0 visualizaciones • 5:15 min. • April 30th, 2023
- Para comenzar, coloque un pez anestesiado con el lado ventral hacia arriba en una ranura en una esponja húmeda. Inserte el electrodo positivo en la línea media del pez a nivel de la arteriosis bulbosa. A continuación, inserte el electrodo negativo por debajo del ventrículo y de 0,5 a 1 milímetro a la izquierda de la línea media para crear una derivación bipolar a través de la cual se puedan medir las diferencias en el potencial eléctrico. Finalmente, inserte el electrodo de referencia cerca de la región anal para conectar a tierra la señal eléctrica.
Comience a grabar y, después de un breve período de tiempo, revise el seguimiento para asegurarse de que se cumplen cuatro criterios. Todas las formas de onda deben ser visibles y distintas entre sí. La onda P, que representa la despolarización auricular, debe ser positiva. La suma neta de las ondas Q, R y S, que representa la despolarización ventricular, debe ser positiva. Y por último, la onda T, que representa la repolarización auricular, debe ser positiva. Si no se cumplen los criterios, ajuste los electrodos hasta que se registre un trazo adecuado.
Después de grabar, despierta al pez sumergiéndolo en agua oxigenada y echando agua sobre las branquias hasta que las branquias o el pez comiencen a moverse regularmente. En el ejemplo, realizaremos una electrocardiografía de superficie en un pez cebra adulto.
- El día del experimento, transporta el pez cebra del acuario al laboratorio. Para configurar el sistema de registro de ECG in vivo, conecte las piezas esenciales del equipo e inserte los tres electrodos de acero inoxidable codificados por colores del cable de ECG en los tres portales de acceso de color emparejado del amplificador. Para la inducción de la anestesia de nivel 4, sumerja un pez cebra adulto en un plato que contenga una solución de anestésicos a las concentraciones predeterminadas más bajas aprobadas por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales.
Una vez que el pez cebra haya mantenido el nivel para la anestesia durante tres segundos, use un par de pinzas romas para transferir inmediatamente el pez a una esponja húmeda con una superficie ventral cortada hacia arriba para colocar los tres electrodos de ECG. Inserte suavemente el electrodo positivo en la línea media ventral a nivel de la arteriosis bulbosa de 1 a 2 milímetros por encima de una línea imaginaria que conecta los dos bordes inferiores de los opérculos.
Coloque el electrodo negativo caudalmente y de 0,5 a 1 milímetro a la izquierda lateralmente al electrodo positivo a una distancia mayor que la longitud apical-basal máxima del ventrículo del pez cebra adulto. A continuación, coloque el electrodo de referencia caudalmente cerca de la región anal. Para el registro de ECG, inicie el sistema y abra el programa de adquisición de datos de ECG. Seleccione la configuración deseada en los menús desplegables para rango, paso bajo y paso alto.
Presione Inicio para iniciar el registro continuo de ECG sin interrupciones a una frecuencia de muestreo de 1 kilohercio. Para optimizar la posición de los cables para obtener la máxima relación señal/ruido, presione detener para detener la grabación y revise el rastro poco después del primer intento de grabación para cada corazón. Si se espera que el ECG sea normal, confirme que todas las formas de onda del ECG sean distintas y fácilmente visibles y que la onda P, el complejo QRS neto y la onda T sean positivos.
- El paso más crítico es el posicionamiento de los cables para maximizar la relación señal-ruido. Aplique los cuatro criterios de validación después del primer intento de registro de ECG para cada pez para obtener la retroalimentación correcta.
- Si se espera un ECG normal, vuelva a colocar los electrodos según sea necesario hasta que se cumplan estos cuatro criterios de validación. Si se espera una onda T normal pero la onda T es demasiado pequeña, vuelva a colocar los electrodos para maximizar la amplitud de la onda T. Reanude el registro de ECG después de optimizar el posicionamiento de la derivación, guardando los barridos de ECG para su posterior análisis.
Al final de la sesión de registro de ECG, retire con cuidado los electrodos sin lastimar a los peces. En los estudios de supervivencia, transfiera los peces a agua fresca y oxigenada para peces libre de tricaína. Tenga en cuenta que en este video para facilitar a los lectores la visualización de la recuperación de los peces de la anestesia, se suspende la oxigenación.
Para facilitar la recuperación de la anestesia en los estudios de supervivencia, utilice una pipeta Pasteur para rociar agua vigorosamente sobre las branquias hasta que el pez reanude el movimiento branquial regular o la natación. Luego, monitoree a los peces para que se recuperen por completo de la anestesia antes de devolverlos al acuario. Se considera que el pez está completamente recuperado de la anestesia cuando puede nadar erguido durante al menos 5 segundos.