Name: Generación de un solo suspensiones de células de tejido de ratón Neural (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-07T19:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 17 s
Description: Aprende a generar suspensiones de células individuales de tejido neural de ratón usando el disociador gentleMACS. Este método preserva la viabilidad celular y los epítopos de antígenos para estudios de neurociencia.

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Para trabajar en condiciones estériles, se recomienda llevar a cabo todos los pasos en una campana de flujo laminar. 1. Materiales <ul><li> La disociación del tejido neural Kit (P) (Componentes: Solución de 1,2, 3 y 4, del buffer de almacenamiento) </li><li> Separación de los pre-filtros </li><li> (Opcional) La mielina bolas de eliminación </li><li> Beta-mercaptoetanol </li><li> gentleMACS disociador </li><li> C Tubos </li><li> MACSmix rotador del tubo </li><li> HBSS (w / o) </li><li> HBSS (w) </li></ul><ol><li> Prepare las siguientes soluciones antes de iniciar el protocolo: <ol><li> Buffered Hanks Solución salina sin cationes divalentes Ca 2 + o Mg 2 + (HBSS (w / o) </li><li> HBSS, estándar, es decir, con Ca 2 + y Mg 2 + (HBSS (w) </li></ol></li><li> Dependiendo del epítopo del antígeno de interés en las aplicaciones posteriores, utilice la papaína basada en tejidos neuronales disociación Kit (P) o la tripsina basada en tejidos neuronales disociación Kit (T). </li><li> Prepare las siguientes soluciones de Neural tejidos disociación del kit: <ol><li> Solución 2: añadir beta-mercaptoetanol al 0,067 mM </li><li> Solución 4: disolver el polvo en 0,7 ml de Buffer de almacenamiento (incluye en el kit), mezcle suavemente (no vortex) </li><li> Mezcle una enzima: Pipetear 1,9 ml de la Solución 2 y 50 l Solución 1 (tanto de equipo) en un tubo C e incubar durante 10-15 min a 37 ° C. Esto es suficiente para disociar 400 mg de tejido cerebral. </li></ol></li></ol> 2. Disociar el tejido neural <ol><li> Pesar el tejido cerebral en un tubo que contiene 1 ml HBSS (w / o) </li><li> Transferencia de cerebro de ratón en el tubo C que contiene 1950 l de mezcla de enzimas precalentado 1. (NOTA: este protocolo está destinado a ≤ 400 mg, pero los volúmenes de solución se pueden ampliar para dar cabida a hasta 1600 mg de tejido cerebral por tubo C) </li><li> Coloque el tubo de C en el disociador gentleMACS y ejecutar el programa "m_brain_01". </li><li> Incubar con la rotación (4 rpm con un rotor de tubo MACSmix) durante 15 minutos a 37 ° C. </li><li> Coloque el tubo de C en el disociador gentleMACS y ejecutar el programa "m_brain_02". </li><li> Durante el paso de la disociación preparar 30 l de mezcla de enzimas del 2 por 400 mg de tejido con cuidado mezcla de 20 l de solución de 3 y 10 l de solución 4. </li><li> Añadir la mezcla de enzimas 2 del metro a través de la C-tabique sellado tapa y mezcle suavemente sin agitación. </li><li> Incubar el tubo C con rotación de 10 min a 37 ° C en una incubadora. </li><li> Coloque el tubo de C en el disociador gentleMACS y ejecutar el programa "m_brain_03". </li><li> Incubar el tubo C con rotación de 10 min a 37 ° C en una incubadora. </li><li> Centrifugar brevemente para recoger la muestra en la parte inferior del tubo. </li></ol> 3. Filtración <ol><li> Seleccione un filtro lo suficientemente grandes para permitir el paso de las células de interés. Por ejemplo, las células de Purkinje son demasiado grandes para pasar a través de un filtro de 30 micras, pero Prominin-1 + células. </li><li> Use una pipeta de l suitable1000 para eliminar las células forma el tubo de C a través del tabique sellado la tapa y aplicarlo a la Pre-filtro de separación en un tubo de recogida de 15 ml. (NOTA: para mayor tamaño de la muestra utiliza un tubo de recogida de 50 ml). </li><li> Lavar el filtro con 10 ml de HBSS (w). </li><li> Centrifugar las células filtrada a 300 xg durante 10 min a temperatura ambiente. </li><li> Resuspender el sobrenadante en el medio o de amortiguamiento de la elección para aplicaciones posteriores. </li><li> Para eliminar los restos de mielina, la mielina utilizar bolas de eliminación. </li></ol> 4. Resultados representante: Por favor, véanse las Figuras 1-3 <img src="/files/ftp_upload/1267/Fig_1.png" alt="fig 1"> Figura. 1 La disociación del cerebro con el disociador gentleMACS resultó en 97% las células viables, como lo muestra el flujo de análisis de citometría. <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig2.png" alt="fig 2"> Figura. 2 imagen microscopio de luz de la formación de neuroesfera después de la clasificación de células magnético utilizando Anti-Prominin-1 MicroBeads después de 7 días de cultivo en MACS ® NeuroMedium complementado con MACS Suplemento B27 PLUS. Las células fueron preparados a partir de cerebro de ratón CD1 (P3), utilizando el tejido neural disociación Kit (P). <img src="/files/ftp_upload/1267/1267fig4.jpg" alt="fig 3.5"> Figura. 3 restos de mielina en una sola célula suspensiones constituyendo una grave amenaza de aislamiento de células y la eliminación de los residuos de mielina por bolas eliminación de mielina aumenta la eficiencia de separación celular. Las separaciones de MACS con Anti-Prominin-1 MicroBeads, P22 cerebro de ratón se disocian con el tejido neural disociación Kit (P). Las células de la suspensión de una sola célula eran utilizados directamente para la separación, o se presentaron a la mielina agotamiento utilizando bolas de mielina eliminación. Comparación de la separación de las muestras con y sin la eliminación de mielina, demuestra que la pureza es mayor para las muestras con la eliminación de mielina anterior.

