Name: De baja tensión Ruta de Aprendizaje Usando el laberinto Lashley III en ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-22T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: Aprende a evaluar el aprendizaje y la memoria en ratones usando el laberinto Lashley III, un método sin estrés ideal para estudios de envejecimiento y comparación entre cepas.

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El laberinto Lashley III utilizado para estos experimentos fue construido por Tim Bowmaster, Corman Pablo, Dutrow Barry, Jabco Ryan y Tim Treaster de la Universidad Estatal de Pennsylvania Tienda de la máquina del Departamento de Física. Los autores desean agradecer a la Sra. Shoba Belegundu, la Sra. Tara Chrzanowski, y la Sra. Alexandra Lewis para la asistencia en la realización de los experimentos presentados en las Figuras 2-4. El Sr. Walter Jackson proporcionaron información valiosa en la elaboración de este protocolo. Este trabajo fue financiado con fondos del Instituto Nacional de Salud Mental (MH064756 y MH077978 a AMA). El contenido es responsabilidad exclusiva de sus autores y no representa necesariamente las opiniones oficiales del Instituto Nacional de Salud Mental o los Institutos Nacionales de Salud.

1. Preparación: <ol><li> El laberinto Lashley III está construido de plexiglás y se muestra en la Figura 1. El cajón de salida, brazos del laberinto, y la caja de meta son modulares para permitir la limpieza y la modificabilidad del laberinto. Las paredes de la caja de inicio, brazos del laberinto, y caja de la meta se construyen de Plexiglas negro para eliminar las señales visuales desde el exterior y el interior del laberinto. Brazos del laberinto es de 45 cm de largo, 7 cm de alto y 5 cm de ancho. Puertas que conducen a los brazos del laberinto consecutivos de 4 cm x 4 cm y se encuentra a 11 cm de las paredes exteriores del laberinto. La portería es de 19,5 cm de largo x 7 cm de alto x 5 cm de ancho. El cajón de salida es de 8 cm x 9,5 cm x 7 cm. Separado piezas de plexiglás transparente se colocan en la parte superior de la caja de inicio, el laberinto, y caja de la meta para permitir la visualización de cada ratón a medida que avanza por el laberinto, mientras que la prevención de los ratones se escape. El laberinto se apoya en una base construida de plexiglás de color rojo que es suficientemente grande para contener las tres piezas del laberinto de una jaula pseudo-casa que es del mismo tamaño que la jaula del animal doméstico estándar. </li><li> Para preparar la pseudo-casa jaulas antes del juicio primer laberinto, material de cama nueva del mismo tipo que la utilizada en las jaulas hogar de los animales se añade al fondo de la jaula individuo que tiene las puertas (2 cm x 2 cm), corte en los lados. Alambre de tapas en lugar de estos fondos jaula individual y número de ellos, uno para cada animal en una cohorte de prueba. Estas jaulas individuales servirá como pseudo-jaulas hogar para cada animal, para la duración del plazo de prueba. Debido a que estamos investigando el papel del estrés y / o comportamientos relacionados con la ansiedad en el aprendizaje y la memoria, se utiliza pseudo-casa jaulas individuales para evitar los ratones de la vivienda en sus jaulas. Sin embargo, si estos factores no son de interés primordial, los animales pueden ser alojados individualmente en jaulas de casa modificado con puertas y jaulas que pueden servir como hogar para las jaulas de navegación laberinto éxito. </li></ol> 2. Pruebas: <ol><li> Cada día, los animales son trasladados a la sala de pruebas de comportamiento de un mínimo de una hora antes de la prueba que les permita aclimatarse al ambiente de prueba. </li><li> Treinta minutos antes del inicio de las pruebas del tiempo, la comida y el agua se elimina de todas las jaulas en casa. Mantenga los alimentos y el agua en la sala de pruebas de comportamiento, pero fuera del alcance de los ratones. Alimentos y el agua normalmente se elimina 30 minutos después del cambio de la fase de luz a la fase de oscuridad, después de la alimentación máxima se ha producido. Esto asegura que los animales son en su mayoría de alimentos y el agua sacia antes de la prueba, sin embargo, las pruebas durante este período proporciona una pequeña fuerza adicional de motivar a navegar por el laberinto, aunque no hay comida abierta o recompensa de agua al terminar la