Name: Ortotópico patas traseras trasplante en ratas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-12T17:40:00.000+00:00
Duration: 14 min 3 s
Description: Aprende el trasplante ortotópico de miembros posteriores en ratas usando la técnica de manguito para revascularización. Este modelo permite estudiar lesiones por isquemia-reperfusión y eventos inmunológicos del rechazo de aloinjertos.

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Operación de los donantes y los miembros traseros cosecha <ol><li> Para el procedimiento quirúrgico estéril de un conjunto de instrumentos de microcirugía se utiliza. El cirujano debe usar ropa adecuada, guantes estériles, lo que tiene que ser cambiado antes del inicio del procedimiento quirúrgico. </li><li> La rata se anestesiaron con una inyección intraperitoneal de pentobarbital (50mg/kg IP) y se coloca en posición supina sobre un campo de operación de calefacción, lo que facilita una temperatura corporal del animal estable a lo largo de todo el procedimiento quirúrgico. </li><li> Antes de la incisión en la piel el campo de la operación es desinfectado tres veces cada uno con dos, un desinfectante y alcohol. Para evitar que las córneas animales de la desecación, los ojos están lubricados con un ungüento oftálmico (Vidisic) antes de la cirugía. </li><li> Una incisión en la piel se realiza a través de la ingle derecha aproximadamente a nivel del ligamento inguinal. Los vasos femorales se disecan con cauterio bipolar y disección roma, ramas profundas se ligan con seda 8-0. </li><li> 300μl (50 UI) de heparina se inyecta a través de la vena del pene para la anticoagulación. </li><li> Vasos femorales se ligan a nivel del ligamento inguinal y corte distal a la ligadura. </li><li> La extremidad posterior se lava con helado (4 ° C) solución HTK (5 ml) a través de la arteria femoral durante 5 minutos. </li><li> Todos los grupos musculares están muy divididos con unas tijeras y la osteotomía se realiza con una rotación eléctrica vio a nivel del tercio distal del fémur. </li><li> El miembro cosecha se sumerge en 20 ml de helado de solución HTK para la preservación y almacenamiento en frío hasta el trasplante. </li></ol> Receptor de operación y Trasplante <ol><li> La rata se anestesiaron con una inyección intraperitoneal de pentobarbital en posición supina y se coloca en el campo de operación. </li><li> Una incisión en la piel se realiza a través de la ingle derecha aproximadamente a nivel del ligamento inguinal. Los vasos femorales se disecan con cauterio bipolar y disección roma. </li><li> Vasos femorales se ligan como distal como sea posible, pero próximo al despegue los vasos epigástricos. Clamps vasculares se colocan a nivel del ligamento inguinal en la arteria y la vena. </li><li> Un manguito de polietileno se coloca sobre la arteria (diámetro interior del manguito: 0.912 mm, espesor de la pared del manguito: 0.010 mm, la longitud del manguito: 2.0 mm) y la vena (diámetro interior del manguito: 1.151 mm, espesor de la pared del manguito: 0.010 mm, la longitud del manguito : 2,0 mm). El borde de la luz del vaso se tira con un dilatador buque y de la arteria femoral y la vena se eversión en todo el cuerpo de la banda (de aproximadamente 2 mm) y se fija con una ligadura de seda 8-0 circunferencial. </li><li> Para dejar espacio a la extremidad del miembro donante receptor se elimina con disección aguda de los grupos musculares y la osteotomía se realiza a mediados de fémur. </li><li> La extremidad de los donantes se retiran de la solución HTK y el trasplante comienza con la osteosíntesis de fémur con una aguja de calibre 18 (longitud: 1,5 a 2,0 cm) como una varilla intramedular. </li><li> Grupos de músculos ventrales son muy aproximados con Vicryl 4-0 o Prolene suturas interrumpidas. </li><li> Anastomosis vasculares se realizan tirando de la vena y la arteria de los donantes sobre la vena destinatarios y complejas del manguito. Una circunferencia 8-0 ligadura de seda se coloca de nuevo para asegurar la anastomosis. </li><li> La pinza venosa es lanzado, seguido de la pinza arterial, y la reperfusión se visualiza por el regreso de color en la extremidad distal de pies y manos, así como el flujo pulsátil a través de la arteria. </li><li> El resto de los grupos musculares dorsales se vuelven a aproximarse con Vicryl 4-0 o Prolene suturas interrumpidas. </li><li> La piel se cierra con Vicryl 4-0 o prolene suturas interrumpidas. </li><li> La rata receptor se coloca en una almohadilla eléctrica y vigilarse estrechamente hasta su recuperación. </li><li> Los animales receptores que reciban antibióticos profilácticos (cefazolina, 20 mg / día, IM) y Buprenex (0,1 mg / kg, SC) durante tres días después del trasplante. </li></ol>

