Name: La diferenciación de células madre embrionarias en los precursores de oligodendrocitos (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-19T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: Aprende a diferenciar células madre embrionarias de ratón en precursores de oligodendrocitos utilizando moléculas pequeñas durante 30 días. Este protocolo genera OPCs Olig2+NG2+ con alta eficiencia para investigación en neurociencia.

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Este trabajo fue apoyado en parte por subvenciones de WD de los Institutos Nacionales de Salud (SR1 NS059043 y ES015988 SR1), la Sociedad Nacional de Esclerosis Múltiple, Fundación Roche para la Investigación de la Anemia, Feldstein Medical Foundation, y los Hospitales Shriners para niños. Nos gustaría agradecer al Dr. David Placer y el plano de Jennifer sugerencias. Declaramos que no hay intereses contrapuestos en relación con este artículo.

Los procedimientos detallados de la generación de oligodendrocitos precursor (OPC) de la GFP-Olig2 células madre embrionarias de ratón (mESCs): <ol><li> Línea de células ES de ratón GFP-Olig2 (G-Olig2), se compra a la American Type Culture Collection (ATCC). El mESCs son rutinariamente pasajes cada 3 días sobre una capa de ratón irradiados alimentador de fibroblastos embrionarios (MEF). Las células MEF se colocan en el 0,1% de gelatina con cubierta de seis pocillos de cultivo de tejidos por lo menos un día antes de los pases de la CES. El medio de cultivo MESC es Dulbecco modificado de Eagle (DMEM) (Gibco) suplementado con 20% de suero fetal bovino (GIBCO), 2 mM L-glutamina, 1 mM piruvato de sodio, 0,1 mM mercaptoetanol β-/, 1% aminoácidos no esenciales ( AANE), y 1.000 U / ml de factor inhibidor de la leucemia. </li><li> colonias se MES trypsinized (TrypLE, 5 min, 37 ° C) en las células individuales y en suspensión en octavos de final de reemplazo de suero (KSR) medio, entonces las células se transfieren a un Costar muy bajo apego de seis pocillos (Corning) en una celda densidad de 50.000 células / cm 2. En estas condiciones, mESCs formar cuerpos embrioides (EBS). Medio KSR consta de medio esencial mínimo (MEM-), complementado con un 20% KSR, 1 mM piruvato de sodio, 1% AANE, y 0,1 mM β-mercaptoetanol /. </li><li> Del día 4 al día 7, el ácido retinoico (RA, 0,2 M) y purmorphamine (Pur, 1 M) se incluyen, como se muestra en la figura. 1A en KSR o medio N2. El medio es N2-MEM con suplemento 1X N2, 1 mM piruvato sódico, 1% AANE, y 0,1 mM β-mercaptoetanol /. El medio se cambia todos los días. </li><li> En el día 8, EBS se desglosan con TrypLE (5 minutos, 37 º C) y se colocaron en poliornitina recubierto 0,01% los platos en medio de OPC, que consiste en medio N2 y factor de crecimiento fibroblástico-2 (FGF-2, 20 ng / ml). El medio se cambia cada dos días. </li><li> Las células se trypsinized (TrypLE, 3 min, 37 ° C) y replated aproximadamente cada semana, cuando se hacen confluentes. El día 30, más del 80% de las células muestran GFP/Olig2 expresión y NG2 positivo, característico de los OPC. </li><li> Para generar los OPC remate, el Na + BacMam canal kit se utiliza para introducir Na v 1.2 subunidad en estos OPC MESC derivados. El reactivo BacMam (1 ml, el componente A) se mezcla con PBS hasta un volumen final de 5 ml. Luego, el reactivo BacMam mezclado se añade en MESC derivados de la cultura OPC en una placa de cultivo de 60 mm (en la confluencia% 50-70) antes de lavar con PBS. Después de 2 horas de incubación, el reactivo BacMam mixto es eliminado y reemplazado con medio suplementado con 1X OPC potenciador. El potenciador es el componente B reconstituido en DMSO (componente C). A continuación, después de más de 2 horas de incubación con el medio potenciador es eliminado y reemplazado con medio completo OPC. Las células se analizaron 24 horas más tarde. </li></ol> Los resultados representativos: Siguiendo el protocolo de diferenciación de la figura. 1A, G-Olig2 mESCs fueron inicialmente suspendidos en un medio de KSR y durante 4 días para formar cuerpos embrioides (EBs) (Fig. 1B). Luego, sucesivamente tratados de la EBS con AR y Pur. El EBS no mostró fluorescencia de GFP en el Día 4 y expresó una fuerte fluorescencia de GFP en D8 (Fig. 1B). En este punto del tiempo, el EBS se trypsinized y chapada en medio N2 complementado con factores de crecimiento FGF-2. Después de la cultura más de 22 días (D30), el porcentaje de células GFP + llegó a 80,3 ± 0,6%, según los resultados de citometría de flujo. Como se muestra en la figura. 1C, GFP + células se superponen con NG2 coloración consistente (96,4 ± 1,3% de las células GFP positivos fueron positivos NG2, y 94,8 ± 1,5% de NG2 células positivas fueron positivas GFP). Por lo tanto, estas células expresan GFP/Olig2 y NG2, definiéndolos como OPC. El OPC MESC derivados (76 células) no disparó los potenciales de acción en la despolarización (Fig. 2A). Después de transducción con un baculovirus que lleva el Na v 1.2 subunidad, estas OPCs MESC derivados (94,1%, 16 de 17 células) pueden ser clasificados como picos (Fig. 2B). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/1960/1960fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. La diferenciación de GOlig-MESC en OPC. (A) Esquema que muestra el protocolo del cuerpo embrioides (EB) y basado en moléculas pequeñas impulsada por la diferenciación. En D8, el EBS se desagregaron y plateado. Las células fueron pasadas una vez por semana cuando se convirtió en confluente. (B) D8, pero no D4 EBS, mostró la expresión de GFP. (C) La inmunotinción de NG2 (rojo) fue consistente con las buenas prácticas agrarias (verde) en la expresión D30. DAPI (azul) se utilizó para identificar los núcleos. Barra de escala: 20 mm. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/1960/1960fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Generación de OPC picos de nonspiking MESC derivados de OPC por el virus mediada por Na v canal de expresión. (A) El potencial de membrana se llevó a cabo a -60 mV y OPC MESC derivados de no despedir a los potenciales de acción, incluso cuando la célula se despolariza a 0 mV. (B) Un ejemplo de MESC derivados de OPCdisparar potenciales de acción (en rojo) después de la transducción viral.