tarea. </li><li> Después del período de pre-test de 30 minutos ha transcurrido, limpiar el laberinto con el 70% de etanol. Deje la puerta principal de la caja de inicio en el laberinto de brazos cerrados. Las puertas en ambos extremos de la caja de la meta se dejan abiertas. </li><li> Coloque la jaula pseudo-casa que corresponde al primer animal en el extremo de la caja de la meta. </li><li> Realizar el primer ratón en el laberinto, ventosas en la mano. Ponga el ratón en el cajón de salida y vuelva a colocar la tapa. </li><li> Cuando está en posición de observar el laberinto sin obstáculos, abrir la puerta de la caja de inicio y de inmediato comenzar a tres cronómetros. </li><li> Cuando todas las cuatro patas del ratón ha dejado el cajón de salida, cierre la puerta de la caja de arranque y parada del primer temporizador. </li><li> Registro por parte de la vía el ratón viaja cuando pase por el laberinto. Un ratón entra en una zona nueva o en el brazo del laberinto, cuando las cuatro patas se han cruzado en esa zona (ver fig. 1). </li><li> Cuando todas las cuatro patas entrar en el área chica, cerca de la puerta que conduce entre el laberinto y la caja de la meta y detener el segundo cronómetro. </li><li> Cuando el ratón está completamente entró en la jaula pseudo-casa, cerca de la puerta entre el área chica y la jaula. Detener el cronómetro tercero. </li><li> Registrar los tiempos de los tres cronómetros. Cuente el número de errores con el ratón ha hecho. Un error se define como una entrada en un callejón sin salida callejón sin salida de zona (por ejemplo, al pasar de L del brazo a la zona de K;. Fig. 1), o viajando a través de un brazo ya transitados del laberinto (por ejemplo, al pasar de brazo a brazo F C, Fig. 1).. A pesar de que la puntuación de rendimiento del ratón, ya que se está produciendo, es posible grabar en video o de lo contrario ensayos laberinto registro para permitir la calificación posterior, ya sea por los ojos o de software automatizado. Discreción experimentador debe ser utilizado para elegir un método apropiado. </li><li> Dejar al animal en la jaula de pseudo-casa durante 1 minuto antes de volver a su jaula. </li><li> Repita los pasos 2,3 a 2,12 para todos los ratones en el grupo de prueba. </li><li> Cuando el ratón por última vez en la cohorte ha sido devuelto a su jaula, iniciar el temporizador de 30 minutos. Al final de este período de 30 minutos, el retorno de alimentos y agua a todos los ratones en el grupo y luego regresar los animales a su ambiente colonia. </li><li> Repita este procedimiento en noches consecutivas, con un ensayo por día de pruebas por animal, hasta que todos los ratones en el grupo han llegado a un criterio de aprendizaje definidos o hasta un determinado número de los ensayos de prueba se ha producido. Un ratón se clasifica como de haber aprendido el laberinto cuando se puede realizar la tarea con 0 o 1 error (s) en dos ensayos consecutivos. Los ratones se ponen a prueba en el mismo orden en los sucesivos ensayos. </li></ol> 3. Los resultados representativos: Días para aprender (cumplir con el criterio) pueden ser analizados y comparados entre los distintos grupos en un estudio particular (Fig. 2A y 3A). Además, un índice de aprendizaje (aprender ratio), que caracteriza a la adquisición de laberinto, se puede evaluar en los primeros cuatro días del período de prueba (Fig. 2B y 3B). El índice de aprendizaje es la relación entre el número de segmentos de la trayectoria correcta viajó con el número total de segmentos de la trayectoria recorrida por cada juicio. El índice promedio de aprendizaje debe ser aproximadamente 0,5 para la prueba 1, cuando los ratones son expuestos por primera vez en el laberinto y la navegación por casualidad. Aumenta el índice de aprendizaje y se acerca a 1 entre los ensayos 2 y 4 que indica que el aprendizaje está ocurriendo. En la figura 2, los jóvenes (2 meses) y el envejecimiento (24 meses) los ratones machos C57Bl/6NCr fueron entrenados en el laberinto Lashley para un máximo de 15 ensayos. Los ratones jóvenes aprendieron el laberinto de 7,2 (± 1,5) d. Por el contrario, los animales viejos se 11,7 (± 2,1) d para cumplir con el criterio. Hubo una fuerte tendencia para los ratones C57Bl/6NCr envejecimiento a tomar más tiempo para aprender el laberinto ([t (23) = 1.59, P = 0,056], de una cola t-test, una hipótesis a priori que los días de aprender es más largo en el envejecimiento ratones). Cuando el índice de aprendizaje se calcula, ambos grupos de edad muestran un aumento constante en el índice de aprendizaje de los ensayos del 2 al 4 (efecto principal significativo de tiempo P &lt;0,001). Sin embargo, no hubo diferencias estadísticamente significativas en el índice de aprendizaje entre los jóvenes ratones C57 y C57 ratones de edad (principal efecto de la edad p = 0,58). La figura 3 es representante de los estudios que examinan los efectos de la tensión de fondo en el aprendizaje de la conducta. Los datos de la C57Bl/6NCr hombre joven se muestra en la figura. 