Name: Imágenes de reestenosis intra-stent: un modelo barato, preclínicos fiable, rápida y (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-09-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Aprenda a implantar stents en ratas Sprague-Dawley para estudiar reestenosis intra-stent usando tomografía de coherencia óptica. Este modelo preclínico permite visualizar la formación de neointima y evaluar respuestas vasculares in vivo.

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Financiamiento El presente estudio fue financiado por el Fondo de Investigación Falk para el Departamento de Cirugía Cardiotorácica en la Universidad de Stanford Escuela de Medicina de Stanford, California, EE.UU.. Tobias Deuse fue financiado por una beca de investigación de la Sociedad Alemana cardíaco. Sonja Schrepfer ha recibido una beca de investigación de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992/2-1).

Despliegue del stent aórtico <ol><li> Ratas Sprague-Dawley de peso 550-600 g son comprados a Harlan (Indianapolis, IN, EE.UU.). Casa ratas bajo condiciones convencionales, alimentados con comida de rata estándar y agua ad libitum. </li><li> Anestesiar la rata con isoflurano (2%) y ketamina (25 mg / kg). Bajo visión microscópica, realizar una media superior de la mini-laparotomía para exponer la aorta infrarrenal. </li><li> Disecar la aorta abdominal del tejido circundante, desde el nivel de las arterias renales hasta la bifurcación. PRECAUCIÓN: No hay necesidad de diseccionar la aorta de la IVC. </li><li> Use microclamps para detener el flujo sanguíneo aórtico. Coloque la pinza proximal en primer lugar, seguido de la pinza distal. </li><li> Abra la aorta con una incisión transversal pequeña y al ras de la aorta con la heparina (200 unidades). </li><li> El endotelio aórtico es despojado por el paso de un catéter de 2-francés Fogarty embolectomía arterial (Baxter Healthcare, Deerfield, IL, EE.UU.). </li><li> Utilice cualquier tamaño humano stent entre 8 mm y 12 mm de longitud, y de 2,5 mm-3mm de diámetro. PRECAUCIÓN: El diámetro de la endoprótesis no debe exceder el diámetro de los vasos más de un 10% para evitar la estenosis pre-y post-stent. PRECAUCIÓN: No cambie la longitud del stent dentro del mismo estudio. </li><li> Desplegar el stent utilizando la presión del balón apropiado para lograr el diámetro deseado. </li><li> La incisión pequeña aórtica se cierra con suturas de Prolene 9-0 (Ethicon, Norderstedt, Alemania). </li><li> Cerrar la incisión abdominal en capas con suturas de Vicryl 4-0 en ejecución (Ethicon, Norderstedt, Alemania). La sutura de la piel aún debe ser retirado dentro de 7-14 días, incluso cuando se utiliza Viacryl. </li><li> Los animales recibieron carprofeno (6mg/kg) durante la operación, y Metamizol durante 7 días más en el agua potable. </li></ol> Tomografía de coherencia óptica (OCT) de imágenes Las imágenes de OCT se obtienen con el sistema de imágenes M2 octubre (LightLab Imaging, Inc., Westford, MA, EE.UU.). ImageWire es una sonda de imagen para ofrecer la luz a los tejidos y recoger las señales. El ImageWire consta de 0,006 &quot;(0,15 mm) de fibra óptica de núcleo, dentro de una funda con un diámetro exterior máximo de 0,019&quot; (0,48 mm). <ol><li> Anestesiar la rata con isoflurano (2%) y ketamina (25 mg / kg). Bajo visión microscópica, realizar una laparotomía mediana rehacer para exponer la aorta infrarrenal. </li><li> Abrazadera de la aorta proximal y ambas arterias ilíacas. </li><li> Realizar una arteriotomía transversal en el extremo distal de la aorta, a ras de 1 ml de PBS utilizando un catéter de 28G e inserta el catéter octubre y lo remitirá a la aorta. </li><li> Motorizados retirada octubre de imágenes se realiza a una velocidad de retroceso de 1,0 mm por segundo. </li><li> Adquirir imágenes a 15 fotogramas por segundo, las imágenes se muestran con un color look-up table y archivados digitalmente. </li><li> Cierre de la arteriotomía. </li><li> Cierre el abdomen y las incisiones con suturas de Vicryl 4-0 en ejecución (Ethicon, Norderstedt, Alemania). La sutura de la piel aún debe ser retirado dentro de 7-14 días, incluso cuando se utiliza Viacryl. </li><li> La máxima formación de la neoíntima se desarrollará dentro de las 6 semanas después del implante del stent. </li></ol> El análisis de las imágenes de OCT Las mediciones de octubre se realizan utilizando el software de imágenes LightLab octubre de propiedad con una interfaz basada en la rata. <ol><li> Calibrar el sistema a la reflexión del cable octubre de imagen, que es la técnica de calibración estándar para este sistema. </li><li> Traza luz y el stent áreas de sección transversal (CSA) de forma manual en cada uno de los intervalos de 1,0 mm. </li><li> Calcular el área de la placa de la sección transversal como AT del stent resta de la CSA luz. Calcular el área de la placa por ciento como AT de la placa, dividido por AT del stent (%). Calcular promedio de áreas de placa por ciento. </li></ol> La validación de la técnica de octubre Resultados de octubre se correlacionan bien con la histopatología (Figura 1). CSA histológico placa se calculan como se describió anteriormente. La histología muestra hiperplasia de la íntima con alta densidad de células fusiformes y las células mononucleares de sólo unos pocos la inflamación. Después de 6 semanas, los stents están completamente cubiertas con tejido de granulación neointimal y la AT de la placa medidas de 1,3 ± 0,4 mm 2 en un stent de 2,5 mm. <img src="/files/ftp_upload/1346/1346fig1tmb.jpg" border="0" /> Figura 1: octubre (A) e histológicas (B, ampliación 16x) imágenes del stent 6 semanas después de la implementación. Resultados obtenidos a partir de la placa CSA imágenes de OCT se correlacionan bien con la histopatología. Por favor, <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1346/1346fig1.jpg">haga clic aquí</a> para ver una versión ampliada de la figura 1.

