Inyección de morfolino: un método para eliminar la expresión génica objetivo para estudiar la función en el pez cebra

- Un enfoque para determinar la función de un gen es reducir su expresión y observar el efecto. Los oligómeros de morfolino se utilizan a menudo en estudios de derribo en peces cebra. Un morfolino es una molécula sintética similar al ADN de alrededor de 25 bases de largo, que inhibe la expresión génica objetivo.

Para el tratamiento con morfolino, coloque un pez anestesiado con una aleta caudal parcialmente amputada en una placa de inyección y coloque la placa bajo un microscopio estereoscópico. Solo inyecte el lado dorsal mientras que el lado ventral no inyectado actúa como control. Los morfolinos pueden funcionar de dos maneras dependiendo de la secuencia a la que se dirigen. En primer lugar, se combinan con el sitio de inicio de la traducción en un ARNm e impiden la síntesis de proteínas al bloquear la traducción.

En segundo lugar, puede unirse a la unión intrón-exón en un pre-ARNm e impedir el empalme adecuado, lo que resulta en una transcripción defectuosa que será degradada por la célula. Más tarde, examina las aletas caudales en busca de excrecencias. Las diferencias entre el rebrote de las regiones tratadas con morfolino y las no tratadas indican que la proteína objetivo des