2 están ahora en comparación con los datos de los jóvenes Crl: CD-1 (ICR) BR ratones [CD-1, 4-5 mo]. Ratones CD-1 aprendieron el laberinto Lashley III en 4,5 (± 1,4) d, sin embargo, no hubo diferencias significativas entre las cepas en día para aprender (Fig. 3A, [t (18) = 1,328, P = 0,20], dos colas t-test). Por el contrario, el examen de la muestra índice de aprendizaje, mientras que todos los animales fueron navegar por el laberinto en el primer juicio por casualidad, ratones CD-1 aprendieron la tarea más rápidamente (efecto principal de la cepa P &lt;0,001). Esto se ilustra por el aumento estadísticamente significativo en el índice de aprendizaje en los estudios de 2 a 4 en ratones CD-1 en comparación con los ratones C57Bl/6NCr. Curiosamente, si ratones CD-1 siguen siendo entrenados en el laberinto más allá del punto de llegar a criterio, que exhiben un comportamiento indicativo de sobreentrenamiento (Fig. 4) que se discute en más detalle a continuación. <img src="/files/ftp_upload/1786/1786fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1:. El laberinto Lashley III El callejón sin salida callejón sin salida en el laberinto de las zonas son de color rojo en el diagrama con fines ilustrativos. La base y los brazos del laberinto actual son colores sólidos (recuadro). El laberinto es dibujado a escala (dimensiones en el texto). <img src="/files/ftp_upload/1786/1786fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2: Lashley rendimiento laberinto III en 2 y 24 meses de edad, los ratones machos C57Bl/6NCr El laberinto Lashley III se utilizó para evaluar la ruta de aprendizaje en jóvenes (2 meses) y el envejecimiento (24 meses) los ratones machos C57Bl/6NCr.. Los parámetros medidos fueron: (a) días de criterio, el número de días necesarios para que un ratón para correr por el laberinto de dos noches consecutivas con 0 errores o error 1, y (b) índice de aprendizaje, el número de corregir las entradas de cuatro brazos de la pata hizo frente al número total de entradas del brazo hechos en los días 1-4 de las pruebas de laberinto Lashley III. El número de animales por grupo n = 10 para el mes de edad 2 y n = 15 para 24 meses de edad, los ratones. <img src="/files/ftp_upload/1786/1786fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3: Lashley rendimiento laberinto III en C57Bl/6NCr jóvenes hombres y ratones CD-1 El laberinto Lashley III se utilizó para evaluar el aprendizaje en la ruta 2 meses de edad C57Bl/6NCr y 4-5 meses de edad, los ratones CD-1.. Los parámetros medidos fueron: (a) días de criterio, el número de días necesarios para que un ratón para correr por el laberinto de dos noches consecutivas con 0 errores o error 1, y (b) índice de aprendizaje, el número de corregir las entradas de cuatro brazos de la pata hizo frente al número total de entradas del brazo hechos en los días 1-4 de las pruebas de laberinto Lashley III. El número de animales por grupo n = 10 para C57Bl/6NCr y n = 10 para ratones CD-1. Significación estadística: * p &lt;0,05, ** p &lt;0.01 en comparación con los ratones C57Bl/6NCr. <img src="/files/ftp_upload/1786/1786fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4: Lashley rendimiento laberinto III en 4-5 meses de edad de sexo masculino ratones CD-1 El laberinto Lashley III.se utilizó para evaluar la ruta de aprendizaje de cada diez 4-5 meses de edad, masculino ratones CD-1 en 15 días consecutivos. Los parámetros medidos fueron: (a) número de errores cometidos por día, con un error se define como una entrada de cuatro pata en un callejón sin salida callejón sin salida de zona o de viaje de un brazo ya transitados del laberinto, y (b) tiempo de permanencia en el laberinto por día. El día en que se llegó a criterio se indica con una flecha roja.

