Procedimiento de mama epiteliales de Trasplantes

Este video demuestra los procedimientos para obtener memoria. Epitelio, elimine la almohadilla de grasa de la memoria y trasplante epitelio exógeno para estudiar el desarrollo de la memoria en ratones de tres semanas de edad. El crecimiento del árbol epitelial de la memoria está confinado a la vecindad del pezón, y la almohadilla de grasa carece en gran medida de epitelio de la memoria. A medida que el ratón madura, el árbol epitelial crece a través de la almohadilla de grasa.

A las siete semanas de edad, el árbol ductal epitelial se extiende por todo el tejido adiposo. Si se elimina la pequeña porción del tejido adiposo que contiene epitelio a las tres semanas de edad, el epitelio endógeno nunca colonizará el tejido adiposo receptor y se dice que el tejido adiposo está despejado, permaneciendo así en la madurez. Los injertos de epitelio donante o células epiteliales, sin embargo, tienen la capacidad de extender árboles ductales por todo el tejido adiposo receptor despejado.

Tejido adiposo. Luego, la histología puede utilizarse para monitorear la progresión del desarrollo de la memoria en tejidos trasplantados de animales transgénicos o de prueba. Hola, me llamo Joseph Jerry y estoy en el Departamento de Ciencias Veterinarias y de Animales de la Universidad de Massachusetts.

Hola, mi nombre es Karen Dunphy. Trabajo en el laboratorio de Jerry. Hoy vamos a realizar un trasplante de epitelio mamario.

Utilizamos este procedimiento para estudiar la base molecular y celular de la génesis de tumores de memoria y un modelo para el cáncer de mama. Comencemos. El primer paso del procedimiento de trasplante consiste en obtener tejido epitelial de memoria del ratón donante.

Comience por lavar un ratón hembra recientemente sacrificado con etanol al 70% sin perforar las membranas de las URS de la cavidad corporal ventral. Realice un corte medio sagital a través de la piel que se extienda desde el pubis hasta el esternón. Luego, haga un corte oblicuo desde la incisión inicial en el pubis hacia cada pata trasera.

Con pinzas curvas, sujete las membranas de los SRU. Luego, con pinzas rectas dentadas, sujete el borde cortado de la piel y retire cuidadosamente la pared corporal de las membranas de los S cs.

Para exponer la cuarta glándula inguinal asociada a la cara inferior de la pared corporal, se localiza el ganglio linfático dentro de la glándula asociada en la intersección de tres vasos sanguíneos prominentes en la glándula asociada y puede percibirse como un nódulo denso dentro del tejido adiposo. Con la punta de un par de tijeras oftálmicas, corte el tejido adiposo que rodea el ganglio linfático. Luego, con un dedo sobre la cara epidérmica de la piel, aplique presión para elevar el ganglio fuera del tejido adiposo y extráigalo.

Con un par de fórceps curvos, deseche el ganglio linfático. Ahora, sosteniendo los márgenes de la piel, agarre el cojín adiposo con el borde curvo de un par de fórceps curvos y desprenda gradualmente el cojín adiposo de la pared corporal. Siguiendo la dirección del cojín adiposo hacia la superficie dorsal del ratón, retire completamente la glándula adiposa en una sola pieza.

Coloque la glándula mamaria sobre un bloque de corte plástico estéril con una pequeña cantidad de medio, aproximadamente 200 microlitros sobre la superficie de la glándula para mantenerla húmeda. Luego, pique la glándula en trozos de un milímetro de tamaño con una cuchilla nueva. Divida la glándula picada en cuatro porciones.

Luego, utilizando pinzas, distribuya entre cuatro viales criogénicos con medio de congelación. Coloque los viales criogénicos en un congelador celular Nalgene con 250 mililitros de alcohol isopropílico en el compartimento exterior. A continuación, coloque el congelador celular a menos 70 grados Celsius durante 24 horas.

Después de 24 horas, transfiera los viales congelados de fragmentos de memoria a nitrógeno líquido hasta que sean necesarios para el trasplante. Cada vial criogénico contiene fragmentos suficientes de glándulas de memoria para trasplantar en los tejidos adiposos vaciados de cuatro a ocho ratones huésped. Después de verificar la profundidad de la anestesia en un ratón huésped de tres semanas mediante una compresión firme del dedo del pie, sujete firmemente al ratón con el lado ventral hacia arriba y las extremidades extendidas sobre una plataforma quirúrgica, de modo que su abdomen quede tenso.

Se debe administrar analgésico preoperatorio, bupivacaína o buprenorfina, por vía subcutánea. Desinfecte el área quirúrgica con alcohol y una solución antiséptica a base de yodo utilizando fórceps. Sujete la piel unos milímetros por encima de la pelvis y levántela del abdomen.

Corte cuidadosamente la piel, asegurándose de que la incisión inicial no esté demasiado cerca de la uretra, ya que la colocación de clips quirúrgicos podría interferir con la capacidad del ratón para orinar. A continuación, teniendo cuidado de no perforar las membranas de las SRUs, realice un corte midsagital a través de la piel que se extienda desde el pubis hasta el esternón.

