Medición de la presión arterial en ratones con registro del volumen de presión, un método de la cola del manguito
15 de mayo de 2009
El CODA de 8 canales de alto rendimiento sistema no invasivo de presión arterial mide la presión arterial hasta en 8 ratones o ratas de forma simultánea. Este sistema utiliza la cola del manguito de registro del volumen de presión (VPR) para medir la presión arterial mediante la determinación del volumen de sangre cola.
La palabra coda es italiana y significa cola. El sistema no invasivo de presión arterial Coda permite la medición de la presión arterial en roedores, gracias a un sensor especializado de registro de volumen y presión que mide los cambios en el volumen sanguíneo de la cola cuando se coloca sobre la cola de un animal. Este video demuestra cómo configurar el sistema, preparar a los animales y obtener mediciones de presión arterial en ocho animales simultáneamente.
Hola, soy Anju Bala Krishnan, trabajando en el laboratorio de Alan Dougherty del Centro de Investigación Cardiovascular de la Universidad de Kentucky, Lexington. Hoy les mostraremos un procedimiento para medir la presión arterial en ratones utilizando el método de registro de volumen y presión con manguito caudal. Utilizamos este procedimiento en nuestro laboratorio para estudiar el sistema cardiovascular.
Así que comencemos. Para configurar el sistema CODA, seleccione un área en el laboratorio donde la temperatura ambiente sea estable y de 20 grados Celsius o superior. Evite ubicaciones cercanas a rejillas de aire acondicionado, ya que exponer a los animales a ruidos fuertes u olores puede irritarlos o causarles estrés.
Los olores animales pueden incluir cualquier perfume fuerte que pueda estar utilizando. Encienda el controlador Coda y luego las plataformas de calentamiento, que deben estar ajustadas al nivel tres. Si la temperatura ambiente es superior a 25 grados Celsius, comience en los niveles uno o dos.
Realice primero la prueba de diagnóstico del controlador; abra el software Coda. Seleccione el dispositivo Coda haciendo clic sobre él. Haga clic en probar dispositivo seleccionado.
Seleccione las mangas y canales que se probarán y haga clic en probar. Una vez finalizada la prueba de diagnóstico del controlador, cierre la ventana de prueba del dispositivo. Seleccione el código del controlador que se utilizará y luego haga clic.
Utilice estos dispositivos para configurar el software. Seleccione herramientas para gestionar el personal. A continuación, haga clic en investigador uno.
Para cambiar el nombre, haga clic en las filas siguientes para agregar investigadores adicionales. Luego haga clic en guardar datos. Haga clic en la pestaña de técnicos para modificar o agregar técnicos.
A continuación, haga clic en la pestaña especímenes para nombrar los animales y facilitar su identificación, así como para seleccionar el tipo de animal. Luego, haga clic en guardar datos. Finalmente, haga clic en la pestaña animales.
Para modificar el tipo de animal y la sensibilidad, haga clic en guardar datos y luego cierre. Para comenzar un nuevo experimento, seleccione archivo Nuevo experimento. Ingrese el nombre del experimento, seleccione al investigador principal y elija una fecha de inicio.
Haga clic en siguiente. El siguiente paso consiste en ingresar la información básica de la sesión. Comience ingresando el nombre de la sesión, establezca los ciclos de aclimatación en cinco; si prefiere no incluir ciclos de aclimatación, establézcalos en cero.
Configure el número de series en una, el tiempo entre series en 30 segundos para múltiples series, ciclos por serie en 20 ciclos y el tiempo entre ciclos en cinco segundos. Luego haga clic en siguiente.
Para comenzar la selección de la muestra, seleccione la muestra del grupo de muestras y asígnela al primer canal disponible. Y haga clic en siguiente para establecer los parámetros de la sesión. Establezca la presión máxima de oclusión en 250 milímetros.
Tiempo de desinflado del mercurio a 20 segundos. Para ratones, volumen mínimo a 15 microlitros y estilo de visualización a un canal por gráfico. También puede agregar investigadores y técnicos adicionales.
Luego haga clic en siguiente. Revise el guion de la sesión y haga clic en siguiente. No seleccione finalizar hasta que complete la sección de preparación del animal, que se describe a continuación.
Ahora puede recuperar los animales y colocarlos junto al sistema de presión arterial coda. Antes de colocar los animales en los soportes, observe el tamaño de cada animal en relación con el tamaño del soporte seleccionado. El animal debe poder entrar libremente en el soporte.
Coloque cada animal en un soporte tomándolo por la cola y colocándolo suavemente en la parte trasera del soporte, que mira hacia el extremo abierto del cono nasal. Asegure cuidadosamente la tapa trasera al soporte girando el tornillo de la tapa trasera. Tenga cuidado de no atrapar la cola ni ninguna otra parte del cuerpo al asegurar la tapa trasera.
