Name: En la zona subventricular cara: tinción wholemount y flujo ependimarios (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-06T16:22:00.000+00:00
Duration: 14 min 33 s
Description: Aprende la técnica de wholemount para estudiar las paredes del ventrículo lateral en ratones, analizando el flujo ependimario con microesferas fluorescentes. Este método revela la actividad germinal en la zona subventricular del cerebro adulto.

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El trabajo apoyado por el NIH subvención HD-32116, la Familia Sandler Apoyo a la Fundación John Bowes El Fondo de Células Madre, MEXT, MHLW, y HFSP. ZM con el apoyo de la Fundación Carlos Baldoceda y UCSF Krevans Comunidad. AA-B. tiene el Heather y Melanie Muss Cátedra.

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<li>Ventura, R. E., Goldman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal+radial+glia+generate+olfactory+bulb+interneurons+in+the+postnatal+murine+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dorsal radial glia generate olfactory bulb interneurons in the postnatal murine brain.</a> J Neurosci. 27, 4297-4302 (2007).</li>
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La mayoría de los estudios de la neurogénesis en zonas ventricular y subventricular se han basado en las técnicas clásicas de corte para examinar la microanatomía y de las relaciones celulares en estas regiones. A continuación se describe una técnica alternativa, utilizó por primera vez para analizar la red de cadenas migratorias de los neuroblastos generados en la SVZ 1, entonces se utiliza para estudiar la regeneración de la población de progenitores SVZ después de un tratamiento anti-mitótico 6, y más recientemente para estudiar la precisión apical y basal interacciones célula-célula de células adultas de la SVZ madre neurales 2,3,4. Curiosamente, esta técnica ha revelado que las células madre neurales, o las células de tipo B1, de la SVZ adultos forman parte de un neuroepitelio mezclado con diferencia que no se dividen las células ependimarias. En la cara de imagen usando wholemounts ha demostrado que esta mezcla tiene una arquitectura neuroepitelio molinete formado por las terminaciones apicales de las células de tipo B1 y rodeado de grandes superficies apicales de las células ependimarias 4. Este análisis en cara ha aclarado nuestra comprensión del linaje de células madre neurales en el cerebro embrionario y adulto como un conjunto de células con terminaciones en la superficie apical del ventrículo y procesos basal en contacto con un nicho vascular. Estos hallazgos han sido casi imposible con las técnicas clásicas de corte. Wholemounts también facilitar la identificación de las células madre neurales a través de su ventrículo-ponerse en contacto con el proceso apical. Como los marcadores más específicos de estas células madre se encuentran, wholemounts será una parte integral de la identificación y análisis del comportamiento de las células madre neurales. Wholemounts de las paredes del ventrículo lateral también ofrecen la perspectiva ideal para el estudio de la polaridad plana de células ependimarias. Las células ependimarias son las células de revestimiento de los ventrículos multiciliated que la función de impulsar CSF de manera coordinada. Con la técnica de wholemount, el epitelio ependimario completa está expuesta en la cara y se puede teñir y estudiado ampliamente desde su anterior a las fronteras ventral posterior y dorsal al. Además, los ensayos realizados en el flujo de ependimarias aguda disección, wholemounts vivir con firmeza demostrar el flujo plano polarizado generada por los cilios ependimarias. Un trabajo reciente utilizando enfoques wholemount ha descubierto determinantes celulares de este ependimarias polaridad plana 5. Curiosamente, los estudios wholemount también han sugerido que ependimarias-generó un flujo de CSF establece gradientes de chemorepellents que guían la migración de las neuronas jóvenes en la SVZ 