<ol><li>Blizard, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Return+to+home+cage%27+as+a+reward+for+maze+learning+in+young+and+old+genetically+heterogeneous+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Med%22%5BJournal%5D)">Return to home cage' as a reward for maze learning in young and old genetically heterogeneous mice.</a> Comparative Med. 56, 196-201 (2006).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCrawley%2C+JN+%22What%27s+wrong+with+my+mouse%3F%3A+Behavioral+phenotyping+of+transgenic+and+knockout+mice%22">What's wrong with my mouse?: Behavioral phenotyping of transgenic and knockout mice</a>. , 2nd ed, John Wiley & Sons, Inc. Hoboken. (2007).</li>
<li>Blizard, D. A., Klein, L. C., Cohen, R., McClearn, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse-friendly+cognitive+task+suitable+for+use+in+aging+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Genet%22%5BJournal%5D)">A novel mouse-friendly cognitive task suitable for use in aging studies.</a> Behav. Genet. 33, 181-189 (2003).</li>
<li>Warren, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Appetitive+learning+by+old+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Aging+Res%22%5BJournal%5D)">Appetitive learning by old mice.</a> Exp. Aging Res. 12, 99-105 (1986).</li>
<li>Lashley, K. Brain mechanisms and intelligence: A quantitative study of injuries to the brain. , University of Chicago Press. Chicago. (1929).</li>
<li>Barnes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+deficits+associated+with+senescence%3A+A+neurophysiological+and+behavioral+study+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+Psych%22%5BJournal%5D)">Memory deficits associated with senescence: A neurophysiological and behavioral study in the rat.</a> J. Comp. Physiol. Psych. 93, 74-104 (1979).</li>
<li>Matzel, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Individual+differences+in+the+expression+of+a+general+learning+ability+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Individual differences in the expression of a general learning ability in mice.</a> J. Neurosci. 23, 6423-6433 (2003).</li>
<li>Brandeis, R., Brandys, Y., Yehuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+the+Morris+water+maze+in+the+study+of+memory+and+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The use of the Morris water maze in the study of memory and learning.</a> Int. J. Neurosci. 48, 29-69 (1989).</li>
<li>Hepler, D. J., Wenk, G. L., Cribbs, B. L., Olton, D. S., Coyle, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Memory+impairments+following+basal+forebrain+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Memory impairments following basal forebrain lesions.</a> Brain Res. 346, 8-14 (1985).</li>
<li>Sci, B. ehavB. rain 2, 313-313 (1979).</li>
</ol>