<ol><li>Hardt, O., Scholz, C., Küsters, D., Yanagawa, Y., Pennartz, S., Cremer, H., Bosio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+analysis+defines+differences+between+region-specific+GABAergic+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Gene expression analysis defines differences between region-specific GABAergic neurons.</a> Mol Cell Neurosci. 39, 418-428 (2008).</li>
<li>Lee, J. K., McCoy, M. K., Harms, A. S., Ruhn, K. A., Gold, S. J., Tansey, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulator+of+G-protein+signaling+10+promotes+dopaminergic+neuron+survival+via+regulation+of+the+microglial+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regulator of G-protein signaling 10 promotes dopaminergic neuron survival via regulation of the microglial inflammatory response.</a> J Neurosci. 28, 8517-8528 (2008).</li>
<li>Környei, Z., Gócza, E., Rühl, R., Orsolits, B., Vörös, E., Szabó, B., Vágovits, B., Madarász, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astroglia-derived+retinoic+acid+is+a+key+factor+in+glia-induced+neurogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Astroglia-derived retinoic acid is a key factor in glia-induced neurogenesis.</a> FASEB J. 21, 2496-2509 (2007).</li>
<li>Meylan, F., Davidson, T. S., Kahle, E., Kinder, M., Acharya, K., Jankovic, D., Bundoc, V., Hodges, M., Shevach, E. M., Keane-Myers, A., Wang, E. C., Siegel, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+TNF-family+receptor+DR3+is+essential+for+diverse+T+cell-mediated+inflammatory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The TNF-family receptor DR3 is essential for diverse T cell-mediated inflammatory diseases.</a> Immunity. 29, 79-89 (2008).</li>
<li>Skog, J., Würdinger, T., van Rijn, S., Meijer, D. H., Gainche, L., Sena-Esteves, M., Curry, W. T. Jr, Carter, B. S., Krichevsky, A. M., Breakefield, X. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma+microvesicles+transport+RNA+and+proteins+that+promote+tumour+growth+and+provide+diagnostic+biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma microvesicles transport RNA and proteins that promote tumour growth and provide diagnostic biomarkers.</a> Nat Cell Biol. 10, 1470-1476 (2008).</li>
</ol>

Los autores son empleados de Miltenyi Biotec GmbH, Alemania.