<ol><li>Shapiro, R. I., Cerra, F. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+model+for+reimplantation+and+transplantation+of+a+complex+organ%3A+the+rat+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb.</a> J Surg Res. 24 (6), 501-506 (1978).</li>
<li>Petruzzo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+international+registry+on+hand+and+composite+tissue+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">The international registry on hand and composite tissue transplantation.</a> Transplantation. 86 (4), 487-492 (2008).</li>
<li>Schneeberger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+forearm+transplantation%3A+outcome+at+3+years%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">First forearm transplantation: outcome at 3 years.</a> Am J Transplant. 7 (7), 1753-1762 (2007).</li>
</ol>

Décadas de investigaciones experimentales han precedido y ha permitido el éxito del trasplante mano humana en el pasado reciente. En 1978, Shapiro et al. desarrollado un modelo ortotópico de trasplante de extremidades traseras de las ratas, muy adecuado para estudiar diversos aspectos patológicos, fisiológicos e inmunológicos, así como el resultado funcional de los injertos de tejidos compuestos. Hemos modificado la parte más difícil del procedimiento, a saber, la anastomosis vascular, mediante la introducción de una té...

<table><tbody><tr><td>Nembutal&amp;#174;</td><td>OVATION Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparina Immuno</td><td>Ebewe Pharma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Solución Custodiol HTK</td><td>Essential Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tijeras para adventicia</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;SAS-21 R-8T</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;JFC-7</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas dilatadoras</td><td>ASSI</td><td>ASSI&amp;#174;D-5AZ</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de poliamida</td><td>River Tech Medical</td><td>#17; #19</td><td></td></tr></tbody></table>

ortotópico patas traseras trasplante en ratas

Orthotopic Hind-Limb Transplantation in Rats

Alotrasplante de tejido compuesto (CTA) representa una opción terapéutica válida después de la pérdida de una mano, el antebrazo o dígitos y se ha convertido en una entidad terapéutica novedosa en cirugía reconstructiva. Sin embargo, a largo plazo de dosis altas a múltiples fármacos inmunosupresores es necesaria para garantizar la supervivencia del injerto, que asumen el riesgo de efectos secundarios graves que cabestros una aplicación más amplia. Progresión en este campo puede depender de una mejor comprensión de la inmunología básica y la lesión por isquemia reperfusión en injertos de tejido compuesto. Hasta la fecha, el trasplante ortotópico de las extremidades posteriores en ratas ha sido el modelo de preferencia entre los roedores de reconstrucción del trasplante (TR), sin embargo, es un procedimiento muy exigente que requiere habilidades extraordinarias de microcirugía para la reinserción de los vasos, huesos, músculos y nervios. Hemos introducido la técnica del manguito de anastomosis vascular de este modelo, proporciona un enfoque rápido y fiable para el trasplante de las extremidades posteriores de ratas. Esta técnica simplifica y acorta el procedimiento quirúrgico y permite a los cirujanos con experiencia en microcirugía básica para llevar a cabo con éxito la operación con la supervivencia y bajas tasas de complicación. La técnica parece ser muy adecuado para inmunológica, así como estudios de isquemia reperfusión (IRI).

A continuación se describe la rata ortotópico patas traseras procedimiento de trasplante, lo que parece ser el estándar de oro<em&gt; In vivo</em&gt; Modelo para la investigación compuesto alotrasplante de tejido.

Ortotópico patas traseras trasplante en ratas

El alotrasplante de tejido compuesto (ATC) representa actualmente una opción terapéutica válida tras la pérdida de una mano, un antebrazo o de los dedos, y se ha convertido en una novedosa...