Diapositiva siguiente. El cono nasal hacia la escotilla trasera. Limitando el movimiento del animal.
El cono nasal debe estar en una posición que limite al animal para girar. Mientras esté dentro del soporte, coloque el soporte sobre la plataforma de calentamiento. En la posición designada, permita que el animal se aclimate al soporte durante al menos cinco minutos.
No toque ni manipule al animal. Mientras esté dentro del soporte, el contacto aumentado podría irritar al animal, y nunca deje al animal en el soporte sin supervisión. Para colocar correctamente la correa oclusiva en la cola, pase la cola a través de la correa oclusiva y coloque la correa lo más cerca posible de la base de la cola sin aplicar fuerza.
A continuación, pase la cola a través de la manga del sensor VPR, colocándola a menos de dos milímetros de la manga de oclusión. Sujete el tubo en la muesca situada en la parte superior trasera del soporte. Se infla la manga de oclusión en la cola para obstaculizar el flujo sanguíneo hacia la cola.
La manga de oclusión se desinfla lentamente y la manga de la cola VPR, que incorpora un sensor especialmente diseñado, mide las características fisiológicas del flujo sanguíneo que regresa mientras la sangre vuelve a la cola. La manga del sensor VPR mide la hinchazón de la cola como resultado de las pulsaciones arteriales provocadas por el flujo sanguíneo. La presión arterial sistólica se mide automáticamente en el primer momento en que aparece la hinchazón de la cola.
La presión arterial diastólica se calcula automáticamente cuando cesa la tasa creciente de hinchazón en la cola. Después de colocar a todos los animales en los soportes y colocarles la manga en la cola, déjelos al menos cinco minutos para que regulen su temperatura. Registre la temperatura de los animales.
Con frecuencia, con un termómetro infrarrojo, la temperatura del animal debe estar entre 32 y 35 grados Celsius. Ahora que los animales están listos, podemos comenzar el experimento. Haga clic en finalizar para iniciar el experimento.
La línea roja representa la desinflación de la manga de oclusión y de la manga del sensor VPR. La línea azul representa los cambios en el volumen sanguíneo en la cola. La primera inflexión de la línea azul, la tasa mínima de cambio, identifica la presión arterial sistólica.
La segunda inflexión de la línea azul, correspondiente a la tasa máxima de cambio, identifica la presión arterial diastólica cuando el experimento ha finalizado. Retire inmediatamente a los animales de las brazaletes y del soporte. Se muestra un informe sencillo con el resumen de la sesión.
Los datos recopilados en el experimento se guardan como un archivo de Excel. Hay varias formas de procesar los datos dentro del archivo de Excel. Una práctica común es obtener el promedio y la desviación estándar, y eliminar las mediciones.
Si la desviación estándar es mayor de 30. Además, se pueden visualizar los ciclos rechazados y toda la base de datos se puede exportar fácilmente a Excel. Consulte el protocolo escrito y el manual del usuario.
Para obtener más información, acabo de mostrarle cómo medir la presión arterial en ratones de forma no invasiva utilizando la grabación de volumen y presión. Es muy importante reducir el estrés animal siguiendo este procedimiento para obtener mediciones precisas y consistentes. Eso es todo.
Gracias por ver el video y mucha suerte con los experimentos.
Descripción general
El sistema de presión arterial no invasivo de alto rendimiento CODA de 8 canales permite mediciones simultáneas de presión arterial en hasta ocho roedores. Mediante un método de manguito en la cola con registro de volumen y presión (VPR), evalúa con precisión la presión arterial al monitorear los cambios en el volumen sanguíneo de la cola.
Componentes Clave del Estudio
Área de la ciencia
- Investigación cardiovascular
- Fisiología de roedores
- Técnicas de medición no invasivas
Antecedentes
- El sistema CODA está diseñado para medir la presión arterial en animales pequeños.
- Emplea un método no invasivo con manguito en la cola para garantizar el bienestar animal.
- La tecnología de grabación de volumen y presión mejora la precisión de las mediciones.
- Condiciones ambientales estables son cruciales para obtener resultados confiables.
Objetivo del estudio
- Demostrar el procedimiento para medir la presión arterial en roedores.
- Proporcionar una guía detallada de configuración y funcionamiento del sistema CODA.
- Facilitar la investigación cardiovascular mediante la monitorización precisa de la presión arterial.
Métodos Utilizados
- Configuración del sistema CODA en un ambiente controlado.
- Preparación de los animales y aclimatación a los soportes.
- Aplicación de manguitos de oclusión y VPR para la medición de la presión arterial.
- Recolección y análisis de la presión arterial sistólica y diastólica.
