0 visualizaciones • 2:52 min. • April 30th, 2023
- Para empezar, cultiva los embriones en 3 placas de Petri. La primera es una placa de control que contiene la solución de Hank, una solución salina equilibrada. La segunda y tercera placas tienen la solución de Hank con un compuesto potencialmente neurotóxico a diferentes concentraciones.
El compuesto neurotóxico de la solución de exposición penetra en la membrana externa de los embriones por difusión pasiva y altera los procesos del sistema nervioso, como la atención, la coordinación y la actividad muscular. Una vez que los embriones se conviertan en larvas de la edad adecuada, transfiera cada larva a un pocillo individual de una placa de 48 pocillos. Lleve un registro de las condiciones de tratamiento de cada animal.
Transfiera la placa de pocillo a una plataforma de grabación y baje la tapa. Deje que las larvas se aclimaten durante 10 minutos. Establezca ciclos alternos de períodos de luz y oscuridad utilizando el software.
Las larvas de pez cebra normalmente exhiben más movimiento en la oscuridad y menos movimiento en la luz. Registrar la distancia total recorrida por las larvas del grupo control y de exposición en cada periodo. Si el compuesto es neurotóxico, las larvas muestran aún más movimiento en la oscuridad y en la luz que los animales de control.
En el siguiente protocolo, realizaremos pruebas de comportamiento en las larvas de pez cebra expuestas a compuestos neurotóxicos.
- Al menos 2 horas antes de realizar un experimento, ajuste la temperatura ambiente a 28 grados centígrados y agregue 800 microlitros de solución de exposición a cada pocillo de una microplaca de 48 pocillos. A continuación, utilice una pipeta de 1 mililitro con una punta modificada para transferir una larva en 200 microlitros de solución de exposición a cada pocillo de la microplaca, en preparación para un experimento de locomoción y ángulo de trayectoria.
Cuando se hayan establecido todos los parámetros, baje la iluminación de la sala de pruebas y permita que las larvas se aclimaten en el sistema durante 10 minutos. Al final del período de aclimatación, haga clic en Experimentar y ejecutar y cree la carpeta en la que se guardarán los archivos experimentales. A continuación, introduzca el nombre del resultado y haga clic en Fondo e Inicio.
Al final del experimento, haga clic en Experimentar y detener. A continuación, devuelva la microplaca de 48 pocillos a la incubadora de luz para realizar experimentos posteriores.