<ol><li>Xian, H., Gottlieb, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dividing+Olig2-expressing+progenitor+cells+derived+from+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Dividing Olig2-expressing progenitor cells derived from ES cells.</a> Glia. 47 (1), 88-101 (2004).</li>
<li>Clair, A., Gottlieb, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subset+of+ES-cell-derived+neural+cells+marked+by+gene+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">A subset of ES-cell-derived neural cells marked by gene targeting.</a> Stem Cells. 21 (1), 41-49 (2003).</li>
<li>Evans, M. J., Kaufman, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+in+culture+of+pluripotential+cells+from+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos.</a> Nature. 292, 154-156 (1981).</li>
<li>Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li>
<li>Shin, S., Xue, H., Mattson, M. P., Rao, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stage-dependent+Olig2+expression+in+motor+neurons+and+oligodendrocytes+differentiated+from+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Stage-dependent Olig2 expression in motor neurons and oligodendrocytes differentiated from embryonic stem cells.</a> Stem Cells Dev. 16, 131-141 (2007).</li>
<li>Billon, N., Jolicoeur, C., Ying, Q. L., Smith, A., Raff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+timing+of+oligodendrocyte+development+from+genetically+engineered%2C+lineage-selectable+mouse+ES+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Normal timing of oligodendrocyte development from genetically engineered, lineage-selectable mouse ES cells.</a> J Cell Sci. 115, 3657-3665 (2002).</li>
<li>Nishiyama, A., Lin, X. H., Giese, N., Heldin, C. H., Stallcup, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-localization+of+NG2+proteoglycan+and+PDGF+alpha-receptor+on+O2A+progenitor+cells+in+the+developing+rat+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Co-localization of NG2 proteoglycan and PDGF alpha-receptor on O2A progenitor cells in the developing rat brain.</a> J Neurosci Res. 43, 299-314 (1996).</li>
<li>Ligon, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+NG2+neural+progenitor+cells+requires+Olig+gene+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Development of NG2 neural progenitor cells requires Olig gene function.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 7853-7858 (2006).</li>
<li>Dawson, M. R., Polito, A., Levine, J. M., Reynolds, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NG2-expressing+glial+progenitor+cells%3A+an+abundant+and+widespread+population+of+cycling+cells+in+the+adult+rat+CNS%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">NG2-expressing glial progenitor cells: an abundant and widespread population of cycling cells in the adult rat CNS.</a> Mol Cell Neurosci. 24, 476-488 (2003).</li>
<li>Chittajallu, R., Aguirre, A., Gallo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NG2-positive+cells+in+the+mouse+white+and+grey+matter+display+distinct+physiological+properties%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">NG2-positive cells in the mouse white and grey matter display distinct physiological properties.</a> J Physiol. 561, 109-122 (2004).</li>
<li>Karadottir, R., Hamilton, N. B., Bakiri, Y., Attwell, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spiking+and+nonspiking+classes+of+oligodendrocyte+precursor+glia+in+CNS+white+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Spiking and nonspiking classes of oligodendrocyte precursor glia in CNS white matter.</a> Nat Neurosci. 11, 450-456 (2008).</li>
</ol>