7. Enfoques wholemount que inicialmente identificó la red de cadenas migratorias neuronal, por lo tanto continuar proporcionando pistas sobre los mecanismos que regulan la migración en cadena. El análisis de los VZ y SVZ por wholemount imágenes añade un nuevo enfoque para los estudios de futuro y una forma de clarificar nuestra comprensión de los estudios existentes. Por ejemplo, un estudio reciente sugiere que las células madre neurales en la SVZ adultos fueron CD133 + / CD24-células en contacto con el ventrículo 8. En base a su tinción en secciones, estos autores afirman que estas células eran una subpoblación de células ependimarias multiciliated. Sin embargo, en nuestro estudio, utilizando el enfoque wholemount, lo que da una visión más completa del epitelio ependimario todo, encontramos que todas las células ependimarias expresan CD24 y el único ventrículo-ponerse en contacto con las células que fueron CD133 + / CD24-fueron un subconjunto de tipo B1 las células 4. Además, la técnica wholemount promete ser útiles en futuros estudios que examinen la organización del mosaico descrito recientemente de las células madre neurales en el cerebro adulto 9. Varios estudios han demostrado que las células madre neurales en el cerebro adulto no son una población homogénea, sino que se especifican a nivel regional y normalmente sólo producen subtipos específicos de las interneuronas bulbo olfatorio. Estos estudios han propuesto que las diferentes subpoblaciones de células madre neurales pueden ser distinguidos, ya sea por la expresión de factores de transcripción específicos 10,11,12,13,14 y / o por su localización regional a lo largo de la extensión dorsal-ventral y antero-posterior de la pared lateral 9,15,16. A medida que más marcadores moleculares de las subpoblaciones regionalmente específico de células madre neurales adultas se identifican, imágenes wholemount debe proporcionar una visión completa de la parcelación de estos dominios progenitoras diferentes a lo largo de la pared ventricular. La disección wholemount y técnicas de imagen que aquí se presenta puede ser utilizado para analizar las paredes ventriculares en el embrión. La disección de la pared lateral de embriones se lleva a cabo, paso a paso, de la misma manera. Sólo hay pequeñas diferencias en el nivel de dificultad, los ventrículos embrionarias son relativamente más grandes haciendo la disección más fácil, pero el tejido es más suave haciendo más difícil la manipulación. En particular, una exposición similar del ventrículo lateral se puede utilizar en Embryos para disecar la pared cortical del ventrículo para estudiar la neurogénesis cortical. La evidencia reciente sugiere que la herencia asimétrica del centrosoma mantiene glía radial en la superficie ventricular durante la neurogénesis cortical 17. En-frente a imágenes de la superficie apical radial gliales pueden proporcionar ideas sobre cómo centrosomas dentro de estas células que se dividen asimétricamente son heredados. Como con la mayoría de las técnicas, especialmente las relacionadas con la destreza precisa, la maestría requiere de práctica. Hay, sin embargo, algunos elementos en la disección que son clave para obtener mejores resultados: 1) el ajuste de iluminación de la iluminación de la muestra para crear sombras ofrece un contraste muy valiosa durante la disección de tejido que es de otra manera relativamente homogénea, 2) el uso de los fórceps como dos pasadores de insectos en las pinzas de esta técnica no se utilizan para apretar juntos o recoger a los tejidos, sino que se utilizan como pasadores maniobrable que se pueden reajustar continuamente para estabilizar el tejido durante el corte, 3) un balance de retracción suave y el corte del cuchillo no debe sólo se utiliza para cortar, sino también para proporcionar la retracción suave para separar las paredes medial y lateral, recordando que la mayoría de la disección, se efectúa a través de la retracción suave con sólo el corte intermitente.