<ol><li>Langeveld, B., Roks, A. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Commentary%3A+rat+restenosis+models%3A+means+for+thorough+restenosis+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+endovascular+therapy%22%5BJournal%5D)">Commentary: rat restenosis models: means for thorough restenosis research.</a> Journal of endovascular therapy. 12 (3), 343-345 (2005).</li>
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</ol>

Todas las ratas fueron alojadas en las instalaciones de cuidado de los animales de la Stanford University Medical Center (Stanford, CA), bajo condiciones normales de temperatura, humedad y condiciones de iluminación, y se les proporcionó comida de rata y agua ad libitum. La investigación conforme a la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio publicado por el Instituto Nacional de EE.UU. de la Salud (NIH publicación N º 85-23, revisada en 1996). El protocolo fue aprobado por el Panel Administrativo de Atención de Animales de Laboratorio, Universidad de Stanford.

A pesar de la arteria ilíaca conejo y los modelos de cerdos de las arterias coronarias son los más frecuentemente utilizados para la colocación del stent 1, una combinación de material quirúrgico y radiológico se requiere, la capacidad de alojamiento de animales es limitada, y los costos de compra son altos. Limitaciones del modelo de rata stent es necesario el uso de stents diseñados específicamente para las ratas, la relación de metal a la arteria que resulta en más lesiones vasculares 2, y la incidencia artificialmente elevado de trombosis 3. El modelo de implantación de un stent rata es un modelo preclínico 4 simple, barata, rápida y precisa. Después de que el informe inicial del stent directo de la aorta de rata por Lowe et al. 5, la viabilidad y conveniencia de este modelo para la evaluación de la fisiopatología de la reestenosis intra-stent ha sido ampliamente demostrado 5,6. El diámetro de la aorta de rata es la adecuada para permitir la expansión de los stents disponibles comercialmente sin alterar la arquitectura del barco fisiológico. Se ha demostrado que los mecanismos fisiopatológicos, tales como la formación de trombos, la inflamación y la proliferación de SMC, se desarrollan en estos modelos de ratas como lo hacen en el conejo y el cerdo. Por lo tanto, estos modelos son una buena representación del proceso real de reestenosis. El octubre de alta resolución de la tecnología de imagen es útil para evaluar la hiperplasia de la íntima. La profundidad de penetración es sólo 1,5-2 mm, pero su resolución es de un orden de magnitud mayor que la de ultrasonido intravascular (IVUS) 7,8. Múltiples estudios comparando octubre con IVUS la conclusión de que octubre es actualmente la técnica preferida para evaluar la proliferación neointimal tras la implantación del stent 80-10. Especialmente en los animales pequeños con un diámetro de vasos pequeños, la alta resolución de octubre se hace la mejor modalidad de imagen para la evaluación de la restenosis. En resumen, este video muestra que (1) la colocación de stents aorta de rata es fácilmente factible, (2) la colocación de stents rata aorta abdominal es adecuado para las pruebas de stents fabricados comercialmente y (3) octubre de imágenes es una técnica precisa y elegante para el seguimiento longitudinal de los in-stent reestenosis.