El disociador gentleMACS facilita la preparación estandarizada de una sola célula suspensiones de tejidos nerviosos en un sistema cerrado. Neuronal del tejido Kits disociación están optimizados para conservar epítopos antígeno necesario para otras aplicaciones como immunostainings y separación celular inmunomagnética 1-5. En este protocolo se muestra la disociación enzimática suave del cerebro del ratón con el disociador gentleMACS y el tejido neural disociación Kit (P), produciendo en las células de un 97% viable. 100 mg de tejido nervioso entre los rendimientos de 5x10 6 y 1x10 7 células, dependiendo de la edad de los tejidos del huésped. El objetivo 1 Prominin células + fueron aislados usando Anti-Prominin-1 MicroBeads y luego fueron a la cultura. El protocolo se demuestra que es aún más eficaz con el uso adicional de bolas de eliminación de la mielina cuando se trabaja con el tejido neural derivados de ratones P7&gt;.

<table><tbody><tr><td>Tubos C</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N.º de pedido 130-093-237</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>gentleMACS&amp;#8482; Kit de inicio</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N.º de pedido 130-093-235</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>MACSmix&amp;#8482; Rotador de tubos</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N.º de pedido 130-090-753</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Kit de disociación de tejido neural (P)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N.º de pedido 130-092-628</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Filtros previos a la separación</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N.º de pedido 130-041-407</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_247_Pre_Separation_Filters.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Microperlas anti-Prominin-1</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N.º de pedido 130-092-333</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_654_524_Anti_Prominin_1_MicroBeads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_654_524_Anti_Prominin_1_MicroBeads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Anti-Prominin-1-APC</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N.º de pedido 130-092-335</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_525_Anti_Prominin_1.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_525_Anti_Prominin_1.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Perlas de eliminación de mielina</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N.º de pedido 130-094-544</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_688_Myelin_Removal_Beads.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_688_Myelin_Removal_Beads.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Puntas de pipeta Art 1000 Reach </td><td>Molecular BioProducts</td><td>N.º de pedido 2079</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61&lt;/a&gt;&lt;br/&gt;&lt;a href=&quot;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&quot;&gt;http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Kit de disociación de tejido neural (T)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N.º de pedido 130-093-231</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_712_656_Neural_Tissue_Dissociation_Kits.aspx&lt;/a&gt;</td></tr><tr><td>Solución de yoduro de propidio</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>N.º de pedido 130-093-233</td><td>&lt;a href=&quot;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&quot;&gt;http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx&lt;/a&gt;</td></tr></tbody></table>

generación de un solo suspensiones de células de tejido de ratón neural

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Dentro del sistema nervioso, cientos de tipos de células neuronales y gliales han sido descritos. Cada tipo específico de célula en el cerebro o la médula espinal tiene un repertorio de moléculas de superficie celular, o determinantes moleculares, a través del cual pueden ser identificados y caracterizados. En la actualidad, la identificación de células robusto y tecnologías de separación requiere una sola célula preparaciones que se generen al mismo tiempo limitar la muerte celular y la destrucción de la proteína de la superficie característica. El disociador gentleMACS, cuando se utiliza en combinación con tripsina o papaína más los paquetes de la disociación, puede con eficacia y suavidad disociar el tejido cerebral, mientras que la preservación de los epítopos del antígeno y la limitación de la pérdida de células. Preparación estandarizada de una sola célula suspensiones se consigue mediante tubos de C y los programas optimizados preestablecidos gentleMACS. Una vez generados, una sola célula suspensiones pueden ser tratadas con los conjugados monoclonales como el anti-Prominin-1 MicroBeads, que identifican progenitores neurales, o purificado utilizando bolas de mielina eliminación.

Disociar las células de tipos específicos de tejido requiere de parámetros específicos para aggitation tejido para obtener un alto volumen de células viables, cultivables. El Miltenyi gentleMACS disociador optimiza esta tarea con un protocolo simple y práctico. En esta publicación, el uso de este aparato en el tejido nerual se explica.

Generación de un solo suspensiones de células de tejido de ratón Neural

Dentro del sistema nervioso, se han descrito cientos de tipos de células neuronales y gliales. Cada tipo celular específico en el cerebro o la médula espinal tiene un...

