0 visualizaciones • 3:14 min. • April 30th, 2023
- El ojo de un pez cebra está formado por la córnea, la esclerótica, el cristalino y la retina. La córnea es un tejido transparente que permite la entrada de luz en el ojo. La esclerótica es un tejido opaco que es continuo con la córnea, formando una capa protectora externa. El cristalino es una estructura esférica que enfoca la luz en la retina, que es una capa de tejido sensible a la luz que convierte la luz en una señal neuronal.
Para diseccionar el ojo, llena una placa de Petri con silicona y deja que se asiente. Ahora, coloque un pez anestesiado en el plato y extirpe los ojos con una microtijera. Transfiera los ojos a una placa llena de PBS para mantener un pH constante en el tejido y oriente el ojo con la parte posterior hacia arriba. Sostenga el ojo con pinzas y haga con cuidado tres cortes radiales a través de la esclerótica y la retina.
A continuación, dobla el pañuelo para revelar la lente. Ahora, coloque el ojo con la cara anterior hacia arriba y retire la esclerótica y la retina. Saque el cristalino del ojo diseccionado y extraiga cualquier resto de tejido a su alrededor. En el siguiente protocolo, realizaremos disecciones de lentes de pez cebra larvales y adultos para analizar la morfología del cristalino.
Después de confirmar que hay suficiente sedación con tricaína, use unas tijeras de microdisección para extirpar inmediatamente ambos ojos de un pez cebra adulto o larvario, y coloque ambos ojos en una placa de Petri de 35 milímetros hecha a medida con un molde de disección de silicona lleno de PBS. Para extraer el cristalino de un pez cebra adulto, coloque el ojo con la parte posterior hacia arriba e inserte pinzas en un ángulo de menos de 45 grados a través del disco óptico. Use tijeras de disección para hacer dos o tres incisiones radiales a través de la retina y la esclerótica desde el disco óptico hasta la zona ciliar en el ojo inmovilizado y despegue la retina y la esclerótica como pétalos de flores. Invierta el ojo, con el lado de la córnea hacia arriba, y use el lado plano de las tijeras para inmovilizar el cristalino indirectamente a través de la manipulación de la esclerótica y la córnea mientras usa pinzas para separar la retina y los tejidos adjuntos. A continuación, recorte con cuidado el exceso de tejido de la lente.
Para la recolección de larvas de lente de pez cebra, reproduce el lado posterior del ojo de la larva sobre la parte plana de un plato de silicona de PBS. Y use una aguja de tungsteno afilada para hacer cortes de radio a través de la retina y la esclerótica mientras inmoviliza el ojo con otra aguja o fórceps. A continuación, saque suavemente la lente del ojo disociado con el lado romo de una aguja de alambre de tungsteno hecha a medida y retire con cuidado el pañuelo adherido.