Todos los protocolos de comportamiento fueron aprobados por el Cuidado de Animales del Estado de Pennsylvania Institucional de la Universidad y el empleo. No hay información financiera que reportar.

Las pruebas de los roedores más utilizados de comportamiento para evaluar el aprendizaje y la memoria son el laberinto acuático de Morris y las variantes de condicionamiento del miedo 2. Estas pruebas se basan en señales visuales o auditivas para el aprendizaje y los estímulos aversivos (por ejemplo, el agua, estímulo eléctrico plantar) para motivar a los animales para completar las 3 tareas. En los roedores, el envejecimiento, como el envejecimiento en los seres humanos, las modalidades sensoriale...

<table><tbody><tr><td>Laberinto Lashley III</td><td>Taller de Máquinas de Física de PSU</td><td>N/A</td><td>El laberinto debe construirse a medida, no está disponible comercialmente</td></tr></tbody></table>

de baja tensión ruta de aprendizaje usando el laberinto lashley iii en ratones

Low-stress Route Learning Using the Lashley III Maze in Mice

Muchas pruebas de comportamiento diseñado para evaluar el aprendizaje y la memoria en roedores, especialmente ratones, se basan en las señales visuales, la privación de alimentos y / o agua, o de otros estímulos negativos para motivar la adquisición de la tarea. A medida que envejecen los animales, las modalidades sensoriales se deterioran. Por ejemplo, muchas cepas de ratones desarrollan audiencia déficit o las cataratas. Los cambios en los sistemas sensoriales necesaria para guiar los ratones durante la adquisición de la tarea actual confunde potencial en la interpretación de los cambios de aprendizaje en animales viejos. Además, el uso de estímulos aversivos para motivar a los animales para aprender tareas es potencialmente de confusión cuando se comparan los ratones con una sensibilidad diferencial al estrés. Para minimizar este tipo de efectos de confusión, se ha implementado una versión modificada del laberinto Lashley III. Este laberinto se basa en el aprendizaje de la ruta, en el que los ratones aprenden a navegar por un laberinto a través de una exposición repetida bajo condiciones de estrés bajo, fase oscura, por ejemplo, no la privación de alimentos / agua, hasta que navegar por una ruta desde el punto de inicio a una jaula de pseudo-casa con 0 o 1 error (s) en dos ensayos consecutivos. Nosotros consideramos esto como una prueba de comportamiento de baja tensión, ya que no se basa en estímulos negativos para fomentar la exploración del laberinto y el aprendizaje de la tarea. El aparato consiste en un cajón de salida modular, un cuerpo laberinto de 4 brazos, y una caja de meta. Al final de la caja de meta es una jaula de pseudo-casa que contiene ropa similar a la encontrada en la jaula del animal y es específico para cada animal durante la duración de las pruebas de laberinto. Se ha demostrado previamente que esta jaula pseudo-casa ofrece una recompensa suficiente para motivar a los ratones para aprender a navegar por el laberinto<sup&gt; 1</sup&gt;. Aquí, se presenta la visualización del procedimiento de laberinto Lashley III en el contexto de la evaluación relacionada con la edad las diferencias en el aprendizaje y la memoria en ratones con una comparación del comportamiento de aprendizaje en dos cepas diferentes de ratones de fondo. Esperamos que otros investigadores interesados ​​en evaluar los efectos del envejecimiento o la vulnerabilidad al estrés en ratones se consideran en este laberinto una atractiva alternativa a las pruebas de comportamiento que implican las tareas de aprendizaje más estresante y / o señales visuales.

El laberinto Lashley III es una tarea de la ruta de aprendizaje que no se basa en estímulos adversos o las señales visuales. Por tanto, es una opción muy atractiva para evaluar el aprendizaje y la memoria, especialmente en los ratones envejecidos o de otra manera donde el estrés es un factor.

De baja tensión Ruta de Aprendizaje Usando el laberinto Lashley III en ratones

Muchas de las pruebas de comportamiento diseñadas para evaluar el aprendizaje y la memoria en roedores, particularmente en ratones, dependen de señales visuales, de la privación de alimento y/o agua, u otros...

