La disección de embriones de ratón 6,5 dpc

Me llamo Kelly Shea y soy la encargada del laboratorio y también técnica de investigación en el Laboratorio de Neilsen, es muy difícil porque muchas personas no saben cómo distinguir las diferentes capas del tejido. Por lo tanto, lo que debe hacerse es esencialmente separar todas las capas del tejido para exponer el embrión subyacente, que en este momento no está muy vascularizado. Por eso es muy transparente y difícil de distinguir.

Tome pinzas y tijeras bastante robustas. Lo primero que debe hacer es pellizcar al animal justo alrededor de la línea media y realizar un primer corte. A partir de ese punto, simplemente puede separar la piel, exponiendo el abdomen del animal.

Hay una capa delgada del peritoneo que vas a levantar con la pinza y luego puedes cortar con tijeras y desplazar hacia un lado. Debes cortar a lo largo de la línea media del animal y separar ambos cuernos uterinos, que están conectados en el centro. Puedes cortar justo en la base.

Probablemente obtendrá mucha grasa junto con él. Y tome todo el cuerno uterino del animal. Simplemente colóquelo directamente en el PBS.

Entonces, esto está en el cuerno. Estos son los sitios de implantación, 1, 2, 3, 4, 5. Lo que desea hacer es separarlos.

Básicamente, puedes cortar entre los sitios de implantación justo aquí. Puedes agarrar simplemente el embrión por su lado y, esencialmente, separarlo. En este momento, estás exponiendo el deum, que es un tejido más esponjoso situado debajo.

Por lo tanto, el embrión debe estar justo en el centro, justo aquí. Este es el ápice del órgano temporal. Desea orientarlo hacia arriba con el ápice.

Lo que hará es cortar aproximadamente un quinto del camino desde el ápice hacia abajo. El embrión debe quedar justo en el centro aquí. Lo que hago es orientarlo de lado, tomar un par de pinzas y sujetarlo de cierta manera, mantenerlo presionado con la otra, cortar la punta y luego separarlo.

Entonces, una vez que se retira esa tapa, coloque el embrión sobre su borde. Y como puede ver, hay una abertura justo en el lugar donde se quitó la tapa. Solo debe introducir la pinza allí. Sí.

En este momento, el embrión queda muy suelto dentro del deum. Una vez que abra el deum, prácticamente puede sacarlo con relativa facilidad, siempre que logre colocarse debajo de su base. Es muy pequeño.

También hay algunos tejidos aún adheridos al embrión. Tiene el cono ectoplacentario, que se encuentra justo aquí en el ápice del embrión. Y también tiene algunos otros tejidos aún adheridos.

Así que tomo la pipeta y lo aspiro. En este momento, desea fijar los embriones. Por lo tanto, tengo un recipiente con PFA.

Queríamos analizar genes candidatos. Básicamente, estamos utilizando técnicas de ARN en montaje completo e hibridación in situ para visualizar la producción de ácidos nucleicos in situ dentro de un embrión. Estos genes específicos que nos interesan codifican marcadores putativos de precursores de células germinales, y además se predice que se expresan en el embrión de ratón en un punto temporal específico que ayuda a las células germinales a desarrollarse y madurar desde precursores putativos de células germinales hasta células germinales.

Uno de esos factores que nos interesa mucho en primer lugar, y que fue el primer factor en el que realizamos una hibridación in situ completa en estos embriones de día 6,5, fue la proteína morfogenética ósea o BMP4. Es un miembro de la familia superadora del TGF-beta. Es muy importante y es absolutamente necesaria en la maduración de las células germinales.

Y también es necesario que las células germinales se transloquen a través del embrión y se ubiquen cerca de la línea primitiva del embrión. Y la BMP-4 desempeña un papel fundamental tanto en la señalización como en la maduración que deben experimentar las células germinales para poder ubicarse en la línea primitiva. Por lo tanto, en primer lugar, debe asegurarse de saber qué está buscando, conocer su pequeño tamaño, la escala con la que está trabajando, y también sentarse a planificar con mucha atención.

La técnica, especialmente con qué tipo de microscopio estereoscópico va a trabajar. Una de las dificultades técnicas es que esto implica muchas manipulaciones y movimientos de mano muy, muy firmes para no dañar el embrión. Por lo tanto, se necesita un microscopio estereoscópico con mucho espacio para manipular, y también asegúrese de tener todo preparado para el experimento, de modo que no tenga que realizar más manipulaciones de las necesarias durante la disección.

Así que, aparte de eso, creo que es necesario avanzar muy lentamente y separar las capas de tejido individuales con mucha lentitud para saber con qué está trabajando. Y asegúrese de saber dónde se encuentra el embrión.