Ensayo de evitación y tigmotaxis del pez cebra: un método de alto rendimiento para examinar el comportamiento de las larvas en respuesta a estímulos visuales aversivos

- Para comenzar, coloque cinco larvas en cada carril de una placa de agarosa de seis carriles. Agregue agua de huevo adicional, pero no llene demasiado los carriles. El agua de huevo contiene azul de metileno, que evita el crecimiento de moho. Deje que las larvas se aclimaten durante al menos 10 minutos para reducir su estrés.

Ahora coloque la placa de pocillo en una cámara de imágenes sobre la pantalla de una computadora portátil. Enfoque la cámara en la placa del pocillo. Llene el carril completamente con agua de huevo.

A continuación, registre el comportamiento de las larvas colocadas sobre el fondo en blanco tomando imágenes de lapso de tiempo. Muestre una barra roja en movimiento en la pantalla de la computadora portátil y tome imágenes de lapso de tiempo de las larvas en respuesta a la barra roja en movimiento.

La forma roja se percibe como una amenaza, un estímulo aversivo y provoca estrés a las larvas. En respuesta, evitan la barra y demuestran tigmotaxis positiva. La tigmotaxis positiva es la respuesta del pez al estímulo, buscando contacto con la pared y nadando en el borde del carril.

En el protocolo de ejemplo, analizaremos la evitación y las respuestas tigmotácticas de las larvas de pez cebra tratadas con compuestos farmacéuticos o toxinas ambientales.

- Para comenzar la captura de imágenes, mueva con cuidado las larvas de la placa de Petri al carril de agarosa para ayudar a reducir el estrés de las larvas. Se pueden colocar hasta 20 larvas en cada carril, pero normalmente se utilizan cinco larvas por carril para facilitar el seguimiento más preciso de la velocidad de nado y reducir el número de larvas que se necesitan por experimento.

Llene los carriles con agua de huevo con o sin productos farmacéuticos o tóxicos, según el experimento. No llene los carriles por completo hasta que estén colocados en los gabinetes de imágenes para evitar el desbordamiento. Espere 10 minutos para que las larvas se aclimaten. Después del período de aclimatación, coloque cuatro placas a mano directamente encima de la pantalla de la computadora portátil.

En este momento, los carriles se pueden rematar con agua de huevo o tratamiento químico para que quede al nivel de la parte superior del carril, para eliminar las sombras en los bordes de los carriles en las imágenes.

Programe la computadora para la fotografía de lapso de tiempo, tomando imágenes cada seis segundos para un total de 300 imágenes por experimento. Configure la cámara a una resolución más baja para obtener imágenes a velocidad de video. Mientras que la resolución más baja limita las grabaciones a una sola placa de pocillos múltiples, las grabaciones de video son apropiadas para obtener imágenes de eventos de natación rápida.

Utilice una presentación de PowerPoint como estímulo aversivo para las larvas. En esta demostración, el PowerPoint comienza con un fondo blanco en blanco durante 15 minutos, seguido de 15 minutos de una barra roja en movimiento en la mitad superior del plato. Para evitar la evaporación del líquido dentro de los carriles de agarosa, mantenga el tiempo máximo de imagen por debajo de una hora.