Preparación de muestras de microscopía de lámina ligera: montaje de embriones vivos de pez cebra para la obtención de imágenes a largo plazo

- En primer lugar, prepare la agarosa añadiendo el medio E3, que suministra calcio a los embriones decorionados para fundir la agarosa. A continuación, agregue MS222 para anestesiar los embriones. Enfríe la mezcla de agarosa a 38 grados centígrados, cerca de solidificarse. Seleccione unos pocos embriones decorionados que expresen proteínas fluorescentes y transfiéralos a la mezcla de agarosa.

A continuación, inserte completamente un émbolo en un capilar de vidrio y extraiga un embrión, asegurándose de que entre de cabeza. Una vez que la agarosa se solidifique, use cinta adhesiva para mantener el capilar en posición vertical en un vaso de precipitados que contenga medio E3. El fondo capilar abierto favorece el intercambio de gases para la muestra de embrión.

Coloque el capilar en el portamuestras de un microscopio de fluorescencia de hoja de luz. El láser forma una delgada lámina de luz, lo que permite que un objetivo de detección, colocado perpendicular a la muestra, capture una imagen transversal. En el protocolo de ejemplo, montaremos embriones de pez cebra para obtener imágenes del ojo en desarrollo.

Comience preparando la agarosa. Derretir una alícuota preparada de 1 mililitro