Recuperación de los ovocitos de ratón

Mi nombre es Amanda dli. Soy del laboratorio del Dr. Paul Verana en la Universidad de California en Irvine. Hoy les mostraré el procedimiento para la recuperación de ovocitos.

Esto implica aislar el videx de la hembra. Una vez que los ovex están aislados, inyectaremos medio FHM a través del videx, y luego las cytes deberían salir del útero. Una vez realizado esto, aislaremos las cytes en el medio y utilizaremos este material para experimentos futuros.

Lo que quizás desee usar este procedimiento para, además de aislar cito, es aislar embriones en puntos temporales específicos. Una razón por la que podría desear ver este procedimiento en formato de video es porque las diferentes partes del oviducto pueden ser muy difíciles de reconocer. En este video, señalaré el infundíbulo, donde inyectará el medio FHM.

Las herramientas de disección que utilizará consisten en dos juegos de pinzas finas y un par de tijeras afiladas. Los conductos ovígeros extraídos de la hembra se colocarán en medio FHM, el cual se encuentra en una placa de cultivo tisular de 35 milímetros. Los óvulos se recuperarán utilizando una aguja de extremo romo de 30 milímetros acoplada a una jeringa de un mililitro, y el uc se estabilizará con una pinza fina.

El medio de mantenimiento FHM se utiliza para recolectar los ovocitos. KSOM es el medio empleado para permitir el desarrollo de los ovocitos en el interior del incubador, en caso de que sean fertilizados. Una vez recuperados los óvulos y embriones del oviducto, utilizaremos una pipeta de transferencia de vidrio, elaborada a partir de un tubo capilar, que lleva acoplado un tubo flexible, para aspirar mediante pipeta de boca y transferirlos a un medio de mantenimiento.

Se utiliza un recipiente de vidrio cóncavo para sostener los embriones y los huevos. Estos pueden colocarse en cada círculo cóncavo de manera que queden en una ubicación definida, lo que facilita su localización. Este recipiente se coloca dentro de este contenedor para poder introducirlo en una incubadora de CO2 sin necesidad de usar aceite.

Encima del medio FHM o KSOM, dependiendo del medio, se coloca agua en la base, se cierra la llave y el líquido permanece en su lugar. Se utiliza etanol al 70 % para asegurarse de que el pelo no interfiera. Se realizará una pequeña incisión en la región abdominal y otra incisión en la cavidad abdominal.

Aumentaremos un corte para exponer la región abdominal. Una vez hecho esto para exponer el útero, moveremos los intestinos, por cierto, y luego el útero está bastante por debajo. El útero tiene forma de Y y rotan salvajemente tomando parte del útero.

Cuando se corta, el oviducto tiene aspecto de espagueti. Voy a intentar tomar una parte del oviducto. Tomaré la UCT y una parte de los ovarios, que está rodeada de grasa.

El otro lado va a ser tomado. En este momento, nuevamente, vamos a tomar el ovario o el útero. Tome el útero aquí, corte por debajo de nuestro punto de fijación. En este punto se encuentran los conductos vid.

Voy a llevar una parte del ovario OV con nosotros. Esto luego se colocará en medio. El útero sigue contrayéndose.

El útero está compuesto de músculo liso, por lo que, aunque esté separado del cuerpo, las neuronas siguen disparándose. Aquí se muestra el útero. Mientras que el conducto OV parece espagueti y el ovario se encuentra por encima, el conducto OV no está realmente unido al ovario.

Aunque hasta este momento solo hemos mostrado una porción del ovario, mi mano dominante es la derecha, con la que sostengo la aguja de calibre 30 con extremo romo. Utilizo esta aguja como una pinza para aislar el in fibula. Una vez que se ha aislado, inyectaré la aguja roma en el in fibula e introduciré un líquido que saldrá a través del útero.

Mi mano izquierda sostiene una pinza fina. Esta se utiliza para aislar la amígdala fibular y mantener todo en su lugar. La amígdala tiene forma de trompeta y está aislada aquí.

La punta de mi aguja está en la fíbula, que atravesaba la capa de tejido. Bien. Para asegurarme de que he aislado todos los embriones y óvulos, me gusta presionar como si fuera un tubo de pasta dental sobre el útero. Una vez que te concentras en las almohadillas de grasa, debes buscar lo que parece gotas de grasa que son perfectamente simétricas.

Hay uno ahora mismo justo a la izquierda de esa grasa larga. Ese es un solo huevo. Entonces, lo que voy a hacer es tomar la boca de la pipeta, recoger el huevo y colocarlo en más medio de mantenimiento para poder aislar los huevos mismos.

Hoy les he mostrado cómo aislar citocitos del tracto reproductivo femenino. Además, les he mostrado las diferentes estructuras de la trompa de Falopio. En particular, el infundíbulo, que es la única estructura en la cual se puede inyectar el medio FHM.

Con una aguja de calibre 30. Con esta técnica, he aislado células y cualquier embrión que haya estado presente en el tracto reproductivo femenino. Puedo utilizar estos materiales para estudios de expresión génica o trabajos transgénicos.