0 visualizaciones • 2:47 min. • April 30th, 2023
- Transfiera un pescado anestesiado con tricaña a una esponja húmeda con la cara dorsal hacia arriba. Coloque la esponja que transporta el pez bajo un microscopio. Coloque una aguja de microinyección en un ángulo de 45 grados con respecto al eje del cuerpo cerca del músculo dorsal.
A continuación, ubica el lugar delante de la aleta dorsal que no esté cubierto de escamas donde puedas insertar la aguja sin aplicar gran fuerza. A continuación, inserte suavemente la aguja e inyecte lentamente el compuesto de interés junto con un marcador como el rojo de fenol en el músculo.
Si el compuesto de interés contiene material genético, electropore las células colocando electrodos a ambos lados del sitio de inyección y administrando la corriente. La corriente hace que las células musculares sean permeables y capaces de absorber eficientemente el material genético. Después del procedimiento, transfiera inmediatamente el pez a un tanque de recuperación. En el siguiente protocolo, realizaremos una inyección intramuscular en un pez cebra adulto para administrar una vacuna de ADN contra la micobacteriosis.
Para mantener el pescado en una posición fija durante la inyección, use un trozo de esponja con una ranura cortada en el medio como relleno. Remoje bien la esponja en el agua del sistema y colóquela en una placa de Petri. Con una cuchara de plástico, transfiera un pez cebra anestesiado a la esponja húmeda con el lado ventral del pez hacia abajo en la ranura. Bajo el microscopio, coloque la aguja en un ángulo de 45 grados cerca del músculo dorsal del pez cebra. A continuación, encuentra el pequeño punto sin escamas delante de la aleta dorsal y empuja la aguja hacia el músculo.
Si siente alguna resistencia, pruebe con un lugar adyacente. Use un interruptor de pie para inyectar gradualmente la solución de plásmido en el músculo. Bajo el microscopio, el rojo fenol debe ser visible a medida que ingresa al tejido muscular.
Electropore al pez inmediatamente después de la inyección colocando los electrodos tipo pinza a cada lado del sitio de inyección. Presione el botón de inicio en el electroporador y dele seis pulsos de 40 voltios y 50 milisegundos. Luego, transfiera suavemente el pez a un tanque de recuperación. Finalmente, después de anestesiar a los peces de acuerdo con el protocolo de texto, use una luz ultravioleta para ver la expresión de EGFP cerca del lugar de la inyección.