in vivo Electroporación: un método específico para transfectar peces cebra

- Primero, coloque un pez anestesiado con el lado dorsal hacia arriba en una esponja previamente humedecida. Antes de la electroporación, inyecte material genético en el tejido objetivo, en este caso, una parte del prosencéfalo llamada telencéfalo. A continuación, coloque una pequeña cantidad de gel de ultrasonido en la cabeza. Además, aplique el gel en la punta de los electrodos para facilitar un funcionamiento eficiente. Coloque el electrodo positivo en el lado ventral de la cabeza y el electrodo negativo en el lado dorsal.

Ahora, presione los electrodos suavemente contra la cabeza y administre varios pulsos de corriente eléctrica. La corriente crea poros temporales en la membrana plasmática de las células electroporadas y las hace permeables. La corriente también facilita el movimiento de partículas cargadas negativamente, como plásmidos de expresión de ADN u oligonucleótidos de ARNi presentes en el entorno, hacia las células. En el siguiente ejemplo, utilizaremos la electroporación para introducir un plásmido recombinante en células ependimmoliales, células madre responsables de la generación de nuevas neuronas.

- Cubrir el telencéfalo de pescado con una pequeña cantidad de gel de ultrasonidos. Para la electroporación del animal inyectado con plásmido, retire la esponja de la configuración de eyección y sumerja el lado interno de las puntas de los electrodos en gel de ultrasonido. Coloque la cabeza de pez entre los electrodos, con el electrodo positivo en el lado ventral de la cabeza y el electrodo negativo en el lado dorsal. Luego, mientras aún sostiene el cuerpo del pez en la esponja, presione los electrodos suave y precisamente contra el telencéfalo y administre la corriente con el pedal, sosteniendo los electrodos en su lugar hasta que terminen los cinco pulsos.