en la zona subventricular cara: tinción wholemount y flujo ependimarios

The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

Las paredes de los ventrículos laterales contienen la mayor región germinales en el cerebro adulto de mamíferos. La zona subventricular (SVZ) en estos muros es un sistema modelo estudiado para comprender el comportamiento de las células madre neurales y la regulación de la neurogénesis adulta. Tradicionalmente, estos estudios se han basado en las técnicas clásicas de corte para el análisis histológico. Aquí se presenta un enfoque alternativo, la técnica wholemount, que ofrece una completa, en la cara vista de esta región germinal. En comparación con las secciones, wholemounts preservar la citoarquitectura completa y las relaciones celulares dentro de la SVZ. Este enfoque ha revelado recientemente que las células madre neurales adultas o células de tipo B1, son parte de un neuroepitelio se mezcla con las células diferenciadas ependimarias revestimiento de los ventrículos laterales. Además, este enfoque ha sido utilizado para estudiar la polarización plana de células ependimarias y el flujo del líquido cefalorraquídeo que generan en el ventrículo. Con la evidencia reciente de que células madre neurales adultas son una población heterogénea que se especifica regional, el enfoque wholemount probablemente será una herramienta esencial para la comprensión de la organización y la parcelación de este nicho de células madre.

Las paredes del ventrículo lateral se encuentra la mayor región germinales en el cerebro adulto de mamíferos. Tradicionalmente, los estudios sobre la neurogénesis en esta región se han basado en las técnicas clásicas de corte para el análisis histológico. Aquí se presenta un enfoque alternativo, la técnica wholemount, que ofrece una completa, en la cara vista de esta región germinal.

En la zona subventricular cara: tinción wholemount y flujo ependimarios

Las paredes de los ventrículos laterales contienen la región germinal más grande del cerebro del mamífero adulto. La zona subventricular (SVZ) en estas paredes es una...