Dentro del sistema nervioso, se han descrito cientos de tipos celulares neuronales y gliales. Cada tipo celular específico en el cerebro o la médula espinal posee un repertorio de moléculas de superficie celular o determinantes moleculares mediante los cuales puede ser identificado y caracterizado.Actualmente, las tecnologías robustas de identificación y separación celular requieren la generación de preparaciones de célula individual, limitando simultáneamente la muerte celular y la destrucción de proteínas superficiales características. El max asociador suave, cuando se utiliza en combinación con kits de disociación a base de tripsina o pepane, puede disociar eficaz y suavemente el tejido cerebral mientras conserva los epítopos antigénicos y minimiza la pérdida celular. Una vez generadas, las suspensiones celulares individuales pueden tratarse con conjugados monoclonales como microperlas anti promine uno, que identifican progenitores neurales, o purificarse adicionalmente utilizando microperlas de eliminación de mielina.Hola, me llamo Sandra PeNAT. Soy directora de proyectos para productos de neurociencia en Mil Biotech aquí en Bagage Gabert, Alemania. Hoy les mostraré cómo preparar una suspensión de células individuales a partir de tejido cerebral de ratón utilizando el disociador Genix.El disociador genix es un dispositivo que puede disociar una variedad de tipos de tejidos en un entorno estéril cerrado, eliminando así la necesidad de una disociación mecánica manual tediosa. Comencemos. Dependiendo del epítopo antigénico de interés en aplicaciones posteriores, utilice el kit de disociación de tejido neural basado en papaína o el kit de disociación de tejido neural basado en tripsina.Para el experimento de hoy, preferimos el kit de disociación de tejido nervioso P, ya que deseamos aislar células positivas prominentes utilizando microperlas anti prominina uno. La prominina uno no es sensible ni a pepán ni a tripsina, y en tal caso, el kit de disociación de tejido nervioso P es la mejor opción. Antes de iniciar el protocolo, deben prepararse los reactivos y soluciones para este kit.Tenga a mano su propio stock de solución salina equilibrada de Hank (HBSS) sin iones de calcio y iones de magnesio, HBSS con calcio y magnesio, y beta-mercaptoetanol. Comience por preparar la solución dos, la solución cuatro y posteriormente la mezcla de enzimas uno. Primero, añada beta-mercaptoetanol a la solución dos hasta una concentración final de 0,067 milimolar.La solución ahora es estable hasta un mes cuando se almacena a cuatro grados Celsius. A continuación, disuelva el polvo liofilizado y una solución etiquetada en un vial. Cuatro. Utilice 0,7 mililitros de tampón de almacenamiento y mezcle suavemente sin usar vórtex.Ahora prepare la mezcla de enzimas uno pipeteando 1900 microlitros de la solución dos y 50 microlitros de la solución uno en un tubo C. Esta cantidad de solución es suficiente para disociar 400 miligramos de tejido; por lo tanto, si se va a disociar más cantidad, prepare mezcla adicional de enzimas uno. Se puede procesar un máximo de 1600 miligramos de tejido cerebral en un tubo C.La mezcla enzimática uno en el tubo C se incuba luego a 37 grados Celsius durante 10 a 15 minutos. Para iniciar la disocición, pipetee un mililitro de HBSS sin iones de calcio y magnesio dentro del tubo. Coloque el tubo sobre una balanza, agregue el tejido cerebral y registre su masa. Este cerebro de ratón P cuatro pesa aproximadamente 0,2 gramos. Un cerebro adulto pesaría alrededor de 0,4 gramos para todas las muestras de tejido menores de 400 miligramos. Los volúmenes de solución que usaremos hoy son adecuados.Si su tejido pesa más de 400 miligramos, aumente proporcionalmente todos los volúmenes de los reactivos; se puede procesar hasta un tejido de 1600 miligramos en un tubo C. Transfiera el cerebro del ratón al tubo C preparado que contiene 1.950 microlitros de enzima precalentada. Mezcle una vez y cierre herméticamente la tapa.Ahora coloque el tubo C en el asociador Gen Max con la tapa hacia abajo y asegúrese de que el tejido se encuentre en la zona del estator. Seleccione el programa MCO brain O uno y ejecute el programa. Este es el primero de los tres programas que ejecutará durante la disociación; cuando finalice el programa.Retire el tubo C e incube la muestra durante 15 minutos a 37 grados Celsius bajo rotación lenta continua. Utilizando el rotador de tubos max mix, el modo de funcionamiento del dispositivo corresponde a cuatro RPM. Después de la