Las células madre embrionarias (CME), aisladas de un embrión blastocisto, pueden diferenciarse en todos los linajes de las células del organismo 3, 4, proporcionando un sistema en el modelo in vitro para el estudio de desarrollo de los mamíferos tempranos, incluyendo la especificación de oligodendrocitos. mESCs se ha demostrado que se diferencian en células precursoras de oligodendrocitos (OPC) con el tratamiento de sonic hedgehog (Shh) 5. Por otra parte, la diferenciación inducida por Shh OPC de mESCs mantiene la sincronización correcta observado en el desarrollo embrionario 6. Por lo tanto, la naturaleza de la diferenciación in vitro de OPC mESCs se considera que es consistente con lo que se ha aprendido en el desarrollo in vivo. En este caso, utilizando el pequeño RA moléculas y el Pur agonista Shh, hemos podido diferenciar el mESCs G-Olig2 en GFP + + Olig2 NG2 + OPC con alta eficiencia. OPC, que se caracteriza por la expresión de los proteoglicanos NG2 7 y el factor de transcripción hélice-lazo-hélice Olig2 8, generar oligodendrocitos en el SNC en desarrollo y madurez, donde representan un porcentaje importante (~ 5%) del total de células y son las principal tipo de células proliferantes 9. Durante casi dos décadas los investigadores han demostrado los canales de Na V se expresan en una subpoblación de los OPC y se puede activar a la despolarización de 10, 11. Por otra parte, una reciente observación sorprendente fue que en nueve en el SNC de rata in situ la materia blanca, los OPC (~ 50%) generaron los potenciales de acción cuando se despolariza dependiendo de la expresión del voltaje de sodio (Na V) canales, y por lo tanto podría subdividirse en remate y nonspiking subpoblaciones. Sin embargo, las funciones de estas propiedades de picos aún no se conocen. Hemos encontrado que, electrofisiológica, la OPC MESC derivados diferenciados con el protocolo de Shh-dependiente, no eran las mismas que las OPC en el cerebro in situ. Después de la introducción de la subunidad Na V 1.2, estos silenciosos MESC derivados de los OPC eran capaces de clavar. Por lo tanto, la adición / nonspiking MESC derivados de los OPC y protocolo de diferenciación descrito aquí puede facilitar (1) el estudio de las diferencias funcionales entre los picos y nonspiking OPC, (2) los factores de selección nueva que podría promover la expresión de los canales de sodio en el OPC MESC derivados, ( 3) el desarrollo y la optimización del protocolo de diferenciación de los OPC de la ESC humanos o células madre pluripotentes inducidas (CMPi).

<table><tbody><tr><td>MEFs</td><td>GlobalStem</td><td>GSC-6001G</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Invitrogen</td><td>12604</td><td></td></tr><tr><td>Ácido retinoico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R-2625</td><td></td></tr><tr><td>Purmorphamina</td><td>Cayman Chemical</td><td>10009634</td><td></td></tr><tr><td>FGF-2</td><td>EMD Millipore</td><td>GF003</td><td></td></tr><tr><td>BacMam Na&lt;sub&gt;V&lt;/sub&gt; 1.2</td><td>Invitrogen</td><td>B10341</td><td></td></tr></tbody></table>

la diferenciación de células madre embrionarias en los precursores de oligodendrocitos