En el laberinto en forma de tres brazos de Lash, los ratones aprendieron a navegar a través de una serie de brazos para llegar a un entorno pseudo de jaula hogar. En ensayos repetidos, al comienzo de cada ensayo, los ratones se colocan en el Starbucks, que está separado del laberinto por una puerta. Una vez abierta la puerta, los ratones entran en los brazos del laberinto y pueden explorar libremente el camino que recorren.Se registra el recorrido en el laberinto, incluyendo las entradas a zonas de error en callejones sin salida. Al ingresar al compartimento dorado, se cierra otra puerta para evitar el reingreso al laberinto y dirigir al ratón hacia la jaula hogar simulada. Al finalizar el ensayo del laberinto, se compara el desempeño en el laberinto entre grupos de edad o cepas para evaluar su papel en el aprendizaje y la memoria.Hola, soy Amanda Bressler. Trabajo en el laboratorio de Anne Andrews aquí en la Universidad Estatal de Pensilvania. Hoy les voy a mostrar cómo utilizar el laberinto de Lashley tres.Utilizamos este laberinto principalmente en nuestro laboratorio para estudiar genéticamente ratones modificados envejecidos. Así que comencemos. Primero, veamos cómo es el laberinto de Lashley tres.El laberinto de caja de inicio, los brazos y la caja dorada son modulares para permitir la limpieza y la modificabilidad del laberinto. Las paredes de la caja de inicio, el laberinto, los brazos y la caja dorada están todas construidas en plexiglás negro para eliminar las pistas visuales del exterior y del interior del laberinto. Los brazos del laberinto miden 45 centímetros de largo, siete centímetros de alto y cinco centímetros de ancho.Las puertas que conducen a brazos consecutivos del laberinto tienen cuatro centímetros por cuatro centímetros y están situadas a 11 centímetros de las paredes externas del laberinto. La caja dorada mide 19,5 centímetros de largo por siete centímetros de alto por cinco centímetros de ancho. La caja de inicio mide ocho centímetros por 9,5 centímetros por siete centímetros. Se colocan piezas separadas de plexiglás transparente encima del laberinto Starbucks y la caja dorada para permitir la visualización de cada ratón a medida que avanza a través del laberinto.Aunque impedir que los ratones escapen del laberinto descansa sobre una base construida de plexiglás rojo que es lo suficientemente grande como para sostener las tres piezas del laberinto, más una jaula hogar simulada del mismo tamaño que la jaula hogar estándar del animal. Para preparar las jaulas hogar simuladas antes del primer ensayo de MACE, agregue material fresco de cama a los fondos individuales de las jaulas con aberturas cortadas en los lados, coloque las tapas de alambre sobre los fondos de las jaulas y numérelas individualmente, una para cada animal en una cohorte de prueba. Estas jaulas servirán como jaulas hogar simuladas individuales para cada animal durante todo el período de evaluación.Con el laberinto preparado, veamos cómo realizar la prueba conductual durante al menos una hora. Antes de la prueba, traslade los animales a la sala de pruebas conductuales para permitirles aclimatarse al entorno de prueba. Treinta minutos antes de la prueba, retire la comida y el agua de todas las jaulas de alojamiento.Mantenga la comida y el agua en la sala de pruebas de comportamiento, pero fuera del alcance de los ratones. El experimento suele programarse de manera que la comida y el agua se retiren 30 minutos después del cambio de la fase clara a la fase oscura, cuando ocurre el pico de alimentación. Esto asegura que los animales estén mayormente saciados de comida y agua antes de la prueba, a efectos de demostración.En este video, mostramos este procedimiento bajo luz brillante. La prueba generalmente se realiza durante la fase oscura del ciclo de luz y oscuridad. Cuando haya transcurrido el período de preprueba de 30 minutos, limpie el laberinto con etanol al 70 %.Salga por la puerta que va desde Starbucks hacia el laberinto. Brazos cerrados. Las puertas en ambos extremos de la caja dorada deben dejarse abiertas.Ahora coloque la jaula artificial correspondiente al primer animal. Al final de la caja dorada, lleve al primer ratón al laberinto, sosteniéndolo en la palma de la mano.Coloque el ratón en el Starbucks y sustituya la tapa. Cuando esté en posición para observar el laberinto sin obstáculos, abra la puerta del compartimento de inicio e inmediatamente active tres cronómetros. Cuando las cuatro patas del