Hola, soy Zaman. Soy Arturo Alvarez-Bia. Hoy estamos en el laboratorio de Arturo, parte del Departamento de Neurocirugía y del Centro Eli y Edythe Broad de Medicina Regenerativa e Investigación de Células Madre, y les mostraremos cómo preparamos montajes completos de las paredes de los ventrículos laterales.Estos montajes completos pueden utilizarse fijados para tinción inmunológica o como preparaciones vivas para analizar el flujo penales. La técnica de montaje completo que Mann va a ilustrarles hoy fue desarrollada a lo largo de los años en el laboratorio y perfeccionada para estudiar toda la pared del ventrículo lateral, incluyendo las células penales y la actividad germinativa subyacente en la zona subventricular donde se encuentran las células madre neurales. Fue desarrollada originalmente por Fiona Dutch y luego perfeccionada por HIE Victor y Casu Moto.Ninguno de ellos se encuentra ya en el laboratorio. Los siguientes diagramas ilustran cómo preparar una preparación en montaje completo de la pared lateral del ventrículo lateral. Primero, el cerebro se divide en dos hemisferios.Se realiza un corte coronal en sentido posterior para revelar el hipocampo y la sección transversal mostrada aquí en morado. Luego, se separa la pared medial, que cubre el hipocampo y se muestra en morado, de la pared lateral, que cubre el epéndimo y se muestra en rosa. Ambas paredes se separarán una de otra como al abrir un libro, y se eliminará la pared medial dejando expuesta la pared lateral.La primera sección de este video aborda la disección en montaje completo, aunque este paso puede no ser el primero. Cronológicamente, si se prevé analizar un flujo penal, consulte el protocolo escrito para obtener detalles. Antes de cada disección, asegúrese de que todas las herramientas estén esterilizadas y a mano. Coloque una placa de disección de seis centímetros con medio L 15 Leitz a 37 grados Celsius bajo un microscopio estereoscópico de disección fluorescente y coloque un cerebro de ratón recién diseccionado en la placa bajo el microscopio estereoscópico.Utilice la pinza fina para diseccionar y retirar los bulbos olfativos. Use un cuchillo de punción para dividir el cerebro en sus dos hemisferios. Corte en plano coronal en el extremo posterior de uno de los hemisferios.Para exponer el hipocampo cordal y su sección transversal, inserte el cuchillo de disección en el pequeño espacio ventricular entre la corteza y el hipocampo, y corte para liberar la corteza en el punto donde se conecta dorsalmente al hipocampo. Corte un segmento en forma de cuña de la corteza en la esquina y use pinzas finas para desprenderla lentamente del hipocampo. Continúe separando la corteza mientras esta rodea hasta el borde ventral del hipocampo.Utilice un cuchillo de punción para liberar el hipocampo de las partes ventrales de la corteza. Use el cuchillo y pinzas finas para retraer el hipocampo lejos de la corteza. Proceda cuidadosamente hacia la parte anterior sin dañar las paredes de los ventrículos.Las dos paredes deben abrirse en direcciones opuestas. Como si fuera un libro con un cuchillo, corte las partes de la corteza que sobresalen sobre la pared lateral. Para visualizar mejor esta superficie a medida que aumenta la resistencia a la retracción, será necesario realizar dos cortes adicionales.Uno dorsalmente, donde se unen las paredes medial y lateral, y un corte similar en la parte ventral. Utilice movimientos pequeños del cuchillo de punción para realizar estos cortes. Estos cortes adicionales permiten que la pared medial se retráiga más para revelar la parte anterior del ventrículo.Ajuste la iluminación de manera que las sombras revelen la unión entre las paredes medial y lateral, como un valle entre las dos paredes. Utilice el cuchillo para cortar exactamente en el valle, retire el tálamo y cualquier corteza sobresaliente.El montaje con orificio debe utilizarse inmediatamente para un análisis de flujo ventricular. Si se disecan montajes con orificio para tinción inmunohistoquímica, se pueden disecar varios montajes en una sola sesión, siempre que se sumerjan en fijador conforme se van completando. La siguiente sección del video demostrará cómo realizar ensayos del flujo de líquido generado por los cilios de las células ependimarias.Uso de microperlas fluorescentes. El fragmento de la pared lateral recién diseccionado se fija primero al platillo de disección con dos alfileres para insectos. A continuación, se baja la punta de una micropipeta de vidrio cargada con microperlas fluorescentes sobre la superficie del montaje completo, y se depositan suavemente las microperlas fluorescentes sobre la superficie durante la toma de imágenes de lapso de tiempo.El video registra el movimiento de las perlas para el ensayo de flujo anexo. Una micropipeta de vidrio debe prepararse antes de la disección en montaje completo, como se describe en la parte escrita de este protocolo. La micropipeta terminada debe tener una conicidad suave y gradual y un bisel de 45 grados con un diámetro interno de aproximadamente 100 micrómetros.Rellene la pipeta con aceite mineral por