Ahora, a partir de la incisión inicial, realice cortes oblicuos a través de la piel desde la línea media hacia cada pata trasera, atravesando la pelvis. Utilizando fórceps curvos, agarre suavemente las membranas serosas de la pared corporal ventral. Luego, use fórceps para tejidos para sujetar el borde cortado de la piel y tire de la pared corporal separándola de las membranas serosas.

Para exponer la cuarta glándula inguinal mamaria, identifique la cuarta glándula mamaria. Identifique la quinta glándula mamaria, cauterice el nódulo del pezón y las dos arterias que conducen al nódulo. Separe la cuarta y la quinta glándulas, luego cauterice el margen de la quinta glándula.

A continuación, utilizando tijeras, corte transversalmente el páncreas justo ventral al ganglio para dividir el páncreas de la cuarta glándula mamaria. Con pinzas curvas, sujete firmemente la porción ventral del páncreas y tire de ella alejándola de la pared corporal. Es recomendable presionar el tejido extirpado entre dos portaobjetos etiquetados y fijarlo en fijador de carnoy.

Posteriormente, el tejido puede teñirse, montarse y evaluarse para determinar márgenes libres. Utilizando pinzas, retire todas las trazas de la glándula de la memoria alrededor de la región de la porción removida del tejido adiposo. El animal ya está listo para el trasplante de tejido o células.

Se puede trasplantar tejido epitelial donante fresco o congelado rápidamente en la almohadilla grasa despejada. Alternativamente, se pueden trasplantar líneas celulares epiteliales inmortalizadas, líneas celulares de tumores epiteliales, o células primarias. Para detalles sobre la preparación de las células, consulte el protocolo escrito adjunto para el trasplante de fragmentos de epitelio. Preparado.

Este video comienza descongelando un vial criogénico de epitelio y transfiriendo los fragmentos a una placa de Petri que contiene medio fresco. Para diluir el DMSO con tijeras, realice un bolsillo en el tejido adiposo epitelial despejado de la hembra receptora. Luego, utilizando fórceps de aguja, coloque un fragmento de epitelio donante de un milímetro dentro del bolsillo.

Si es necesario, mantenga el bolsillo cerrado con pinzas para tejidos y retire las pinzas para aguja de modo que el tejido permanezca en su lugar. Sujete los márgenes opuestos de la piel. Manténgalos juntos con pinzas.

Levántelos alejándolos de las membranas cerosas de la cavidad corporal ventral y cierre con clips quirúrgicos. Utilice dos clips para cerrar la incisión midsagital y un clip para cada incisión oblicua. Evite obstruir la uretra si es necesario.

Cierre las heridas en la piel en el punto de intersección de las incisiones midsagital y oblicua con una sutura. Coloque el ratón en su jaula y mantenga la jaula bajo una lámpara de calor hasta que el ratón haya recuperado la conciencia. Los clips de la herida deben retirarse después de dos semanas.

Las siguientes diapositivas muestran imágenes representativas de lo que se puede esperar encontrar en la glándula mamaria del hospedador tras eliminar el cojín alimentado y trasplantar el epitelio; esta imagen muestra el epitelio mamario endógeno extraído de un ratón de tres semanas de edad. En el procedimiento de eliminación del tejido glandular, observe los márgenes nítidos en el borde de corte. Se debe preparar una preparación completa como esta tras cada procedimiento para evaluar la presencia de márgenes limpios.

Esta imagen muestra la almohadilla grasa aclarada del ratón siete semanas después del procedimiento de aclaramiento. Observe que toda la almohadilla grasa carece de memoria, epitelio, hematina y asina. La tinción de una almohadilla grasa aclarada siete semanas después del procedimiento de aclaramiento también demuestra que la glándula carece de epitelio memorioso.

Se muestra un montaje completo representativo de una almohadilla grasa despejada trasplantada con epitelio memorioso donante de un ratón de 10 semanas de edad. Obsérvese que el epitelio trasplantado produjo árboles ductales epiteliales normales, hematina y asin. Tinción de una almohadilla grasa despejada y del epitelio memorioso.

El trasplante epitelial a la misma edad revela la producción normal de conductos epiteliales a partir del epitelio exógeno. Aquí, la hematina y la asina, tinción de una almohadilla grasa despejada, muestran un trasplante epitelial que se desarrolló en un tumor mamario. Acabamos de mostrarle cómo cosechar el epitelio mamario y realizar un trasplante epitelial mamario.

Al realizar este procedimiento, es importante recordar seccionar las conexiones entre la cuarta y la quinta glándula para cauterizar el nódulo y el pezón, y eliminar todos los rastros de epitelio endógeno. Se debe asegurar que no exista ninguna posibilidad de que el epitelio endógeno crezca dentro del lecho adiposo despejado. Además, es recomendable conservar la totalidad de la porción de la glándula mamaria removida para verificar márgenes despejados.

Así es todo. Gracias por ver este video y buena suerte con sus experimentos.