Name: El corte delgado de los preparativos de círculo para inmunohistoquímica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Aprende a realizar cortes finos reproducibles de muestras tisulares pequeñas mediante criostato y plataforma de aluminio. Este método facilita el manejo de biopsias y rebanadas cerebrales de 400 micras para inmunohistoquímica.

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<ol><li> Prepare el molde de la cinta para la plataforma de octubre </li><li> Colocar el molde con octubre Congelar en criostato o mediante el uso de hielo seco triturado. </li><li> Retire la cinta de todo congelado plataforma de octubre </li><li> Alinear las marcas de tenazas de congelación y la etapa de montaje criostato y el bloqueo en el mandril. </li><li> Sección a través de la plataforma octubre hasta que la superficie es plana. </li><li> Quitar resurgió plataforma octubre y el lugar en el escenario de congelación criostato. </li><li> Colocar la muestra de tejido (previamente criopreservados con 30% de glicerol o sacarosa en PBS) en octubre </li><li> Preparar la columna de congelación con anillo exterior sobresale alrededor de 5 mm por encima de la parte superior de la columna formando bien para octubre </li><li> Cuidadosamente la posición de muestra de tejido en el centro de la superficie de la columna de congelación y agregue lentamente octubre hasta el pozo se llena. </li><li> Rodean la columna de congelación con hielo seco triturado. Tejido y octubre debería congelar completamente dentro de 20-60 segundos. </li><li> A medida que aumenta la preparación de la temperatura, el anillo exterior se puede quitar, mientras que la muestra permanece congelado. </li><li> Diapositivas de muestra de la columna hacia un lado la congelación y el lugar en el criostato. </li><li> Coloque una gota de octubre en la superficie de la plataforma de octubre y muestra la posición (el tejido hacia abajo) aplicando una presión firme. Espécimen se congela rápidamente en la plataforma octubre </li><li> Seguro manguito a criostato montaje escenario con alineación de las marcas. </li><li> Sección a través de octubre superficial de la muestra de tejido. </li><li> Descongele montaje de secciones delgadas en portaobjetos de vidrio y guardar congelados oa temperatura ambiente. </li><li> Inmunoreacciones se puede realizar para el tejido montados en portaobjetos de vidrio. </li><li> Reactivo se reunieron en la diapositiva, se puede agitar suavemente, y puede ser cubierto en caso de sensible a la luz. </li><li> Las etapas posteriores de la reacción se realiza fácilmente por diapositivas invirtiendo en el receptáculo de residuos, que absorbe la diapositiva, y luego aplicar el siguiente reactivo. </li></ol>

<ol><li>Scoutern, C. W., O'Connor, R., Cunningham, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+of+research+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Today%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation of research animals.</a> Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).</li>
<li>Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diminished+serotonergic+innervation+of+adult+medial+prefrontal+cortex+after+6-OHDA+lesions+in+the+newborn+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res.+Dev.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).</li>
</ol>

El protocolo que aquí se presenta ofrece a los investigadores con un conciso y fácil de seguir, resumen de cómo obtener secciones delgadas criostato de pequeños trozos de tejido, difícil de manejar, tales como las biopsias y las rodajas de cerebro de más estudios para llevar a cabo, tales como diversos métodos de tinción, hibridación in situ, o inmunohistoquímica.

<table><tbody><tr><td>O. C. T.</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>27050</td><td></td></tr><tr><td>Solución de glicerol</td><td></td><td></td><td>Solución de glicerol al 30% en PBS p/v</td></tr><tr><td>Solución de sacarosa</td><td></td><td></td><td>Solución de sacarosa al 30% en PBS p/v</td></tr></tbody></table>

el corte delgado de los preparativos de círculo para inmunohistoquímica

Thin Sectioning of Slice Preparations for Immunohistochemistry

Muchas investigaciones de la neurociencia, así como otras disciplinas, implican el estudio pequeño, pero las piezas macroscópicas o secciones de tejido que se han conservado, recién retirado, o eliminado, pero mantuvo viable, como en los preparativos trozo de tejido cerebral. Posteriores estudios microscópicos de este material puede ser un reto, ya que las muestras de tejido puede ser difícil de manejar. Demostrado aquí es un método para la obtención de secciones delgadas criostato de tejido con un espesor que puede variar 0,2-5,0 mm. En forma rutinaria cortar 400 micrones de espesor rebanadas de cerebro Vibratome serie en secciones 10/05 micras criostato coronal. Los cortes son generalmente utilizado por primera vez para los experimentos de electrofisiología y requieren de un análisis microscópico de la citoarquitectura de la región de la que las grabaciones fueron observados. Hemos construido un sencillo dispositivo que permite la preparación controlada y reproducible y la colocación de la lámina de tejido. Este dispositivo consiste en un cilindro de 5 cm de longitud con un diámetro de 1,2 cm, que sirve como una etapa de congelación de la división. Un anillo perfectamente se desliza sobre las paredes del cilindro proporcionando alrededor de la porción permite que el tejido se sumerge en el complejo de congelación (por ejemplo, octubre). Esto es luego rápidamente congelados con hielo seco triturado y la oblea resultante puede ser fácilmente la posición de seccionamiento criostato. Secciones delgadas se pueden descongelar montados en portaobjetos recubiertos para permitir estudios a realizar, tales como diversos métodos de tinción, hibridación in situ, o inmunohistoquímica, como se muestra aquí.

El presente método permite criostato reproducible la sección de los pequeños trozos de tejido, difícil de manejar, tales como las biopsias y las rodajas de cerebro. Utilizamos una etapa de aluminio de congelación sencillo para facilitar la manipulación de los tejidos y un criostato de rutina estándar para producir secciones 5-10 micrones de serie a partir de 400 rebanadas de cerebro micras de espesor.

El corte delgado de los preparativos de círculo para inmunohistoquímica

Numerosas investigaciones en neurociencia, así como en otras disciplinas, implican el estudio de fragmentos o secciones de tejido pequeños, aunque macroscópicos, que han sido...

Hola, mi nombre es Jun Park, investigador adjunto de la Escuela de Medicina de Harvard, y también soy estudiante de medicina en la Facultad de Medicina del Colegio Y de la Hospital Severance, EO Corea. Estos son los materiales para la sección fina de preparaciones en corte. Estoy preparando un molde con cinta adhesiva de cuatro plataformas de OCT.Me siento moldeado con OCT y congelando dentro del criostato o usando ojos secos triturados, estoy retirando el TAFE de alrededor de la plataforma congelada de OCT. Estoy mostrando marcas de alineación en la tiza de congelación y en la platina de montaje del criostato, y fijando en la tiza. Estoy realizando cortes a través de la plataforma de OCT.La superficie de Ontario es plana. Estoy retirando la plataforma OCT recubierta y colocándola sobre la etapa de congelación del criostato. Estoy colocando esta muestra en OCT y esta muestra fue previamente criopreservada con glicerol al 30% o sacarosa en PBS.Este es el paso para preparar la columna de congelación con el anillo exterior sobresaliendo aproximadamente cinco milímetros por encima del extremo superior de la columna en formación. Coloco cuidadosamente la muestra de tejido en el centro d

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Investigación

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Biología

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