Soy Robert Suha del Laboratorio de Investigación Daniels Roski del Departamento de Trasplante Visceral y Cirugía Torácica de la Universidad Médica de Innsbrook. Hoy les mostraremos el procedimiento del trasplante de extremidad he, introduciendo una técnica de manguito para la revascularización. Esta cirugía de trasplante de extremidad he es realizada por nuestros residentes quirúrgicos, incluyéndome a mí.Utilizamos este modelo animal para estudiar lesiones asociadas con isquemia y reperfusión en un injerto alogénico de tejido compuesto. Además, empleamos este procedimiento para investigar los eventos inmunológicos del rechazo de injertos alogénicos de tejido compuesto, así como estrategias para prevenir dicho rechazo. Estas estrategias incluyen la minimización o incluso la evitación de la inmunosupresión de mantenimiento mediante el uso de regímenes inmunomoduladores dirigidos.El procedimiento de trasplante del miembro trasero rojo comienza con la obtención del injerto de tejido compuesto del donante, en el cual se extrae la pata trasera derecha de la rata donante y se almacena en hielo. A continuación, se elimina la pata trasera derecha de la rata receptora para dejar espacio para la pata del donante. Luego, la pata del donante se retira del hielo y se trasplanta a la rata receptora.En este modelo, las anastomosis vasculares se realizan utilizando una técnica de manguito. Para nuestros experimentos, se utilizaron ratas Louis Red macho que pesaban 250 gramos. La anestesia se indujo mediante una inyección intraperitoneal de pentobarbital a 50 miligramos por kilogramo.Se afeita y se desinfecta la ingle y el pene del ratón anestesiado para el procedimiento. Se requiere un juego completo de instrumentos microquirúrgicos, incluyendo pinzas microquirúrgicas rectas, tijeras, dilatadores de vasos y dos pinzas curvas. Además, los instrumentos más importantes son las pinzas microquirúrgicas para vasos que se muestran aquí.Para evaluar la profundidad de la anestesia, se utiliza el reflejo de compresión del dedo del pie. La rata se coloca sobre una plataforma estéril y se sujeta con las cuatro extremidades en extensión completa antes de la incisión. La extremidad se mantiene alejada de cualquier eje aquí para prevenir contaminación.Se realiza una incisión a través de la ingle derecha aproximadamente al nivel del ligamento inguinal. Los vasos femorales aparecen inmediatamente debajo de la piel y se disecan libremente con pinzas bipolares y disección roma. Luego, los vasos epigástricos se disecan libremente y se cauterizan.Se coloca una sutura de retención de un solo bucle alrededor de la vena y la arteria para permitir tracción sin manipular directamente los vasos con instrumentos tras la separación. Las ramas profundas de la arteria y la vena se ligan con sutura de seda 8-0 proximalmente y se cauterizan distalmente antes de la extracción del miembro donante. Se administran 50 unidades de heparina a través de la vena peniana.Tras un minuto, se vuelve a prestar atención a los vasos femorales. Se liga la arteria femoral lo más aproximadamente posible utilizando seda 8-0, y se repite el mismo procedimiento para la vena femoral. A continuación, ambos vasos se seccionan distalmente desde la ligadura y se realiza un lavado del miembro posterior a través de la arteria con solución HDK fría con heparina durante cinco minutos.A continuación, todos los grupos musculares se dividen cuidadosamente con tijeras. La osteotomía se realiza utilizando una sierra eléctrica rotatoria a nivel del tercio distal del fémur. La extremidad extraída se sumerge entonces en 20 mililitros de solución HDK fría con hielo para su preservación y almacenamiento en frío hasta el trasplante.La operación del receptor comienza de forma similar a la operación del donante, con el aislamiento y la disección de los vasos femorales. Tras una disección cuidadosa, los vasos se ligan utilizando seda 8-0 lo más distal posible, pero proximal al origen de los vasos epigástricos. A continuación, se procede al montaje de la vena receptora en el manguito, introduciendo el manguito polilaminado sobre el vaso.Se aplica una pinza de vena única proximal al manguito sobre la vena y la empuñadura del manguito para asegurar una hemostasia completa. Se corta la ligadura en el extremo distal de la vena y luego se invierte la vena sobre el manguito. Se coloca una ligadura 8-O alrededor del vaso y el manguito, asegurando la vena receptora en su lugar.Se realiza exactamente el mismo procedimiento para la arteria con la férula de diámetro más pequeño. El miembro receptor se disecciona de manera similar al miembro donante, con disección cuidadosa de los grupos musculares y osteotomía realizada en la parte media del fémur. Ahora estamos listos para trasplantar el miembro posterior.Se retira el miembro donante de la solución HDK. El trasplante comienza con la osteosíntesis del fémur utilizando una aguja de calibre 18 como varilla intramedular. Se corta la punta y la aguja restante se recorta a una longitud de uno y medio a dos centímetros.Los grupos musculares ventrales se aproximan estrechamente con cuatro suturas separadas de Vicryl o prolina para estabilizar la extremidad y prepararse para la anastomosis vascular. Para la anastomosis con manguito, se dilata la vena del donante, se desliza sobre la vena y el manguito del receptor y se fija con otra ligadura circunferencial de ocho puntos. Se realiza el mismo procedimiento para la arteria del donante.Finalmente, una vez que ambos vasos estén anastomosados, se libera la pinza venosa, seguida de la pinza arterial. La reperfusión es inmediata y se visualiza fácilmente por la recuperación del color en el miembro distal y el pie, así como por el flujo pulsátil a través de la arteria. Los grupos musculares dorsales restantes se reanastomosan.La piel se cierra con cuatro puntos separados de Vicryl o prolina, y el trasplante queda completo. Postoperatoriamente, el ratón se mantiene caliente sobre una almohadilla calefactora y se administran analgésicos y antibióticos. El ratón se monitorea cuidadosamente durante 48 a 72 horas en busca de signos de malestar o complicaciones quirúrgicas.La técnica de anastomosis con manguito se ha realizado ampliamente en diversas áreas de investigación quirúrgica durante las últimas décadas, desde modelos de trasplante renal marino hasta modelos de trasplante cardíaco heterotópico. Permite estudiar diversos aspectos de la lesión por isquemia-reperfusión, así como fenómenos inmunológicos. Tras nuestro trasplante.Aquí mostramos la primera aplicación de esta técnica única de manguito en el trasplante de tejidos compuestos de extremidades. En un modelo de animal pequeño, la técnica de manguito reduce significativamente el tiempo quirúrgico, la experiencia microquirúrgica requerida por el operador y la pérdida sanguínea intraoperatoria en comparación con las técnicas convencionales de sutura para la anastomosis.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Se presenta una revisión fácil de establecer de la clásica banda de dos técnicas para el trasplante ortotópico de hígado en ratas.

