Name: Los espermatozoides de cosecha y la inseminación artificial de los ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: Aprende la inseminación artificial en ratones mediante la extracción de esperma de machos y su inyección en hembras ovulantes. Este método permite controlar el momento exacto de la fecundación en estudios de biología reproductiva y transgénicos.

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Me gustaría dar las gracias a Mike Dewey desde el Centro de archivo Peromyscus genética por su valiosa información, la paciencia y el conocimiento sobre la reproducción de roedores.

Inseminación artificial La inseminación artificial se utiliza en lugar de cruces naturales para aumentar las probabilidades de que todas las mujeres han de quedar embarazada. Dos hombres se utilizó para cada uno hembras superovuladas o una mujer sabe que está en celo. El epidídimo caudae de ratones machos maduros fueron colocados en una suspensión de leche 9% y el tajo con agujas de calibre 18. El esperma se les permite nadar libremente durante unos minutos y luego los epidídimos fueron tomadas de la mezcla. La suspensión se evaluó con un microscopio en busca de la confluencia y espermatozoides móviles. Un contundente calibre 22 de 1 ½ pulgadas de largo aguja se utiliza para administrar los espermatozoides. Una curva de 120 º se colocó cerca de 3 / 4 de la bajada de la aguja. La aguja se introduce en la vagina hasta la curva y 0.025 - 0.05mls inyectado. Si un asistente se utiliza para mantener a la hembra en la posición adecuada, el uso de anestesia no es necesaria. Preparación <ol><li> Use cuatro hombres por 6 mujeres </li><li> La eutanasia a los hombres en el vivero </li><li> Prepare unos 5 ml de leche 9% de la leche en polvo </li><li> Poner 1,5 ml en placa de Petri pequeña </li><li> Cortar el epidídimo y conducto deferente </li><li> Poner en 1,5 ml de leche 9% </li><li> El uso de dos agujas de calibre 18, y el uso de movimiento de corte largo con agujas, corte abierta el epidídimo y conductos deferentes para liberar el esperma </li><li> Sacar a la izquierda sobre el tejido y comprobar que los espermatozoides bajo microscopio </li></ol> Inyección <ol><li> Uso aguja sin punta en ángulo de 120 ° </li><li> Mantenga el ratón en la mano y se inyecta la mezcla. Si siente incómodo con una persona que tiene y por vía intravenosa, dos personas pueden ser utilizados. Sin anestesia se debe utilizar, como en uno sabe cómo puede afectar el procedimiento. </li><li> Utilice 0.05 ml de la mezcla de esperma / leche por hembra </li></ol> Destinatario mujeres <ol><li> Hacer un frotis vaginal en hembras receptoras (en ese momento las hembras receptor debe estar en el proestro / estro) </li><li> Las hembras que no han llegado a estro para el día 5 probablemente no debería utilizarse </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Placa de Petri</td><td>Herramienta</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-30</td><td></td></tr><tr><td>Aguja 18 G</td><td>Herramienta</td><td>BD Biosciences</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>Leche en polvo</td><td>Reactivo</td><td>Cualquier proveedor</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jeringa de 1 mL</td><td>Herramienta</td><td>National Scientific Company</td><td>S7510-1</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas</td><td>Herramienta</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5060</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras</td><td>Herramienta</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5882</td><td></td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco&amp;rsquo;s</td><td>Reactivo</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>14200-075</td><td></td></tr><tr><td>Aguja roma de 22 G</td><td>Herramienta</td><td>Give to me</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

los espermatozoides de cosecha y la inseminación artificial de los ratones

Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice

Los roedores del género Peromyscus (ratón venado) son los mamíferos nativos más prevalente en América del Norte. Peromyscus especies se utilizan en una amplia gama de investigación, incluyendo la toxicología, la epidemiología, la ecología, comportamiento, y los estudios genéticos. Aquí un modelo útil para las manifestaciones de la inseminación artificial. Métodos similares a los que se muestran aquí se han utilizado previamente en varios estudios el ratón venado, todavía no existe un protocolo detallado se ha publicado. Aquí se demuestra el método básico de la inseminación artificial. Este método consiste en la extracción de los testículos de los roedores, y luego aislar los espermatozoides del epidídimo y conducto deferente. El esperma maduro, ahora en una mezcla de leche, se colocan en el tracto reproductivo de la hembra en el momento de la ovulación. La fertilización se cuenta como el día 0 para el tiempo de desarrollo del embrión. Los embriones se pueden recuperar en el tiempo deseado de puntos y manipulado. La inseminación artificial se puede utilizar en una variedad de especies de roedores en el momento exacto de embriones es crucial y difícil de obtener. Esta técnica es de vital importancia para las especies o cepas (incluyendo la mayoría de Peromyscus) que no pueden aparearse inmediatamente y / o donde el apareamiento es difícil de evaluar. Además, la inseminación artificial proporciona tiempo exacto para el desarrollo del embrión ya sea en la cartografía de progreso en el desarrollo y / o trabajo transgénico. Reducción del número de animales se pueden utilizar desde la fecundación está garantizada. Este método ha sido vital para fomentar el sistema de Peromyscus, y se espera que se benefician los demás.

Este protocolo muestra los métodos para la extracción de los espermatozoides desde los testículos de los machos y luego inseminar a las hembras. Este procedimiento es útil cuando el tiempo exacto que se necesita en los estudios de desarrollo, así como el trabajo transgénico.

Los espermatozoides de cosecha y la inseminación artificial de los ratones

Los roedores del género Peromyscus (ratones ciervo) son los mamíferos nativos más prevalentes de América del Norte. Las especies de Peromyscus se utilizan en una amplia gama de investigaciones...