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Los oligodendrocitos son las células myelinating del sistema nervioso central. Para la terapia celular regenerativa en enfermedades desmielinizantes, existe un interés significativo en la obtención de una población pura de linaje comprometido precursores de oligodendrocitos (OPC) para el trasplante. OPC se caracterizan por la actividad de la Olig2 factor de transcripción y expresión en la superficie de un proteoglicano NG2. Uso de la GFP-Olig2 (G-Olig2) de ratón con células madre embrionarias (MESC) línea de reportero, que optimiza las condiciones para la diferenciación de las buenas prácticas agrarias en mESCs + + Olig2 NG2 + OPC. En nuestro protocolo, lo primero que describe la generación de cuerpos embrioides (EBS) de mESCs. En segundo lugar, se describe el tratamiento de la MESC derivados de EBS con pequeñas moléculas: (1) el ácido retinoico (RA) y (2) un erizo sónico (Shh) purmorphamine agonista (Pur) bajo condiciones de cultivo definido para dirigir la diferenciación EB en el linaje oligodendroglial. Con este enfoque, los OPC se puede obtener con una alta eficiencia (&gt; 80%) en un plazo de 30 días. Las células derivadas de mESCs en este protocolo son fenotípicamente similares a los OPC derivadas del cultivo de tejidos primarios. El OPC MESC derivados no muestran la propiedad de adición se describe de una subpoblación de OPC cerebro in situ. Para el estudio de esta propiedad electrofisiológicos, se describe la generación de picos MESC derivados de OPC por ectópica expresando Na<sub&gt; V</sub&gt; 1.2 subunidad. Las células enriquecidas y nonspiking obtenidos a partir de este protocolo ayudará a avanzar los estudios funcionales en las dos subpoblaciones de OPC.

Se describe una molécula basada en pequeñas protocolo para la diferenciación de las células madre embrionarias de ratón en células precursoras de oligodendrocitos (OPC). Este protocolo genera Olig2 + NG2 + OPC con alta eficiencia de 30 días de diferenciación. También describe un método para generar &quot;picos&quot; OPC que puede disparar potenciales de acción.

La diferenciación de células madre embrionarias en los precursores de oligodendrocitos

Los oligodendrocitos son las células mielinizantes del sistema nervioso central. Para la terapia celular regenerativa en enfermedades desmielinizantes, existe un interés significativo...