Resultados principales
- Medición exitosa de la presión arterial en múltiples roedores simultáneamente.
- Determinación precisa de las presiones sistólica y diastólica mediante tecnología VPR.
- Establecimiento de protocolos para el manejo de animales y el registro de datos.
Conclusiones
- El sistema CODA es eficaz para la medición no invasiva de la presión arterial en roedores.
- La configuración adecuada y la preparación del animal son esenciales para obtener resultados precisos.
- Este método apoya diversas aplicaciones en investigación cardiovascular.
Preguntas frecuentes
Relevancia Ejecutiva para la Industria
La medición no invasiva y de alto rendimiento de la presión arterial en ratones mediante el registro de volumen y presión (VPR) permite la fenotipificación cardiovascular robusta y la evaluación cuantitativa de puntos finales hemodinámicos en modelos preclínicos. Esta capacidad apoya el descubrimiento temprano, la validación de dianas y la investigación traslacional al proporcionar datos reproducibles y multiparamétricos en cohortes genéticamente diversas o tratadas farmacológicamente. La escalabilidad y estandarización del sistema CODA facilitan la toma de decisiones a nivel de cartera y la comparabilidad entre estudios en el descubrimiento de fármacos cardiovasculares.
Aplicaciones Estratégicas en I+D de Biotecnología Farmacéutica
Descubrimiento Temprano y Validación de Blancos
- Permite la interrogación cuantitativa de la función cardiovascular en ratones modificados genéticamente o tratados.
- Apoya la reducción de riesgos mecanicistas al proporcionar lecturas hemodinámicas directas para la validación de dianas.
- Facilita la prueba de hipótesis sobre la participación de vías en la regulación de la presión arterial.
- Proporciona puntos finales estandarizados para estudios comparativos entre dianas candidatas.
Desarrollo de Pruebas y Tamizaje
- Proporciona mediciones validadas y reproducibles de presión arterial y flujo sanguíneo para flujos de trabajo de cribado posteriores.
- Facilita la estandarización y escalabilidad de ensayos mediante el procesamiento simultáneo de múltiples animales.
- Permite la evaluación cuantitativa de los efectos de compuestos sobre la presión arterial sistólica, diastólica y media.
- Ofrece preparación de la plataforma para estudios longitudinales repetidos en diversas cepas de ratones.
Investigación Traductacional y Preclínica
- Alinea los puntos finales preclínicos con biomarcadores cardiovasculares clínicos para garantizar la continuidad traslacional.
- Apoya decisiones de avance ajustadas al riesgo mediante la cuantificación de resultados funcionales en modelos relevantes para la enfermedad.
- Permite el monitoreo longitudinal de la eficacia y seguridad terapéutica in vivo.
- Facilita la integración de datos entre estudios para la selección de carteras basada en biomarcadores.
Integración de la canalización y flujo de trabajo
El método de cola con manguito VPR se integra en el continuo de descubrimiento a preclínico al permitir la fenotipificación cardiovascular estandarizada y no invasiva desde la validación inicial del objetivo hasta la optimización del fármaco líder y los estudios de eficacia preclínicos.
- Biología del Descubrimiento: Proporciona una evaluación cuantitativa basada en hipótesis de dianas y vías cardiovasculares.
- Selección: Ofrece datos reproductibles de presión arterial con múltiples parámetros para la evaluación de compuestos.
- Análisis: Genera conjuntos de datos compatibles con Excel para comparaciones estadísticas y análisis entre diferentes condiciones.
- Investigación Translacional: Conecta los puntos finales preclínicos y clínicos mediante la medición directa de la presión arterial y el flujo sanguíneo.
- Reutilización Empresarial: Ofrece una plataforma escalable y estandarizada para su uso repetido en múltiples estudios y equipos.
Impacto Operativo y Empresarial
- Valor científico: Aumenta la confianza predictiva y reduce la ambigüedad mecanicista en la investigación cardiovascular.
- Valor operativo: Mejora la estandarización, la reproducibilidad y el rendimiento en estudios in vivo.
- Valor estratégico: Mejora la calidad de las decisiones de avance o interrupción y la eficiencia del capital al proporcionar datos funcionales sólidos.
- Impacto en la cartera: Apoya la priorización ajustada al riesgo y el avance de programas cardiovasculares.
Consideraciones de Implementación
- Requiere experiencia técnica en el manejo de roedores y monitoreo fisiológico.
- Necesita instrumentación dedicada, software y controles ambientales para un funcionamiento confiable.
- Exige la estandarización entre equipos de los protocolos de preparación de animales y análisis de datos.
- Adaptable a una variedad de tamaños y cepas de roedores con la selección adecuada del soporte y la manga.
- La precisión depende de la minimización del estrés en los animales y del mantenimiento de condiciones térmicas estables.
