Creación de murino Experimental aneurismas de aorta abdominal con elastasa

Este procedimiento quirúrgico utilizado para crear un aneurisma aórtico abdominal comienza con una incisión abdominal media. Se desplazan a un lado las vísceras abdominales y se ligan todas las ramas aórticas. Las porciones proximal y distal de la aorta se atan.

El corazón se perfora con una aguja y se administra una perfusión abundante de elastasa a través de un tubo de polietileno con extremo calentado. Cuando la perfusión finaliza, se cierra la autoamputación de la AOR. Se retiran las ligaduras, la aorta se llena de sangre y se cierra la cavidad abdominal.

A continuación, se permite que el ratón se recupere y la aneurisma estará completamente dilatada en 14 días. Hola, soy Julian Asma del laboratorio de Células Fetales del Departamento de Medicina Cardiovascular de la Universidad de Stanford. Hoy les mostraré el procedimiento para inyectar una nueva aneurisma experimental de la aorta abdominal con elastasa.

Utilizamos este procedimiento en su laboratorio para estudiar los EP del arte abdominal S. Así que comencemos. Para iniciar sus experimentos, seleccione un ratón de interés, por ejemplo, un ratón C57 negro seis, y anestésielo con iso fluorina inhalada hasta que el ratón esté inconsciente. Tenga en cuenta que diferentes cepas de ratones variarán en la tasa de crecimiento de aneurismas.

Saque el ratón anestesiado de la cámara en una estación de preparación adecuadamente iluminada. Afeite el vello del abdomen desde el extremo del hueso púbico hasta la raíz de las patas. Utilice una crema depilatoria para eliminar el vello excesivo.

Frote la piel desnuda con alcohol al 70 % hasta que todos los pelos hayan sido eliminados de la zona afeitada. Luego, frote la piel un mínimo de tres veces con Betadine, intercalando fricciones con alcohol entre cada frotación. A continuación, coloque al ratón en posición supina sobre el campo operatorio para mantenerlo inconsciente.

Durante la cirugía, coloque un tubo en la nariz que administre iso fluorano a la misma velocidad de flujo utilizada para inducir la inconsciencia. La elastasa se mantiene sobre hielo y se extrae en una jeringa. Luego, la jeringa se sujeta con una pinza y se coloca junto al campo operatorio, y se conecta el catéter.

Es importante que la punta del catéter permanezca estéril, lo cual se logra colocando la punta en un vial estéril. Antes de realizar la incisión en el ratón, asegúrese de que se utilizará una técnica estéril. Comience poniéndose guantes estériles.

Los instrumentos quirúrgicos, tijeras, portaagujas y pinzas deben desinfectarse antes de la cirugía. Tómese un momento para ser consciente de sus preparativos e intente corregir cualquier otra fuente potencial de contaminación durante la cirugía. Si se rompe la técnica estéril durante el procedimiento, vuelva a esterilizar su instrumento en un esterilizador de cuentas calientes.

Una vez que todo esté preparado, comience la cirugía con una incisión abdominal media larga dentro de la cavidad abdominal. Desplace el contenido abdominal hacia el espacio abdominal libre o retráigalo fuera del abdomen con gasa estéril para exponer la aorta abdominal. Ahora use fórceps para aislar cuidadosamente la aorta abdominal desde el nivel de la vena renal izquierda hasta la bifurcación.

En el caso mostrado, hay una única rama que se encuentra por encima del sitio donde ligamos la aorta y, por lo tanto, no necesita ser atada. Si existen ramas aórticas entre los sitios de las ligaduras aórticas distal y proximal, entonces ligue las ramas a menos de un centímetro de la bifurcación con 10 suturas aut; en las porciones proximal y distal de la aorta, coloque ligaduras temporales de seda 6.0 para detener el flujo sanguíneo.

Ahora realice una autotomía en la bifurcación. Comience perforando la bifurcación con una aguja de calibre 30. Puede introducirse un tubo de polietileno cónico calentado a través de la autotomía de la AOR y fijarse con un nudo.

Utilice la pinza para insertar cuidadosa y suavemente el tubo en la aorta. Tenga cuidado de no despojar la capa endotelial aplicando una presión de 100 mililitros. Se perfundió la aorta con elastasa mediante mercurio desde una bolsa de solución salina colocada a una altura de 136 centímetros.

Asegúrese de que no haya aire en el tubo, de lo contrario la presión no será exacta. La solución salina contiene 4,5 unidades por mililitro. Elastasa pancreática porcina tipo I, y debe llenar la aorta en cinco a 15 minutos.

Durante la perfusión, la aorta generalmente se dilata hasta aproximadamente el 140% de su diámetro original. Una vez finalizada, retire la perfusión y cierre la autotomía aórtica con una sutura de calibre 10 para evitar la constricción. Después de cerrar la autotomía, también se debe retirar la ligadura distal.

Si hay poca o ninguna hemorragia en la autotomía reparada, se retira la ligadura proximal. Si hay sangrado, coloque ligaduras temporales adicionales de sutura 6.0 en las porciones proximal y distal de la aorta y agregue una sutura más para cerrar completamente la autotomía de la AOR. La aorta expandida se llenará de sangre inmediatamente después de retirar la ligadura proximal.

Una vez finalizado el procedimiento en la aorta, devuelva los intestinos al abdomen. Si fueron retraídos, los intestinos entrarán como una unidad grande y no será necesario preocuparse por su geometría. Con todos los órganos en su lugar, ahora se puede cerrar la herida externa en dos capas con seis suturas de nylon aut y polipropileno.

Ahora administre al ratón un anestésico local, como una gota de boop al 0,25 % ICAN por centímetro de incisión. También administre una dosis del antiinflamatorio Carin a cinco miligramos por kilogramo mediante inyección subcutánea. La cirugía ha finalizado y el ratón debe colocarse en un área tibia donde pueda recuperar la conciencia.

La recuperación generalmente ocurre dentro de los 15 minutos. Cuando el ratón recupera la conciencia, se devuelve a una jaula individual y se monitorea periódicamente durante su recuperación. Después del procedimiento, la aorta suele dilatarse hasta aproximadamente el 140 al 160 % de su diámetro original.

Esta dilatación inicial se observa con estabilización hasta el día siete. Ocurre una dilatación secundaria rápida entre el día siete y el día 14. En el día 14, se puede observar el aneurisma en la aorta infrarrenal.

Acabo de mostrarle cómo inducir un aneurisma aórtico abdominal con elastasa en ratones. Al realizar este procedimiento, es importante evitar la formación de coágulos sanguíneos dentro de la aorta. Eso es todo.

Gracias por ver el video y buena suerte con su experimento.