acción capilar hasta aproximadamente la mitad. Introduzca un émbolo recubierto con grasa al vacío en la parte posterior de la pipeta. Luego, empuje para avanzar el menisco del aceite hasta la punta de la pipeta.Sujete la pipeta con émbolo a un micromanipulador con un brazo ajustable. Cargue la pipeta por delante con una solución de 50% de microesferas fluorescentes, 5% de glicerol y 45% de agua. Diseque recientemente un montaje de agujero como se mostró anteriormente, y transfiéralo con el lado del ventrículo hacia arriba a un platillo de disección limpio lleno con agua a 37 grados Celsius.En medio Leitz, fije el soporte con orificio al recipiente para disección utilizando dos alfileres de insecto en el tálamo y en la corteza dorsal anterior. Coloque la base del brazo fijo que sostiene el micromanipulador junto al microscopio estéreo, manteniendo el brazo elevado para evitar romper la aguja de la micropipeta. Sumerja la punta de la micropipeta en un tubo con medio para eliminar las microesferas adheridas al exterior de la punta.Teniendo cuidado de no romper la punta. Coloque la punta de las pipetas sobre la superficie dorsal de la pared lateral y baje el brazo para acercar la punta de la pipeta justo por encima de la superficie del tejido. Enfóquese en un campo de visión que abarque la mitad anterior del montaje del orificio e inicie la grabación de las imágenes deseadas.Utilice el émbolo para expulsar aproximadamente cinco litros de microperlas sobre la superficie del orificio montado. Una vez que un flujo de arrastre haya eliminado la carga inicial de perlas de la superficie, use el émbolo para expulsar rondas adicionales de cinco nanolitros de microperlas. El flujo, la dirección y la velocidad pueden analizarse utilizando el video grabado.La sección final de este video demuestra cómo se tiñen inmunológicamente los montajes con orificio y se colocan sobre portaobjetos para la imagen confocal. Los montajes con orificio recién diseccionados se transfieren primero a una placa de 24 pocillos y se fijan mediante inmersión en paraformaldehído. A continuación, se realizan una serie de incubaciones con anticuerpos primarios y luego con anticuerpos secundarios conjugados con fluorocromos, con lavados intermedios.Después de la tinción, los montajes completos se someten a una disección adicional para separar únicamente la capa delgada de la pared lateral que contiene la zona subventricular, del resto del montaje completo que incluye el estrato estriado subyacente y la corteza. Este pequeño fragmento delgado y plano de tejido se transfiere luego a un portaobjetos y se cubre con una laminilla para fijar los montajes completos destinados a inmunotinción. Una placa de 24 pocillos que contiene paraformaldehído al 4 % y Triton X-100 al 0,1 % sobre hielo.En una campana extractora de gases, sumerja suavemente un montaje con orificio diseccionado con el ventrículo hacia arriba dentro de un pocillo de la placa. Fije la muestra durante toda la noche a cuatro grados Celsius, aspire el fijador y utilice una pipeta de transferencia para lavar cuidadosamente el montaje con orificio en un XPBS con 0,1 % de Triton X-100 tres veces durante cinco minutos cada vez. En todos los pasos de manipulación de líquidos, pipetee suavemente en el borde del pocillo para evitar voltear el montaje con orificio y dañar el tejido.Añada una solución bloqueante que contenga Triton X y 10 % de suero de cabra normal en 1X PBS, utilizando hasta un 2 % de Triton X, dependiendo de la profundidad requerida de penetración del anticuerpo. Incube el montaje completo en la solución bloqueante durante una hora. A temperatura ambiente, retire la solución bloqueante.Añada anticuerpos primarios diluidos en solución bloqueante e incube a cuatro grados Celsius durante 24 o 48 horas, según el antígeno diana. Lave con dos enjuagues rápidos de un XPBS con Triton X, seguidos de tres lavados de 20 minutos cada uno a temperatura ambiente. Añada anticuerpos secundarios diluidos en solución bloqueante e incube a cuatro grados Celsius durante el mismo tiempo que con el anticuerpo primario. Lave de la misma manera que con los anticuerpos primarios. La siguiente serie de pasos demuestra cómo diseccionar solamente la pared lateral del resto del montaje completo como un único espécimen plano, que luego puede montarse para obtener imágenes de alta resolución.Devuelva el montaje del orificio de inmunotinción con el ventrículo hacia arriba a una placa de disección limpia llena con un XPBS bajo el microscopio estereoscópico, moviéndose de posterior a anterior. Utilice un cuchillo de disección para eliminar la corteza dorsal y el cuerpo calloso blanco subyacente con el fin de visualizar la interfaz entre la zona subventricular y el estriado. A continuación, realice un corte horizontal largo a través de la cara ventral del montaje completo.Utilice pinzas finas para orientar el tejido en este nuevo borde plano de manera que la superficie dorsal quede hacia arriba. La zona subventricular es una banda delgada de tejido homogéneamente rosa, mientras que el estriado está infiltrado por cordones