para correlacionar fenómenos neuropsiquiátricos específicos con diagnósticos neuropatológicos definitivas. esquejes cerebrales se realizan de manera diferente en base a diversas contingencias clínico-académica. Este protocolo describe un procedimiento de corte cerebro bihemisférica simétrica para investigar las diferencias hemisféricas en patologías del cerebro humano y para maximizar las técnicas biomoleculares / neuroimagen...

Simétrica bihemisférica post-mortem del cerebro de corte para estudiar sana y patológica condiciones cerebrales en humanos

Este protocolo describe reconstrucciones a gran escala de poblaciones neuronales selectivas, etiquetadas después de la infección retrógrada con un virus de la rabia modificado expresan marcadores fluorescentes, y analiza, racimo imparcial independiente que permiten la caracterización completa de las métricas morfológicas entre subclases neuronales distintas.

Las reconstrucciones de gran escala e imparcial La agrupación independiente, basada en métricas morfológicas para clasificar las neuronas en poblaciones selectivos

Aquí presentamos un método estereológico, el fraccionador óptico, utilizado para cuantificar la formación de nuevas neuronas, y su supervivencia, en el hipocampo de rata después de la estimulación electroconvulsiva. Cuando se implementa correctamente, la sensibilidad y eficiencia de los métodos estereológicos garantiza estimaciones precisas con una precisión fija y predeterminada.

La técnica del fraccionador óptico para estimar los números de células en un modelo de rata de terapia electroconvulsiva

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Estereológicos estimación de número de la neurona dopaminérgica en el Nigra del Substantia de ratón usando el fraccionador óptico y equipo de microscopía estándar

El método descrito a continuación tiene como objetivo proporcionar un protocolo completo para la preparación de neurocirugía de primates no humanos (NHP) utilizando una novedosa combinación de métodos de impresión tridimensionales (3D) y extracción de datos por resonancia magnética.

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Imágenes unicelulares de todo el cerebro y análisis de cerebros de ratones neonatales intactos mediante resonancia magnética, limpieza de tejidos y microscopía de hoja de luz

La tomografía de dos fotones en serie (STPT) es una técnica para obtener imágenes de una masa de tejido en su forma tridimensional mediante la combinación de imágenes de dos fotones con el control automático de la etapa y el corte de micrótomos. Aquí describimos un protocolo para implementarlo en cerebros de tití para comprender mejor sus características estructurales.

Tomografía seriada de dos fotones de todo el cerebro del tití para análisis neuroanatómicos

Las neurociencias modernas necesitan explorar las diferencias entre muchas especies, incluidos los roedores de laboratorio y los humanos. Sin embargo, surgen dificultades técnicas cuando se trata de mamíferos de cerebro grande. Este enfoque aborda la variación interespecie de poblaciones neuronales en mamíferos muy diferentes, produciendo resultados comparables que se pueden mapear para revelar patrones evolutivos.

Un enfoque comparativo para estudios cuantitativos de recuento celular en cerebros de mamíferos muy diferentes

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