imágenes de reestenosis intra-stent: un modelo barato, preclínicos fiable, rápida y

Imaging In-Stent Restenosis: An Inexpensive, Reliable, and Rapid Preclinical Model

Los modelos preclínicos de reestenosis son esenciales para desentrañar los procesos fisiopatológicos que conducen a la reestenosis intra-stent y para optimizar el actual y futuro stents liberadores de fármacos. Una variedad de anticuerpos y de cepas transgénicas y knockout están disponibles en las ratas. En consecuencia, un modelo de reestenosis intra-stent en la rata sería conveniente para los estudios de patobiológicas y fisiopatológicas. En este vídeo, se presenta el procedimiento completo y pit-cae de un modelo de rata stent adecuado para la investigación de alto rendimiento del stent. Vamos a mostrar la técnica quirúrgica de implantación del stent, y la evaluación de la reestenosis intra-stent utilizando la técnica más elegante de octubre (tomografía de coherencia óptica). Esta técnica ofrece una alta precisión en la evaluación de la placa CSA (áreas de sección transversal) y se correlaciona bien con los cortes histológicos, que requieren técnicas especiales que consumen y el tiempo de inclusión y corte. Octubre de imagen permite además seguimiento longitudinal del desarrollo de la reestenosis intra-stent en el mismo animal en comparación con las instantáneas de una sola vez mediante histología.

Este video muestra cómo utilizar un modelo preclínico de bajo costo y confiable para estudiar los procesos fisiopatológicos patobiológicas y de desarrollo de reestenosis intra-stent. Longitudinal monitorización in vivo utilizando octubre (tomografía de coherencia óptica) y el análisis de las imágenes de OCT también se demuestre.

Imágenes de reestenosis intra-stent: un modelo barato, preclínicos fiable, rápida y

Los modelos preclínicos de reestenosis son esenciales para desentrañar los procesos fisiopatológicos que conducen a la reestenosis intrastent y para optimizar los existentes y...