ratón hayan salido del compartimento de inicio, cierre la puerta del compartimento y detenga manualmente el primer cronómetro.Registre el recorrido. El ratón viaja mientras navega por el laberinto. En una hoja de anotaciones, se considera que un ratón ha entrado en una nueva zona o brazo del laberinto cuando sus cuatro patas han cruzado a esa área.Cuando las cuatro patas entren en la caja objetivo, cierre la puerta entre el laberinto y la caja dorada y detenga el segundo cronómetro. Cuando el ratón haya entrado completamente en la jaula falsa de descanso, cierre la puerta entre la caja dorada y la jaula. Detenga el tercer cronómetro.Registre los tiempos de los tres cronómetros y cuente el número de errores que ha cometido el ratón. Un error se define como la entrada en una zona de callejón sin salida o el retroceso a través de un brazo del laberinto ya recorrido. Deje al animal en la jaula pseudocasa durante un minuto antes de devolverlo a su jaula de origen.Después de probar a todos los ratones del grupo, espere 30 minutos y luego devuelva la comida y el agua a todos los ratones. Finalmente, regrese los animales a su sala de cría. Repita este procedimiento durante noches consecutivas con un ensayo por día de prueba por animal hasta que todos los ratones del grupo hayan alcanzado un criterio definido de aprendizaje o hasta que se haya realizado un número predeterminado de ensayos.Se considera que un ratón ha aprendido el laberinto cuando puede realizar la tarea con cero o un error en dos ensayos consecutivos. Los ratones se prueban en el mismo orden en ensayos sucesivos. Ahora mostraremos algunos resultados conductuales representativos.Aquí observamos datos de ratones machos jóvenes de dos meses y envejecidos de 24 meses, C57BL/6 y CR, que fueron entrenados en el laberinto de Lashley durante hasta 15 ensayos. En la figura 2A, los ratones jóvenes aprendieron el laberinto en un promedio de 7,6 días. En contraste, los animales envejecidos tardaron 11,7 días en alcanzar el criterio.Hubo una marcada tendencia a que los ratones C57, negros seis NCR R de edad avanzada tardaran más en aprender el mace. El índice de aprendizaje es la relación entre los ingresos correctos a brazos y los segmentos totales del recorrido en un solo ensayo, cuando el índice de aprendizaje se calcula en la figura dos B. Ambos grupos de edad tienen una relación de aproximadamente 0,50 para el primer ensayo. Tanto los ratones jóvenes como los de edad avanzada muestran un aumento constante en el índice de aprendizaje desde los ensayos dos hasta el cuatro, pero no hubo diferencias significativas entre los dos grupos mostrados.Aquí se presentan datos de estudios que examinan el efecto del linaje genético de fondo sobre el comportamiento de aprendizaje. Se compararon ratones macho jóvenes, C 57, black six NCR y ratones controles CD uno, de cuatro a cinco meses. Los ratones C 57 black six son los mismos ratones que el grupo joven en la figura dos.En la figura tres, los ratones CD uno aprenden el laberinto de Lashley tres en 4,5 días. No hubo diferencias significativas entre las cepas en los días necesarios para alcanzar los criterios. Por el contrario, el examen del índice de aprendizaje en la figura tres B muestra que, aunque todos los animales navegaban por el laberinto en el primer ensayo por azar, los ratones CD uno aprendieron la tarea más rápidamente.Esto se ilustra mediante el aumento estadísticamente significativo del índice de aprendizaje en los ensayos dos a cuatro en ratones CD uno en comparación con ratones C57BL/6 y CR. Curiosamente, si los ratones CD uno continúan siendo entrenados en el laberinto más allá del punto en que alcanzan el criterio, exhiben un comportamiento indicativo de sobreentrenamiento. En la figura cuatro A, se observa un aumento en el número de errores cometidos después del día cinco. El día cinco fue el día en que los ratones CD uno alcanzaron el criterio.Los ratones CD uno también pasaban más tiempo dentro del MACE después de adquirir la tarea, lo cual puede observarse en la figura cuatro B. Así que acaban de ver cómo utilizar el laberinto Lashley tres para medir el aprendizaje y la memoria en ratones. Al implementar este experimento en su propio laboratorio, puede ser necesario realizar algunos trabajos piloto, ya que diferentes cepas de ratones adquirirán las MAs a distintas velocidades y podrían estar sujetas a sobreentrenamiento. Gracias por ver este video y buena suerte en sus futuros experimentos.