de materia blanca. Utilice las pinzas como dos alfileres en el AUM estriado para fijar el tejido sin dañar la pared ventricular.Comenzando anteriormente. Utilice el cuchillo de punción para comenzar cuidadosamente a cortar entre el estriado y la zona subventricular. Es importante mantener los cortes paralelos a la superficie ventricular y conservar el grosor del tejido diseccionado.A medida que la zona subventricular se adelgaza hacia la parte posterior, retire cuidadosamente todos los tejidos circundantes de los montajes en hendidura que no formen parte de la pared ventricular. El montaje en hendidura debe tener un grosor uniforme entre 200 y 300 micrómetros.Utilice pinzas para levantar la pequeña porción de tejido desde abajo y transfiérala a un portaobjetos para microscopio. Aplique medio de montaje y luego una cubreobjetos. Intente no introducir burbujas de aire.Guarde los portaobjetos en posición horizontal en un libro de portaobjetos a cuatro grados Celsius durante uno o dos días para permitir que las cubreobjetos se asienten antes de obtener imágenes de las muestras. A continuación se presentan algunos resultados representativos de tinciones inmunohistoquímicas en montaje completo y ensayos de flujo anexina. La primera imagen es una vista de baja magnificación de una tinción en montaje completo para doble cottin, un marcador de neuroblastos que muestra la red de cadenas de neuronas jóvenes en migración en la zona subventricular adulta.A continuación se muestra otra vista con bajo aumento de una preparación en montaje de agujero teñida para KI 67 en verde y los vasos sanguíneos en rojo, que ilustra la estrecha interacción recientemente descrita entre las células en división y la vasculatura en la zona subventricular a mayor aumento. La siguiente imagen muestra una imagen confocal de la superficie ventricular, donde la superficie apical de las células que revisten el ventrículo está delimitada por la tinción de beta-catenina en verde y los cuerpos basales de esas células están marcados con gamma-tubulina en rojo. La última imagen de alto aumento es una proyección máxima de un corte confocal obtenido de una tinción en montaje completo para GFAP, que muestra la larga fibra basal positiva para GFAP de las células tipo B1 de la SVZ para analizar el flujo, la dirección y la velocidad del LCR en la superficie ventricular.Los cuadros consecutivos de las películas de flujo de apéndices pueden combinarse en una sola imagen compuesta. Estas imágenes compuestas muestran la posición de cuentas individuales en diferentes momentos mientras recorren el apéndice o la superficie. A continuación se muestra un ejemplo de cómo se ven los resultados cuando están completos.Acaba de ver cómo preparar montajes completos de la zona subventricular de la pared lateral del ventrículo lateral. Este método proporciona una vista en montaje completo de toda la pared y ha permitido numerosos descubrimientos a lo largo de los años, incluyendo la observación de que esta zona ventricular está organizada como una red de vías para la migración en cadena. También nos permitió estudiar cómo fluye el líquido del panel de servicio sobre esta pared, y sugirió indirectamente las formas en que estas células guían su migración a través de esta extensa red de vías.Más recientemente, esta técnica nos ha permitido descubrir que la zona ventricular subependimaria está organizada en forma de molinos de viento, con las células madre en el núcleo de estos molinos, revelando así la localización exacta de las células madre dentro de esta estructura. Dado que el montaje completo permite una perspectiva global de esta zona ventricular, proporciona una visión que los cortes histológicos no ofrecen, y por esta razón, lo ponemos a disposición de todos, ya que debería ser útil para muchos otros estudios. Hay algunos aspectos clave que recordar al preparar montajes completos que mejorarán sus disecciones.La primera consiste en tener una iluminación adecuada; ajuste la iluminación para que proyecte sombras sobre el soporte del orificio. Esto proporcionará contraste y le mostrará dónde debe realizar los cortes. La segunda consiste en usar la pinza como dos pasadores móviles.No desea usar la pinza para comprimir el tejido ni levantarlo. Más bien, úsela como dos alfileres móviles que sujeten el tejido mientras corta. La tercera técnica consiste en combinar la retracción general con el corte.Como puede observarse en las disecciones, en realidad se realiza muy poco corte de tejido. La mayor parte de la disección se lleva a cabo mediante retracción general durante la segunda ronda de la disección, cuando se retira la pared lateral del resto del montaje completo.Lo más importante es orientar sus cortes en un plano paralelo al plano de la superficie ventricular. Esto garantizará que tenga un grosor uniforme de anterior a posterior a lo largo de la pared lateral. Y también asegurará que, al realizar imágenes confocales de alta resolución, todas las imágenes queden enfocadas en un solo plano.Esperamos que este video sea útil para sus estudios. Buena suerte con sus experimentos.