Trasplante ortotópico de hígado en ratas

Describimos una nueva técnica para el trasplante heterotópico abdominal de corazón-pulmón (HAHLT) en ratas. La configuración del trasplante da como resultado una circulación del injerto parcialmente cargada, lo que permite una evaluación funcional directa. Este modelo puede emplearse para estudios agudos o crónicos de la función y el estado inmunológico del injerto trasplantado.

Rata heterotópico abdominal Corazón / Trasplante de un solo pulmón en una configuración de volumen cargado

Este modelo novedoso para posterior trasplante ortotópico extremidad en el ratón, la aplicación de una técnica de manguito no de sutura para la anastomosis super-microvascular, proporciona una herramienta poderosa para la investigación inmunológica in vivo mecanicista relacionada con alotrasplante compuesto vascularizado (VCA).

Ortotópico de la extremidad posterior de trasplante en el ratón

El propósito de este manuscrito y el protocolo es explicar y demostrar en detalle el procedimiento quirúrgico de trasplante ortotópico de riñón en ratas. Este método se simplifica para lograr la correcta perfusión del riñón del donante y acortar el tiempo de reperfusión mediante el uso de la técnica de anastomosis del manguito venoso y ureteral.

Trasplante de riñón de rata ortotópica: un enfoque quirúrgico novedoso y simplificado

Este protocolo presenta un modelo robusto y reproducible de alotrasplante compuesto vascularizado (VCA) orientado al estudio simultáneo de la inmunología y la recuperación funcional. El tiempo invertido en la técnica meticulosa en un trasplante ortotópico de las extremidades traseras de la parte media derecha con anastomosas vasculares cosidas a mano y coaptación neuronal produce la capacidad de estudiar la recuperación funcional.

Dar el siguiente paso: un modelo de trasplante de extremidades hindópicos ortotópicos de coaptación neuronal para maximizar la recuperación funcional en rata

Describimos un modelo de trasplante de corazón abdominal heterotópico en ratas, lo que implica modificaciones de las estrategias actuales, que conducen a un enfoque quirúrgico simplificado. Además, describimos un nuevo modelo de rechazo mediante inyección en la oreja de células musculares cardíacas vitales, permitiendo análisis inmunológicos de trasplante adicionales en ratas.

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Este trabajo presenta un protocolo de trasplante de colgajo osteomiocutáneo heterotópico parcial en ratas y sus posibles resultados en el seguimiento a medio plazo.

Modelo de trasplante parcial de extremidades posteriores heterotópicas en ratas

El modelo de trasplante renal ortotópico de rata contribuye a investigar el mecanismo de rechazo del aloinjerto renal. El modelo actual aumenta la supervivencia de los receptores sin interferencia con el suministro de sangre y el reflujo venoso de la parte inferior del cuerpo utilizando una anastomosis de extremo a extremo de la implantación renal y un método de "túnel" de extremo a lado de anastomosis uréter-vejiga.

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El presente trabajo describe una técnica modificada para el trasplante cardíaco vascularizado heterotópico con técnica aséptica actualizada, analgesia y anestesia.

Un protocolo modificado de trasplante de corazón heterotópico murino que coincide con los estándares contemporáneos de técnica aséptica, anestesia y analgesia

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Aprende el trasplante ortotópico de miembros posteriores en ratas usando la técnica de manguito para revascularización. Este modelo permite estudiar lesiones por isquemia-reperfusión y eventos inmunológicos del rechazo de aloinjertos.

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