Hola, soy el Dr. Schwab del Laboratorio de Trasplante de Células Madre e Inmunología de Trasplantes de la Universidad de Stanford. Soy el Dr. Dee. Trabajo en el Departamento de Cirugía Cardiotorácica de la Universidad Central.Y soy el Dr. Keno del Departamento de Medicina Cardiovascular de la Universidad de Stanford. Hoy les mostraremos un procedimiento para eventos de implantación de stents. También demostraremos la OCT como una técnica novedosa para imágenes in vivo.Utilizamos este modelo preclínico económico, confiable y rápido en nuestro laboratorio para estudiar el desarrollo de la estenosis de endoprótesis. Así que comencemos. Para iniciar este procedimiento, prepare la endoprótesis llenando la pistola con 10 ccs de solución salina y D aire, y bloquéela.A continuación, conecte el catéter de stent y la pistola. Cuando el stent esté listo, se anestesia la rata macho Sprague Dawley con isoflurano y se realiza una laparotomía mediana superior para exponer la aorta infrarrenal. Los siguientes pasos se realizan bajo visión microscópica.Se disecciona la aorta abdominal del tejido circundante desde el nivel de las arterias renales hasta la bifurcación. Es importante tener en cuenta que no es necesario disecar la aorta de la vena cava inferior. Utilice pinzas microquirúrgicas para detener el flujo sanguíneo aórtico colocando primero la pinza proximal.A continuación, desde el lado distal del clamp, se colocan pinzas individualmente en las ramas. Luego, se abre la aorta mediante una pequeña incisión transversal, no demasiado cerca del clamp proximal, y se lava con heparina. Una vez abierta la aorta, se realiza la desendotelización aórtica mediante el paso de un catéter arterial de embolectomía Foggerty de dos French.Retire el tapón de plástico del stent e introduzca el stent en la posición de la aorta y despliéguelo. La longitud del stent no debe cambiarse dentro del mismo estudio; dependiendo del stent utilizado, aplique la presión adecuada del balón para lograr el diámetro deseado. Para evitar la estenosis pre y post stent, el diámetro del stent no debe exceder el diámetro del vaso en más del 10 %. Una vez desplegado el stent, lávelo con heparina.Ahora que el implante del stent está completo, cambie la vista microscópica a un aumento de 10x. La pequeña incisión aórtica se cierra con suturas continuas de prolina 9-0. Finalmente, se abren los pinzas y la incisión abdominal se cierra en capas con tres suturas continuas de Vicryl 3-0.Para comenzar la imagenología por tomografía de coherencia óptica, se realiza una laparotomía mediana de reentrada para exponer la aorta infrarrenal, ocluir la aorta proximal y ambas arterias ilíacas. Después de esto, realice una arteriotomía aórtica transversal. A continuación, inserte el catéter de OCT y avance hacia la aorta.Y la luz ahora se está moviendo de proximal a, ya sabes, puedes verlo justo aquí. Sí, sí, puedes ver eso. Oh, eso es bastante interesante.Con el catéter insertado, ahora podemos comenzar la imagenología por OCT. Se lava la aorta con solución salina y se realiza una retracción automatizada. La imagenología por OCT se lleva a cabo a una velocidad de retracción de un milímetro por segundo.Las imágenes se adquieren a 15 cuadros por segundo. Las imágenes adquiridas se muestran con una tabla de colores y se archivan digitalmente. Una vez completada la adquisición de imágenes, la arteriotomía se cierra utilizando suturas continuas de prolina 9.0.Por último, las incisiones abdominales se cierran con tres suturas continuas de Vicryl 3-0. Ahora que se han obtenido las imágenes de OCT, podemos comenzar el análisis de imágenes utilizando un software propietario de imágenes de OCT de LightLab con una interfaz basada en ratas. Primero, calibre el sistema con respecto al reflejo del cable de imagen de OCT.A continuación, trace manualmente las áreas transversales de la luz y del stent a intervalos de un milímetro para realizar los cálculos. El área transversal de la placa se calcula restando el área transversal de la luz menos el área transversal del stent. El porcentaje de área de placa se calcula dividiendo el área transversal de la placa entre el área transversal del stent.Los resultados de OCT se correlacionan bien con la placa histopatológica. Se calculan las áreas transversales como se describe. La histología a las seis semanas después del implante del stent revela hiperplasia íntima con una alta densidad de células en forma de huso y solo unas pocas inflamaciones mononucleares.Células después de seis semanas, los stents están completamente cubiertos con tejido de granulación neointimal y el área transversal de la placa mide 1,3 ± 0,4 milímetros cuadrados en un stent de 2,5 milímetros. Acabamos de mostrarle cómo implantar un stent humano en el we order. Y que los métodos de OCT permiten monitorear in vivo el desarrollo de la estenosis.Al realizar este procedimiento, asegúrese de utilizar cerdos que pesen más de 500 gramos para que sus AAR abdominales coincidan con el tamaño de las arterias coronarias humanas y, por lo tanto, con el tamaño del stent. Recuerde evitar el fenómeno del laboratorio de latas y la lesión vascular durante la implantación del stent. Eso es todo.Muchas gracias por ver este video y buena suerte con sus experimentos.

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