0 visualizaciones • 4:47 min. • April 30th, 2023
- La miocardiopatía es una afección en la que el músculo cardíaco se debilita y pierde la capacidad de bombear sangre. Esta condición se puede replicar en el pez cebra. En primer lugar, diluir una solución madre de un fármaco responsable de la cardiotoxicidad en la solución salina equilibrada de Hanks para preparar varias concentraciones de trabajo. A continuación, coloque un pez anestesiado con tricaína, con el lado ventral hacia arriba, sobre una esponja de sujeción bajo un microscopio de disección. Coloque la aguja entre las aletas pélvicas en un ángulo de 45 grados con respecto a la horizontal.
Ahora empuje suavemente la aguja de 1 a 2 milímetros en la cavidad peritoneal e inyecte lentamente la solución del medicamento. Espere cinco segundos antes de sacar la aguja para evitar que la solución se escape. Transfiera inmediatamente los peces a un tanque limpio que contenga agua dulce del sistema. Registre el número de peces que mueren cada día debido a cardiotoxicidad grave, daño al músculo cardíaco. El fármaco se une a los receptores de muerte presentes en la membrana celular de los cardiomiocitos y desencadena la apoptosis, lo que provoca una cardiotoxicidad grave.
Cree una curva de supervivencia, un gráfico que muestre la probabilidad de supervivencia a lo largo del tiempo para cada concentración de fármaco. En el ejemplo, inyectaremos doxorrubicina, o DOX, para inducir miocardiopatía en un pez cebra adulto de dos maneras.
Antes de inyectar al pez con DOX, ayune el pez durante 24 horas. A continuación, agrupa los peces. Mientras está anestesiado, use un papel de filtro limpio para secar cada pez y medir su peso corporal. Haga grupos de peces que estén dentro del 10% del mismo peso corporal para que cada grupo pueda recibir la misma dosis de DOX. A continuación, calcule la concentración de trabajo de DOX para cada grupo de modo que a cada grupo se le inyecten cinco microlitros de solución y reciba la misma dosis de DOX por peso corporal.
A continuación, diluya el stock de DOX en 1x HBSS. Mezcle la dilución con un vórtice y luego gire la dilución por pulso para mantenerla agrupada en el tubo. Para la inyección, prepare una plataforma de inyección. En una placa de Petri limpia de 100 milímetros, coloque una esponja. Con la ayuda de un microscopio de disección, corte una cavidad en la esponja para sostener un pez, cuatro centímetros generalmente funcionan.
A continuación, coloque una jeringa de 10 microlitros en una aguja de calibre 34. Luego, enjuague la aguja con 1x HBSS para eliminar las burbujas o bloqueos de la jeringa y el tubo. Ahora, anestesia brevemente a los peces adultos con tricaína. Luego, remoje la esponja en el agua del embrión con tricaína y transfiera un pez a la esponja con el abdomen hacia arriba para la inyección. Ahora, inyecte intraperitonealmente la solución de DOX insertando rápidamente la aguja en un ángulo de 45 grados en la línea media entre las aletas pélvicas de aproximadamente 1 a 2 milímetros de profundidad.
Luego, libere lentamente toda la solución DOX. Antes de retraer la aguja, espere cinco segundos. Alternativamente, el pez se puede colocar lateralmente con el interior a la derecha. Luego, inyectó la línea lateral por encima de la aleta pélvica con el bisel hacia arriba apuntando hacia las 7 en punto en un ángulo de 45 grados y de 3 a 4 milímetros de profundidad. Si alguno de los métodos de inyección tuvo éxito, habrá un tinte rojo en el vientre.
Después de la inyección, transfiera rápidamente el pez a un tanque de cruce limpio lleno de agua dulce del sistema donde pueda recuperarse. Luego, enjuague la aguja con HBSS y proceda a inyectar el siguiente pez. Posteriormente, regrese el pescado inyectado a un sistema con circulación corriente pero separado del sistema principal para evitar la contaminación cruzada. Durante las próximas 24 horas, continúe ayunando los peces. Durante la primera semana, después de la inyección, asegúrese de revisar los peces diariamente y eliminar los peces muertos.