Inyección intraperitoneal: un método de administración de solución en la cavidad abdominal de un pez cebra adulto

- Ayuna a un pez adulto durante 24 horas antes de la inyección para vaciar el tracto gastrointestinal y crear espacio adicional en el abdomen. El día del procedimiento, anestesia al pez con tricaína y colóquelo en una ranura en una esponja húmeda con el lado ventral hacia arriba.

A continuación, pipetee la cantidad deseada de solución inyectable en un trozo de película de laboratorio y jáquelo en una aguja de insulina. Coloque la aguja entre las aletas pélvicas en un ángulo de 45 grados con respecto al eje antero-posterior del cuerpo y empújela suavemente en la línea media. Avance la aguja aproximadamente de 1 a 2 milímetros en la cavidad abdominal, el espacio entre la pared abdominal y los órganos internos, e inyecte lentamente la solución de interés. Espere cinco segundos antes de sacar la aguja para evitar derrames. Ahora, retira la aguja con cuidado.

Después de la inyección, transfiera rápidamente el pez a un tanque de recuperación que contenga agua dulce del tanque. Si el pez no comienza a nadar de inmediato, agita el agua cerca de las branquias para ayudarlo a recuperarse de la anestesia. En el protocolo de ejemplo, inyectaremos una solución de mycobacterium marinum en peces mutantes RAG1 para estudiar la infección.

- Primero, coloque una gota de 5 microlitros de la solución bacteriana diluida sobre un trozo de película de parafina. Luego, coloque la gota en una aguja de insulina de calibre 30. Use un pez de cinco a ocho meses de edad para este experimento, siendo uno un pez de tipo salvaje y el otro un pez mutante RAG.

Coloque estos peces con el lado ventral hacia arriba en las ranuras de un trozo de plástico espumado húmedo. Inyecte la aguja de insulina entre las aletas pélvicas en un ángulo de 45 grados. Mantenga la aguja abierta hacia arriba para asegurarse de que toda la abertura esté dentro de la cavidad abdominal. Luego, inyecte lentamente la solución bacteriana. Después de esto, retire con cuidado la aguja e inmediatamente transfiera el pez a un tanque de recuperación lleno de agua dulce del tanque.

Tome muestras de la alícuota bacteriana en uso cada 15 minutos en placas 7H10. Incubar estas muestras a 29 grados centígrados durante cinco días para verificar la dosis de infección. Verifique el bienestar de los peces con regularidad, asegurándose de sacrificar a cualquier pez con síntomas de infección incubándolos en agua con más del 0,02% de éster etílico del ácido 3-aminobenzoico.