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Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Este video muestra cómo usar el Laberinto de Barnes con un ratón. El procedimiento de prueba Barnes Maze es utilizado por los investigadores para evaluar el aprendizaje espacial y la memoria en animales de laboratorio después de ensayos repetidos.

Barnes Maze: Un método para evaluar el aprendizaje espacial y la memoria en animales de laboratorio

El secano Barnes laberinto es ampliamente utilizado para medir la capacidad de navegación espacial en respuesta a estímulos aversivos ligeramente. Durante días consecutivos, el rendimiento (por ejemplo, la latencia para localizar huida jaula) de los sujetos de control mejora, indicativo de aprendizaje normal y la memoria. Las diferencias entre las ratas y ratones necesitan aparatos y la metodología de los cambios que se detallan aquí.

Barnes Maze estrategias de ensayo con pequeñas y grandes modelos de roedores

El objetivo de este protocolo es investigar la cognición espacial en roedores. El laberinto acuático de doble H es una prueba novedosa, que es particularmente útil para dilucidar los diferentes componentes del aprendizaje, la consolidación y la memoria, así como la interacción de los sistemas de memoria.

El Doble-H Maze: Una prueba del comportamiento robusto para el Aprendizaje y la Memoria en roedores

El Open de campo Torre Maze (OFTM) es un laberinto creado para estudiar los mecanismos de comportamiento y neurales de aprendizaje espacial (por ejemplo, colocación o la respuesta-learning) en ratas. Este laberinto es especialmente útil para los experimentadores que quieran utilizar un paradigma laberinto no estresante para investigar el aprendizaje espacial en sus investigaciones.

Coloque y Aprendizaje de respuesta en el Abierto de campo Torre Maze

Este protocolo describe un ensayo conductual, basado en la prueba del laberinto de Barnes, para estudiar cómo instintiva defensiva acciones son modificadas por el conocimiento del entorno espacial.

Un ensayo conductual para investigar el papel de la memoria espacial durante defensa instintiva en ratones

Este protocolo mide aprendizaje espacial y memoria con el laberinto de Barnes. Un nuevo paradigma de Damsel en señal de socorro se utiliza para evaluar la actividad locomotriz y conducta prosocial en ratones.

Analizar el aprendizaje espacial y el comportamiento Prosocial en los ratones con el laberinto de Barnes y paradigmas de la damisela en peligro

La tarea de barrera del laberinto Y es una prueba de comportamiento que examina la motivación para gastar esfuerzo para recompensar. Aquí, discutimos la prueba de múltiples factores de estrés crónicos bien validados, incluyendo la corticosterona crónica y el estrés de derrota social con este comportamiento, así como el nuevo estrés crónico crónico de la derrota social no discriminatorio (CNSDS), que es eficaz en las mujeres.

El estrés crónico cambia el comportamiento de la elección relacionada con el esfuerzo en una tarea de barrera del laberinto Y en ratones

El presente protocolo describe un laberinto reconfigurable, un sistema único para probar la navegación espacial y los fenotipos de comportamiento en roedores. La adaptabilidad de este sistema de laberinto permite la ejecución de varios experimentos en un solo entorno físico. La facilidad de reordenamiento estructural genera resultados experimentales fiables y reproducibles.

Utilización de un sistema de laberinto reconfigurable para mejorar la reproducibilidad de las pruebas de navegación espacial en roedores

En este artículo se presenta un protocolo que permite una evaluación no invasiva y automatizada del rendimiento de la motricidad fina, así como el aprendizaje motor adaptativo y asociativo ante retos, utilizando un dispositivo denominado Escalera Erasmus. La dificultad de la tarea se puede ajustar para detectar el deterioro motor que va desde grados mayores hasta sutiles.

Monitorización del aprendizaje motor fino y asociativo en ratones mediante la escalera Erasmus

La mayoría de los experimentos de comportamiento para roedores se diseñaron originalmente para ratas. Debido a las diferencias de comportamiento entre ratas y ratones, a veces se requieren modificaciones para los ratones. Presentamos un método para probar la memoria de trabajo espacial en ratones, minimizando el estrés durante la tarea de memoria de trabajo.

Una tarea de memoria de trabajo espacial apetitiva para ratones en un laberinto radial semiautomatizado de 8 brazos, que reduce la asociación de memoria temerosa en el laberinto

Aprende a evaluar el aprendizaje y la memoria en ratones usando el laberinto Lashley III, un método sin estrés ideal para estudios de envejecimiento y comparación entre cepas.

De baja tensión Ruta de Aprendizaje Usando el laberinto Lashley III en ratones

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