Eliminación mecánica de coriones y membranas vitelinas: un método para preparar ovocitos de Drosophila para la observación directa

- Comience con ovocitos maduros de ovarios fijos en una solución salina. Los ovocitos maduros tienen cáscaras de huevo que consisten en un corion externo y una membrana vitelina interna.

Para extraer mecánicamente el corion y la membrana vitelina, coloque los ovocitos entre las partes esmeriladas de dos portaobjetos pretratados. Mueva el portaobjetos superior con movimientos rectos hacia adelante y hacia atrás para crear una fricción que haga rodar los ovocitos.

Ahora, mueve la corredera superior en un ligero ángulo para hacer rodar los ovocitos en otra dirección. Evitando el movimiento circular, aumente este ángulo en incrementos cortos hasta que la corredera superior se mueva perpendicular a la diapositiva inferior. Este movimiento elimina mecánicamente los coriones y las membranas vitelinas, permitiendo el acceso de sondas o tinciones al ovocito.

Los ovocitos sin coriones tendrán un aspecto largo y delgado, y los que no tienen membranas vitelina tendrán los extremos puntiagudos. Para separar los ovocitos aclarados de los desechos circundantes, transfiera la mezcla de muestra a un tubo y permita que los ovocitos se asienten en el fondo mientras los desechos flotan en la parte sup