primera incubación, coloque nuevamente el tubo en la disociación boca abajo y ejecute el programa M brain O2. Durante la siguiente asociación, prepare 30 microlitros de mezcla enzimática dos por cada 400 miligramos de tejido agregando 20 microlitros de la solución tres a 10 microlitros de la solución cuatro.Cuando finalice el segundo ciclo de asociación, agregue 30 microlitros de la mezcla de enzimas 2 al tubo C directamente a través de la abertura sellada con septo en el centro de la tapa. Para garantizar la esterilidad, invierta suavemente el tubo C para mezclar y no use el vortex. Luego, coloque nuevamente el tubo C en el rotador de tubos max mix e incube la muestra durante 10 minutos a 37 grados Celsius con agitación de cuatro RPM.Luego, la unidad CTU se devuelve al disociador suave max por tercera y última vez, y se ejecuta el programa M brain oh tres. Cuando finalice el tercer programa, coloque los tubos C en el rotador e incube durante 10 minutos adicionales a 37 grados Celsius. Ahora, centrifugue brevemente la muestra para recoger las células en el fondo del tubo.Ahora estamos listos para filtrar las células. Elija un filtro celular según el tamaño de su tipo celular de interés. Si las células que desea recolectar tienen más de 30 micrómetros de diámetro, como las células kinji, el tamaño de los poros debe ser lo suficientemente grande como para permitir el paso de cuerpos celulares de este diámetro.Para células positivas prominentes, funcionará un filtro de 30 micrómetros. Retire el tejido disociado del tubo C utilizando puntas de pipeta de 1000 microlitros que pasen a través de la abertura sellada con septum en la tapa del tubo C. Aplique la suspensión celular al filtro de preseparación colocado sobre un tubo colector de 15 mililitros.Para tamaños de muestra más grandes, puede ser necesario un tubo de 50 mililitros. Permita que la suspensión celular pase a través del filtro. Luego lave el filtro añadiendo 10 mililitros de solución HBSS con iones de calcio y magnesio.Cuando se trabaje con cantidades de tejido superiores a 400 miligramos, utilice hasta 30 mililitros de HBSS con iones de calcio y magnesio para lavar el filtro. Ahora, pelletice las células en el tubo de recolección mediante centrifugación a 300 G durante 10 minutos a temperatura ambiente, aspire completamente el sobrenadante y resuspenda el pellet celular en el tampón o medio de su elección. En este punto, puede optar por eliminar cualquier resto de mielina, ya que este material puede dificultar el aislamiento celular y la tinción con anticuerpos.Para eliminar los restos de mielina, sugerimos usar microesferas de eliminación de mielina. De lo contrario, las células están listas para su uso posterior. Este diagrama de puntos basado en la tinción con yoduro de propidio indica que el 97 % de las células presentes en una suspensión de células individuales a partir de un esguince de ratón doméstico, como la suspensión generada en este video, son viables.Estas células pueden purificarse aún más utilizando microperlas anti prominent para obtener precursores neuronales, los cuales, cuando se cultivan en medio max neuro suplementado con B 27 plus, pueden formar neuroesferas en estos gráficos de puntos. Se observa el beneficio de tratar las suspensiones con microperlas de eliminación de mielina. Se obtiene un porcentaje significativamente mayor de precursores neuronales que expresan prominent uno mediante separación max tras el agotamiento de mielina a partir de una suspensión de células individuales.Acabo de mostrarle cómo preparar una suspensión de células individuales a partir de tejido cerebral de ratón utilizando la disociación genix y el kit de disociación de tejido neural. Al realizar este procedimiento, es importante tener todas las soluciones preparadas adecuadamente según la elección correcta del kit de disociación de tejido neural, T o P. Consulte la nota de aplicación NDK o la hoja técnica. Mediante este método, se pueden procesar secciones de tejido embrionario así como de D o cerebro completo, bajo condiciones estériles, de manera estandarizada y ahorrando tiempo.Gracias por ver el video y mucha suerte en sus experimentos.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este vídeo describe el método utilizado para el aislamiento de neuroprecursors de la corteza en desarrollo de embriones de ratones. El procedimiento para la eliminación de embriones del útero, la disección de los tejidos corticales, y la digestión de la corteza cerebral aislada se muestra.

