0 visualizaciones • 3:54 min. • April 30th, 2023
- Coloque un pez sacrificado en una cama de disección y use una cuchilla quirúrgica para decapitar al pez a la altura de las branquias. Sostén la cabeza con el lado ventral hacia arriba y retira los tejidos blandos hasta que veas el quiasma óptico, una estructura formada por nervios ópticos que conecta el cerebro con los ojos.
Cortar los nervios ópticos y extirpar los ojos. Ahora, orienta al pez con el lado dorsal hacia arriba y retira las partes del cráneo para aislar el cerebro. Transfiera el cerebro a una placa de Petri que contenga un medio de disección para mantener un pH constante del tejido. Observa las partes del cerebro.
Los bulbos olfativos son un par de estructuras en el extremo anterior conectadas a los órganos olfativos que detectan señales de olor. El telencéfalo incluye áreas relacionadas con la memoria. La habénula transmite información desde el telencéfalo a otras partes del cerebro.
El tectum óptico es un centro de procesamiento de información sensorial. El cerebelo desempeña un papel en la función motora somática y el equilibrio. Y la médula transmite información de la médula espinal al cerebro. En el siguiente protocolo, aislaremos el cerebro de un pez cebra adulto para recolectar células madre neurales de diferentes regiones.
Para empezar, prepare una cama de disección llenando una placa de Petri con paquetes de gel. A continuación, cubre el plato con su tapa correspondiente e incuba a menos 20 grados centígrados. Una vez que el gel esté congelado, retira el plato del congelador y coloca un cuadrado limpio de papel de filtro encima de su tapa. Proceda a envolver tanto el papel como el plato con una película de plástico.
A continuación, trate todos los instrumentos de microdisección con etanol al 70%. Coloque estas herramientas esterilizadas junto a un microscopio de disección y coloque la cama de disección completa debajo del microscopio con iluminación de fibra óptica. Coloque inmediatamente un espécimen de cabeza previamente preparado encima del lecho de disección y oriéntelo de modo que su lado dorsal quede hacia abajo.
Luego, use unas tijeras para hacer un corte longitudinal a través del tejido blando desde la parte posterior de la cabeza hasta la boca. Después, exponga la base del cráneo con pinzas y retire todo el tejido adyacente. A continuación, corta una de las paredes laterales del cráneo comenzando en la parte posterior de la cabeza y moviéndose hacia la región del tectum del cerebro. Repita este proceso para el lado contralateral. Proceda a cortar el nervio óptico. Y luego extirpar los dos lados laterales del cráneo a la altura del tectum
Finalmente, gire la cabeza con el lado ventral hacia arriba. Y con fórceps, despegue la parte más apical del cráneo para exponer el cerebro. Posteriormente, transfiera el cerebro y las partes restantes del cráneo a una placa que contenga medio de disección que esté compuesto de DMM F12 suplementado con estreptomicina de penicilina. Con el mango de plástico de un microcuchillo debajo del microscopio, limpie el tejido cerebral, teniendo cuidado de no dañar ninguna estructura neuronal. Usa hasta dos cerebros de pez cebra para generar neuroesferas derivadas del cerebro completo.