El objetivo general del siguiente experimento consiste en generar precursores de oligodendrocitos a partir de células madre embrionarias mediante una serie de pasos de cultivo durante 30 días. Esto se logra primero generando cuerpos embrionarios a partir de células ES de ratón para iniciar la diferenciación celular. Como segundo paso, los cuerpos embrionarios se tratan con las moléculas pequeñas ácido retinoico y morfina pura, que inducen la diferenciación dirigida de las células hacia un liga den.Precusores celulares. Como tercer paso, los cuerpos embrionarios se disgregan en células individuales tras otros 22 días. En cultivo, aproximadamente el 80 % de las células son OPC.A continuación, los OPC derivados de MESC se transducen con virus bao que portan la subunidad NAV 1.2 para generar OPC que presentan actividad de disparo. Los resultados obtenidos muestran la expresión del marcador de OPC y las propiedades de disparo de estos OPC derivados de MESC, basados en microscopía de inmunofluorescencia y grabaciones electrofisiológicas. Hola, soy Pong Chiang del laboratorio del Dr. Ing en el Departamento de Biología Celular y Anatomía Humana de la Universidad de California en Davis. También estamos afiliados al Hospital Shriners para Niños del Norte de California.Hola, soy Vial Raj, también del laboratorio Deng. Hoy les mostraremos un procedimiento para la diferenciación de células madre embrionarias de ratón en células precursoras de oligodendrocitos. Utilizamos este procedimiento en nuestro laboratorio para estudiar las propiedades de los precursores de oligodendrocitos derivados de células madre embrionarias, con el fin de generar células con un mayor potencial terapéutico.Así que comencemos. Hoy, las células precursoras de oligodendrocitos o COP se generarán a partir de la línea de células madre embrionarias OG dos GFP de ratón. Estas células madre embrionarias deben pasarse cada tres días para mantenerlas sanas a una densidad óptima y prevenir la diferenciación espontánea. Pase.Las células ESS cuando están al 70 % de confluencia bajo una campana de flujo laminar. Retire el medio sobre el cultivo. Lave con PBS y los ojos de tripsina con dos mililitros de precalentamiento.Un ciclo de LE express a 37 grados Celsius durante cinco minutos. Detenga la reacción y resuspenda las células en cuatro mililitros de medio celular MES. Transfiera las células a un tubo cónico de 15 mililitros y forme el pellet a 1000 RP durante cinco minutos.Re-suspender en medio de placa MESL, una décima parte de las células sobre una capa confluyente de alimentadores de metotrexato irradiados en medio para células MES. Después de tres días, las células ES tienen aproximadamente un 70 % de confluencia y están listas para ser pasadas o suspendidas para formar cuerpos embrionarios e inducir la diferenciación. Digiere las colonias de células ES de ratón como antes y luego re-suspende las células en medio con reemplazo de suero knockout o medio KSR. Cuenta las células en un hemocitómetro y diluye la suspensión en KSR.Medio a 15.000 células por mililitro, plate tres mililitros en cada pocillo de una placa de cultivo ultrabaja de seis pocillos. Incube las células en suspensión a 37 grados Celsius durante cuatro días. Cambie completamente el medio cada dos días.A partir del cuarto día, reemplace el medio diariamente el cuarto día. Suplemente el KSR con 0,2 micromolar de ácido retinoico el quinto día y con ambos, ácido retinoico y un micromolar de primor famine, los días sexto y séptimo. Alimente los cuerpos embrionarios con dos medios, suplementados con 0,2 micromolar de ácido retinoico y un micromolar de primor famine. Después de ocho días en cultivo, la mayoría de los cuerpos embrionarios expresan GFP y están listos para ser disgregados con tripsina, y se deben contar las células como antes.Luego, resuspenda las células a 3,5 × 10⁵ células por mililitro. En medio OPC, reconstituya tres mililitros de la suspensión en medio OPC. Utilizando placas de 60 milímetros recubiertas con poliornitina, aproximadamente cada semana las células alcanzarán confluencia y tendrán este aspecto. Pase las células como antes, con una tripsinización de tres minutos.30 días después de la suspensión inicial de resus. En medio KSR, las células muestran características de células precursoras de oligodendrocitos para generar OPCs que disparan potenciales de acción. Utilice OPCs derivadas de ESL de ratón que estén entre un 50 y un 70 % confluentes.Cambie el medio por un XPBS para enjuagar las células. Para introducir el canal de sodio activado por voltaje, subunidad alfa 1.2.Utilizamos el kit del canal de sodio back MAM. Mezcle un mililitro del componente A de back MAM con cuatro mililitros de 1 XPBS. Elimine la enjuague con PBS y agregue el componente diluido.Incubar a 37 grados Celsius durante dos horas. Reemplace el agente de memoria posterior con medio OPC enriquecido con los componentes B y C, como se describe en el kit. Incubar durante dos horas adicionales a 37 grados Celsius.Después de la incubación, reemplace el medio enriquecido por medio OPC fresco. Después de otras 24 horas de cultivo, los OPC derivados de ESL pueden ser analizados para evaluar la actividad de disparo en este punto temporal. Los EBS no muestran ninguna fluorescencia GFP.Los EBS muestran una fuerte expresión de GFP y están listos para el cultivo por disagregación durante unos 30 días después de la suspensión inicial de resus. En medio KSR, la mayoría de las células son inmuno positivas para la tinción de NG dos, lo que es consistente con la expresión de GFP. Sin embargo, a diferencia de los OPC del cerebro, estos OPC derivados de células MES no generan potenciales de acción incluso cuando las células se despolarizan hasta cero milivoltios.Después de introducir el subunidad NAV 1.2 mediante transducción viral, estos OPC derivados de células MES se excitan y generan potenciales de acción. Acabamos de mostrarle cómo diferenciar células madre embrionarias de ratón en OPC y generar OPC que disparan potenciales mediante transducción viral. Al realizar este procedimiento, es importante recordar almacenar adecuadamente el ácido retinoico, el morfina y el FGF dos, y utilizar siempre alícuotas frescas; deseche cualquier exceso de ácido retinoico después de su uso.Así que eso es todo. Gracias por ver este video y buena suerte con sus experimentos.

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Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Este protocolo describe la derivación de gliales Precursores restringidos de fetales médulas espinales y mantuvieron in vitro ya sea para el trasplante o para el estudio de linaje oligodendrocíticos.

Derivación de los precursores gliales restringidas de los ratones E13

Primario, fetales humanos derivado del cerebro, células progenitoras multipotenciales...