Cultura de ratón con células madre neurales Precursores

Un método sencillo y fiable en el aislamiento y cultivo de células madre neurales en humanos descartados tejido cortical fetal se describe. Cultivos derivados de enfermedades neurológicas conocidas humanos pueden ser utilizados para la caracterización de los patológicos procesos celulares y moleculares, así como ofrecer una plataforma para evaluar la eficacia farmacológica.

Generación de las células troncales nerviosas de desechados Humanos tejido cortical fetal

Este video muestra un método para aislar células madre del cerebelo postnatal del ratón y diferenciarlas en células neuronales. Las células madre de la suspensión celular aislada se purifican utilizando perlas magnéticas recubiertas de anticuerpos y se cultivan para formar neuroesferas. A continuación, las neuroesferas se mantienen en un medio de diferenciación para generar células neuronales.

Aislamiento de células madre del cerebelo postnatal de ratón y diferenciación en células neurales

Este video muestra un protocolo para obtener una suspensión unicelular altamente viable del hipocampo del cerebro del ratón utilizando una combinación de disociación mecánica automatizada y una mezcla de enzimas para ayudar en la digestión enzimática.

Obtención de una suspensión unicelular a partir de tejido del hipocampo de ratón

El video muestra la preparación de una suspensión unicelular de células inmunitarias a partir de un tejido cerebral murino. Implica la digestión enzimática para liberar células del tejido cerebral, seguida de la centrifugación en gradiente de densidad para aislar las células inmunitarias en función de sus densidades para obtener la suspensión unicelular.

Preparación de una suspensión unicelular de células inmunitarias a partir de tejido cerebral murino

Aquí se describe un protocolo detallado para la generación simultánea de cultivos de células precursoras neurales, ya sea como monocapas o neuroesferas adherentes, de la zona subventricular y giro dentado de ratones adultos individuales.

Un ratón, dos culturas: Aislamiento y cultivo de adultos Neural las células madre de las dos zonas neurogénicos de ratones individuales

El establecimiento de sistemas de cultivo para la expansión de células madre neurales adultas (aNSCs) permite el examen y la aplicación de aNSCs para la terapia. La zona subcallosa (SCZ) ha sido reconocida recientemente como una nueva región formadora de neuroblastos en ratones adultos. Aquí, se describen los métodos para el aislamiento, la expansión y la diferenciación de las SCZ-aNSC.

Aislamiento y cultivo de células madre adultas neural de la Zona subcallosal Ratón

Aquí, presentamos una nueva técnica microquirúrgica para el aislamiento de las células madre neurales de la eminencia gangliónica E13 ratón embrión.

Aislamiento y cultivo de las células madre neurales embrionarias de ratón

Aquí, describimos un sistema de nucleofección diseñado para mejorar la eficiencia de la entrega de genes en células madre neurales expandidas (NSC) aisladas de la zona subventricular murina adulta. Los hallazgos demuestran que este método mejora significativamente la perturbación génica en las NSC, superando la efectividad de los protocolos tradicionales de transfección y mejorando la tasa de supervivencia celular.

Aislamiento, expansión y nucleofección de células madre neurales de la zona subventricular murina adulta

Para investigar la respuesta inmunitaria a los trastornos cerebrales, un enfoque común es analizar los cambios en las células inmunitarias. Aquí, se proporcionan dos protocolos simples y efectivos para aislar células inmunitarias del tejido cerebral murino y la médula ósea del cráneo.

Aislamiento de células inmunitarias del cerebro y el cráneo de ratones

Aprende a generar suspensiones de células individuales de tejido neural de ratón usando el disociador gentleMACS. Este método preserva la viabilidad celular y los epítopos de antígenos para estudios de neurociencia.

Generación de un solo suspensiones de células de tejido de ratón Neural

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