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Investigación

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Neuroscience

Neurociencia

Circuitos neuronales están topográficamente organizadas en compartimentos funcionales con determinados perfiles moleculares. Aquí, ofrecemos los pasos prácticos y técnicos para revelar la topografía global del cerebro mediante un método versátil wholemount tinción inmunohistoquímica. Se demuestra la utilidad del método que utiliza la citoarquitectura bien entendida y la circuitería de cerebelo.

La inmunohistoquímica wholemount de Topografía Revelando Complex Brain

Un método para cargar subventricular (SVZ de zona) células con colorantes indicadores de calcio para el registro de la actividad de calcio se describe. El postnatal SVZ contiene células apretadas, incluyendo las células progenitoras neurales y neuroblastos. En lugar de utilizar carga baño se inyecta el medio de contraste por la presión en el interior del tejido que permite una mejor difusión de tinte.

Preparación de agudos Slices zona subventricular for Imaging Calcio

Utilizando resonancias magnéticas (humanas), software de imágenes 3D y análisis inmunohistológicos, documentamos los cambios en los ventrículos laterales del cerebro. El mapeo longitudinal en 3D de los cambios en el volumen del ventrículo lateral y la caracterización de los cambios celulares periventriculares que ocurren en el cerebro humano debido al envejecimiento o la enfermedad se modelan en ratones.

Modelado 3D del lateral Ventrículos y histológico Caracterización de Tejidos periventricular en los seres humanos y de ratón

Aquí describimos un procedimiento basado en el uso de partículas lentivirales para la modificación genética a largo plazo de células madre neurales y/o sus células ependimarias adyacentes en el nicho neurogénico ventricular-subventricular adulto que permite el análisis por separado de los efectos autónomos y no autónomos, dependientes del nicho, sobre las células madre neurales.

Estable y eficiente modificación genética de células en el ratón adulto V-SVZ para el análisis de neural de células madre Autónoma y los efectos no autónomos

Aquí presentamos un protocolo basado en la microscopía para la proyección de imagen de alta resolución y una reconstrucción tridimensional del ratón unidad neurovascular y barrera blood - brain con secciones libres del cerebro. Este método permite la visualización, análisis y cuantificación de los organelos intracelulares en el BBB.

Alta resolución imagen Confocal de la barrera hemato - encefálica: proyección de imagen, reconstrucción 3D y cuantificación de transcitosis

El objetivo de este protocolo es aislar los microvasculares de múltiples regiones del sistema nervioso central de vertebrados lisencéfalos y gyrencéfalos.

Aislamiento confiable de microvasculares del sistema nervioso central en cinco grupos de vertebrados

Este artículo presenta un protocolo paso a paso para la implantación directa de cánulas en la cisterna magna de cerdos.<br...

Implantación directa de cánula en la Cisterna Magna de Cerdos

Este protocolo describe un enfoque eficiente y reproducible para los estudios histológicos cerebrales de ratón, incluida la perfusión, la seccionamiento cerebral, la inmunotinción flotante, el montaje de tejidos y las imágenes.

Inmunotinción flotante de cerebros de ratón

La disección crioseccional permite la preparación fresca y congelada del nicho neurogénico más grande en el cerebro murino para un análisis profundo del proteoma cuantitativo. El método es preciso, eficiente y causa una perturbación tisular mínima. Por lo tanto, es ideal para estudiar el microambiente molecular de este nicho, así como otros órganos, regiones y especies.

Disección crioseccional de la zona subependimaria adulta para un análisis cuantitativo preciso y profundo del proteoma

El plexo coroideo (PC), un tejido poco estudiado en neurociencia, desempeña un papel clave en la salud y la enfermedad del sistema nervioso central. Este protocolo describe una técnica de microdisección para aislar el PC y el uso de microscopía electrónica de barrido para obtener una visión global de su estructura celular.

Microdisección y microscopía electrónica de barrido de montaje completo Visualización del plexo coroideo del ratón

Aquí se presenta un método para el aislamiento de células madre neurales y células progenitoras de oligodendrocitos del cerebro de ratas vivas en detalle experimental. Permite múltiples colecciones de estas células de los mismos animales sin comprometer su bienestar.

El método de "ordeño cerebral" para el aislamiento de células madre neurales y células progenitoras de oligodendrocitos de ratas vivas

Aprende la técnica de wholemount para estudiar las paredes del ventrículo lateral en ratones, analizando el flujo ependimario con microesferas fluorescentes. Este método revela la actividad germinal en la zona subventricular del cerebro adulto.

En la zona subventricular cara: tinción wholemount y flujo ependimarios

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