Progenitor derivado de sistema de cultivo de oligodendrocitos de cerebro fetal humano

Este video muestra un protocolo detallado para aislar las paredes del ventrículo lateral del cerebro de ratón adulto y realizar la disociación enzimática del tejido para obtener células individuales. A continuación, estas células se someten a condiciones de cultivo específicas que potencian selectivamente la proliferación de células madre neurales y promueven su diferenciación en cocultivos de oligodendrocitos y astrocitos.

Obtención de un cultivo mixto de oligodendrocitos y astrocitos a partir de células madre neurales de ratón adulto

Este video demuestra el proceso de generación de células precursoras de oligodendrocitos (OPCs) a partir de células madre embrionarias humanas, seguido de la maduración de OPCs a oligodendrocitos. Este proceso de generación de oligodendrocitos abre numerosas vías para mejorar la investigación y el tratamiento de las enfermedades neurodegenerativas, incluido el Alzheimer.

Diferenciación de células madre embrionarias humanas en oligodendrocitos

Este video demuestra el establecimiento de un cocultivo de neuronas inducidas humanas (iNs) y células precursoras de oligodendrocitos inducidos (iOPCs). Las iNs se mezclan con iOPCs en un co-cultivo y luego se incuban para apoyar la maduración de ambas iNs en neuronas y de iOPCs en oligodendrocitos. Las neuronas forman conexiones sinápticas con otras neuronas y oligodendrocitos, mientras que los oligodendrocitos desarrollan vainas de mielina alrededor de los axones de las neuronas.

Un método de cocultivo para modelar las interacciones neurona-oligodendrocito

Los oligodendrocitos son las células mielinizantes del sistema nervioso central. Este protocolo describe un método para el aislamiento y cultivo de sus precursores, células progenitoras de oligodendrocitos, a partir de cortezas de rata, así como un método cuantitativo rápido y fiable para evaluar la oligodendrogénesis in vitro en respuesta a factores experimentales.

Preparación de la rata progenitoras de oligodendrocitos culturas y cuantificación de Oligodendrogenesis Uso del análisis de fluorescencia de doble infrarrojo

Este protocolo describe un método para generar progenitores interneurona cortical y poste-mitotic interneurona precursores de células madre embrionarias del ratón usando un método modificado de cuerpo para monocapa embryoid. Estos progenitores/precursores puede ser usado en vitro fluorescencia ordenados y trasplantado en neocortex neonatal para el estudio de determinación de destino o utilizado en aplicaciones terapéuticas.

Diferenciación de células madre embrionarias de ratón en precursores corticales interneurona

Describimos el aislamiento Inmunomagnética de los oligodendrocitos primario de ratón, que permite el aislamiento rápido y específico de las células para el cultivo en vitro .

Aislamiento Inmunomagnética rápida y específica de los oligodendrocitos primarios de ratón

Aquí se presenta un protocolo para la generación de un cultivo de una sola célula de células madre embrionarias humanas y su posterior diferenciación en células progenitoras neuronales. El protocolo es simple, robusto, escalable y adecuado para aplicaciones de detección de drogas y medicina regenerativa.

Diferenciación neuronal eficiente utilizando el cultivo monocelular de células madre embrionarias humanas

Las interacciones neurona-glial en la neurodegeneración no se comprenden bien debido a herramientas y métodos inadecuados. Aquí, describimos protocolos optimizados para obtener neuronas inducidas, células precursoras de oligodendrocitos y oligodendrocitos a partir de células madre pluripotentes humanas y proporcionamos ejemplos de los valores de estos métodos para comprender las contribuciones específicas del tipo de célula en la enfermedad de Alzheimer.

Generación de neuronas humanas y oligodendrocitos a partir de células madre pluripotentes para modelar las interacciones neuronal-oligodendrocitos

Describimos la producción de cultivos mixtos de astrocitos y células precursoras de oligodendrocitos derivadas de células madre neurales fetales o adultas que se diferencian en oligodendrocitos maduros, y el modelado in vitro de estímulos nocivos. El acoplamiento con una técnica de detección de alto contenido basada en células construye un sistema de detección de drogas confiable y robusto.

Diferenciación de cribado de alto contenido y análisis de maduración de cultivos de células precursoras de oligodendrocitos derivados de células madre neurales fetales y adultas

Aprende a diferenciar células madre embrionarias de ratón en precursores de oligodendrocitos utilizando moléculas pequeñas durante 30 días. Este protocolo genera OPCs Olig2+NG2+ con alta eficiencia para investigación en neurociencia.

La diferenciación de células madre embrionarias en los precursores de oligodendrocitos

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