Inyección de venas de cola: un método para administrar células cancerosas para estudios metastásicos en un modelo de ratón

Comience agregando tripsina en una placa de Petri que contenga células de cáncer de mama marcadas para separarlas de la superficie. Añadir medio que contenga suero para detener la acción de la tripsina. Transfiera la suspensión de la celda a un tubo cónico y centrifuércela a la celda de pellets.

Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender las células en solución salina tamponada con fosfato. Coloque el tubo sobre hielo para ralentizar el metabolismo celular. Cargue esta suspensión de celdas que contiene la cantidad requerida de celdas en una jeringa Luer lock y fije una aguja en ella.

Coloque un ratón en un protector de roedores con la cola afuera. Sumerge la cola en agua tibia para dilatar las venas. Hay dos venas en los lados laterales y una arteria en el lado ventral de la cola. Limpie la cola con alcohol, inserte la aguja e inyecte la suspensión celular.

Una vez en el torrente sanguíneo, las células cancerosas inyectadas invaden órganos, como los pulmones, y proliferan. Retire lentamente la aguja y use una gasa estéril en el sitio de la inyección para aplicar presión y detener el sangrado. Regrese el ratón a su jaula y asegúrese de que se recupere por completo. En el siguiente protocolo, demostramos la inyección de células cancerosas metastásicas marcadas en un modelo de ratón para cuantificar la metástasis y colonización del cáncer de mama.

Aspire el medio y enjuague las placas de celda con 1X PBS. Tripsinice las células con 5 mililitros de tripsina por placa de 15 centímetros durante dos a cinco minutos y transfiera todas las células a un tubo cónico. Lave las células restantes de la placa de cultivo de tejidos con suficientes medios de crecimiento completos para apagar la tripsina. Agregue el lavado al mismo tubo cónico. Cuente las celdas utilizando un contador de celdas automatizado para determinar el número total de celdas.

A continuación, centrifugar las células a 122 veces G durante tres minutos y aspirar el sobrenadante. Vuelva a suspender las células en 1X PBS a la concentración deseada. Aquí, se inyectan 25.000 células en cada ratón en 100 microlitros de PBS, por lo que las células resuspendidas están a 250.000 células por mililitro. Mantenga las suspensiones celulares en hielo hasta la inyección.

Trabajando en una capucha en el animalario, mezcle suave pero completamente las células invirtiendo el tubo o usando una jeringa de 1 mililitro para asegurarse de que se resuspendan uniformemente. Ahora, cargue una jeringa Luer lock de 1 mililitro con suspensión celular y expulse el exceso de burbujas de aire. Coloque una aguja de calibre 30 de 1/2 pulgada en la jeringa con el bisel hacia arriba y expulse las burbujas de aire.

Coloque suavemente al ratón en un protector para roedores. La vena lateral de la cola debe ser visible y estar dilatada. De lo contrario, pellizque suavemente la base de la cola y sumerja la cola en agua tibia del grifo para dilatar las venas. Usa una toallita con alcohol para limpiar la cola. A continuación, inserte la aguja en la vena de la cola, con el lado bisel hacia arriba, e inyecte 100 microlitros de suspensión celular. Si la aguja se inserta correctamente en la vena, debe deslizarse fácilmente ligeramente hacia adelante y hacia atrás, y no debe haber resistencia cuando se empuja el émbolo.

Las inyecciones exitosas también deberían resultar en un enrojecimiento, en el que el color azul de la vena se vuelve blanco durante unos segundos después de la inyección. Retire lentamente la aguja y, con una gasa estéril, aplique presión en el lugar de la inyección para detener el sangrado. Regrese el mouse a su jaula y monitoree durante 15 minutos para garantizar una recuperación completa.