Name: Wolbachia Infección bacteriana en Drosophila (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-02-25T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Aprende a aislar e inyectar Wolbachia en Drosophila usando un dispositivo de filtración especializado. Este protocolo permite estudiar la transmisión de bacterias intracelulares y su capacidad de cruzar tejidos hasta llegar a la línea germinal.

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Los autores no tienen nada que revelar.

wolbachia infección bacteriana en drosophila

Wolbachia Bacterial Infection in Drosophila

Wolbachia Infección bacteriana en Drosophila

Me llamo Voia Friedman. Soy investigadora asociada en la Universidad de Princeton. Hoy les voy a contar sobre varios protocolos que desarrollé para transinfectar, inicialmente para aislar, para regresar desde el hilio de moscas infectadas, y posteriormente para ayudar a inyectar el alimento del hilio en moscas no afectadas.Entonces, básicamente, este es un protocolo muy sencillo para aislar him oly para aspectos básicos. Y utilizará este dispositivo de, de mepo que contiene un filtro que va encima de un E. Básicamente, necesita colocar, comenzamos con alrededor de cien moscas. Aniquile las moscas, colóquelas en el dispositivo de filtración, puede usar simplemente un embudo y eso se ajustará muy fácilmente a este dispositivo y lávelo con etanol al 70 %.Solo tome el futuro, elimínelo y puede desechar el etanol. Luego, después de tres lavados, realice el último lavado con agua molecular porque no desea tener bacterias con trazas de etanol. Bueno, y entonces simplemente pase a una nueva puerta de armas y, a continuación, centrifugue en un micro, un micro real durante dos minutos. Posteriormente, vea cómo puede inyectar eso. Él solo alimenta a las moscas no afectadas.Entonces, básicamente tome una cinta adhesiva doble cara, que normalmente tiene dos lados, uno más pegajoso que el otro. Deje el lado más pegajoso hacia arriba, ya que será la superficie sobre la cual pegará las moscas. Básicamente, si tiene este dispositivo de gas con una luz encendida en la parte superior, no habrá flujo de gas y las moscas despertarán si están sobre la platina.Entonces puede simplemente dirigir el flujo, creando una pequeña campana o cámara usando cinta adhesiva. Luego dirige el gas sobre las moscas. A continuación, coloque esta luz aquí con la cinta y tendrá sus moscas.Pegue las moscas en la parte superior de la cinta, todas con la misma orientación, y coloque su cabeza en la dirección desde la cual introducirá la aguja. Así podrá pasar directamente por encima del ala y asegurarse, dado que vuelan, de que no salgan volando. Si despiertan durante el procedimiento, no querrá que se escapen.Así que asegúrese de tomar una pequeña punta y ejercer presión contra las alas de la mosca en la cola. Está bien si las alas resultan dañadas. Y cuando se deshaga, cuando tome las moscas para la inyección, lo más probable es que pierdan sus alas de todos modos, por lo que sobrevivirán.Eso puede ser útil porque no vas a perder las moscas; entonces él coloca aceite mineral sobre el micrómetro en la parte posterior de la aguja, luego la inyección con la aguja polar, y entonces puedes simplemente ajustar la presión para llevar el material hasta la punta de la aguja. Yo inyecté entre 10 y 15 nanolitros, pero, mientras sea consistente. Vale, entonces un detalle importante aquí es que el colchón de este experimento consiste en que la mosca, una vez que se está inyectando la muestra, cuando veas que la aguja debe penetrar lo más posible a través de la parte superior del abdomen.Debido a que aquí, básicamente cuando la aguja penetra, se tiene un espacio más amplio para moverse hacia arriba y hacia abajo. Y, en esencia, si está más cerca de la cutícula, es menos probable que se penetren órganos vitales durante el vuelo. Es muy poco probable, por ejemplo, que haga un agujero en su intestino, lo cual podría matar al insecto mientras se realiza la cirugía.Me llamo Voia Friedman. Soy investigadora asociada en la Universidad de Princeton, en el laboratorio de Eric Hels. Y hoy me gustaría hablarles sobre este protocolo que acaban de ver, la demostración.Este protocolo se realizó porque deseábamos demostrar que UBA es capaz de atravesar tejidos. UBA es uno de los parásitos intracelulares más exitosos sobre la faz de la Tierra. Infecta del 20 al 70 % de los insectos y muchas partículas.Y también es muy importante en términos de enfermedades humanas porque infecta nematodos que transmiten enfermedades como la ceguera de los ríos o la filariasis linfática. Además, CCA es un endosimbionte obligado en estos gusanos. Existe un gran interés, muy amplio, en utilizar CCA también como medio para controlar enfermedades parasitarias transmitidas por mosquitos, como la malaria y el dengue.Por lo tanto, este protocolo fue desarrollado básicamente para demostrar que, una vez dentro de la cavidad abdominal de una mosca, las CCA pueden atravesar tejidos y alcanzar la línea germinal. Así que, básicamente, lo que se puede observar aquí es el ooforo del ovario de Drosophila; al regresar una vez presente en la hoja he, puede atravesar una capa perineural rosada que rodea al ovario.Luego atraviesan una capa muscular. Y en realidad, uno de los primeros lugares a los que acceden dentro del ovario es la imagen de la célula madre somática. A continuación, pueden alcanzar la línea germinal.Y esta bacteria se transmite de la misma manera que se transmite la mitocondria, es decir, a través de la madre, mediante los citoplasmas presentes en el óvulo. Por supuesto, deben estar presentes en la línea germinal. Por eso se desarrolló este protocolo.Y este protocolo puede ser muy útil, ya que tradicionalmente la forma en que las personas intentarían transinfectar wbaa consiste básicamente en tomar wbaa e introducir una nueva especie de insecto mediante microinyecciones en el embrión. Sin embargo, estos procedimientos son mucho más complicados.Y básicamente aquí estamos aprovechando simplemente la biología de los o, ya que son capaces de atravesar tejidos y desplazarse hacia los tejidos de células madre, y pueden pasar a la línea germinal. Por lo tanto, resulta más sencillo obtener UBA de ciertas especies de insectos infectados, y estos pueden transmitirse a especies no infectadas. Probablemente, creo que es la inyección en sí.Básicamente, es necesario tener cuidado para movilizar la mosca lo mejor posible. Estamos utilizando cinta adhesiva de doble cara y es necesario que la aguja penetre lo más cerca posible, y lo más paralelo posible a la mosca, para no profundizar demasiado. Y es menos probable que acabemos matando a la mosca después de realizar la cirugía.

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