Mi nombre es Amanda Dli del laboratorio del Dr. Paul Verana en la Universidad de California en Irvine. Hoy voy a demostrar el procedimiento de inseminación artificial. Esto consiste en extraer el esperma del macho y luego introducir ese esperma en una hembra en ovulación.La razón por la que podría desear hacer esto es porque el macho y la hembra podrían no aparearse en el momento en que usted lo necesite o podrían no aparearse en absoluto. Asimismo, esto también puede utilizarse con espermatozoides congelados si una línea de ratón es muy importante. Este procedimiento es muy importante verlo demostrado porque muchos manuales y revistas no muestran el procedimiento adecuado para manipular al ratón.El ratón puede manipularse e inyectarse con una sola persona sin utilizar ningún anestésico en la hembra. Esto implica que la hembra no sufre ningún tipo de lesión y garantiza que la fertilización pueda seguir el mejor camino posible. Las herramientas de disección que utilizaremos son dos juegos de pinzas finas y un par de tijeras afiladas.Estos se utilizarán para aislar el mayor número de espermatozoides a lo largo de los testículos y la grasa alimenticia. Una vez hecho esto, usaremos la

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Aquí se demuestra que el nuevo desarrollo • Kit de Cryo para la criopreservación de espermatozoides de ratón. Dos células etapa de desarrollo del embrión con esperma congelado-descongelado se ha mejorado consistentemente en cinco cepas de ratón con el uso de este kit. Durante un período de 1,5 años, 49 líneas de ratones genéticamente modificados fueron archivados por la crioconservación de esperma con el I • Kit de Cryo y más tarde recuperado con éxito por fecundación in vitro.

Criopreservación de espermatozoides de ratón y de recuperación con el I · Kit de Cryo

La microinyección de ovocitos de ratón se utiliza comúnmente tanto para la transgénesis clásica ( es decir, la integración aleatoria de transgenes) como para la orientación de genes mediados por CRISPR. Este protocolo revisa los últimos avances en microinyección, con especial énfasis en el control de calidad y las estrategias de genotipificación.

Generación de ratones modificados genéticamente a través de la microinyección de ovocitos

Licuefacción del semen es necesario para liberarse del gel seminal de los espermatozoides. Este estudio proporciona los procedimientos para la recogida de semen del coito posterior al tracto reproductor femenino y medir el tiempo de licuefacción del semen.

Colección de postnupcial Semen del aparato reproductor femenino y las mediciones de licuefacción del Semen en ratones

Aquí, presentamos un protocolo para promover la integración del transgén y la producción de ratones transgénicos fundador con alta eficacia por una simple inyección de lentivirales vector en el espacio perivitelino de un ovocito fertilizado.

Lentivirales mediación producción de ratones transgénicos: un método Simple y altamente eficiente para el estudio directo de los fundadores

Aquí, presentamos un método modificado para la criopreservación de embriones unicelulares, así como un protocolo que combina el uso de embriones de congelación descongelado y electroporación para la generación eficiente de ratones modificados genéticamente.

Uso de embriones congelados descongelados para la producción de alta eficiencia de ratones modificados genéticamente

Muchos modelos de roedores de endometriosis están limitados por la complejidad técnica, la reproducibilidad y / o la necesidad de animales inmunocomprometidos o ratones reporteros especiales. Presentamos un sistema simplificado de inducción de lesiones utilizando cualquier ratón experimental con un sistema de puntuación objetivo verificable de forma independiente y sin necesidad de ovariectomía o cirugía de supervivencia.

Un modelo murino singénico de endometriosis utilizando ratones de ciclo natural

Aquí, describimos una técnica simple destinada a la generación eficiente de ratones genéticamente modificados llamada CRISPR RNP Electroporación de Cigotos (CRISPR-EZ). Este método proporciona reactivos de edición por electroporación en embriones con una eficiencia cercana al 100%. Este protocolo es efectivo para mutaciones puntuales, pequeñas inserciones genómicas y deleciones en embriones de mamíferos.

Edición eficiente del genoma de ratones mediante electroporación CRISPR de cigotos

El método de manipulación cervical presentado puede inducir pseudoembarazo en ratones sin necesidad de reproductoras con machos vasectomizados. La inducción del pseudoembarazo es necesaria para el éxito de la transferencia embrionaria no quirúrgica y de la inseminación artificial no quirúrgica, que también se presentan.

Inducir pseudoembarazo en ratones hembra sin necesidad de machos vasectomizados antes de la transferencia embrionaria no quirúrgica o la inseminación artificial

Aquí, presentamos un método para realizar la inyección redonda de espermatida (ROSI) en ratones, una técnica con aplicaciones clínicas prometedoras y utilidad para investigar los mecanismos subyacentes al desarrollo embrionario.

Inyección de espermatida redonda de ratón

Aquí, presentamos un protocolo para establecer un modelo de ratón de inyección intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI) y transferencia de embriones (ET), lo que nos permite observar cambios relacionados con la edad en el metabolismo de la glucosa que pueden atribuirse a ICSI, proporcionando información sobre sus posibles impactos a largo plazo en el desarrollo humano.

Monitorización de la glucosa en sangre en crías de ratón después de la inyección intracitoplasmática de espermatozoides

Aprende la inseminación artificial en ratones mediante la extracción de esperma de machos y su inyección en hembras ovulantes. Este método permite controlar el momento exacto de la fecundación en estudios de biología reproductiva y transgénicos.

Los espermatozoides de cosecha y la inseminación artificial de los ratones

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