Name: Presión atmosférica de Imagen Molecular de los tejidos biológicos y biopelículas por LAESI Espectrometría de Masas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-09-03T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 22 s
Description: Aprende a realizar imagen molecular de tejidos biológicos y biopelículas mediante espectrometría de masas LAESI a presión atmosférica sin preparación previa de muestras.

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Los autores agradecen el apoyo financiero de este trabajo por los EE.UU. National Science Foundation con la subvención No. 0719232, por el Departamento de Energía de EE.UU. (DEFG02-01ER15129), y por Protea Biosciences, Inc. (Morgantown, Virginia Occidental). Los autores también desean agradecer a Jessica A. Stolee por su ayuda durante la grabación en vídeo del protocolo.

El siguiente protocolo describe los pasos principales de la ionización electrospray láser de ablación (LAESI) experimento y proporciona ejemplos representativos de lateral y en tres dimensiones (3D) de imágenes de animales y muestras de tejidos vegetales. Otros detalles experimentales y técnicas se pueden obtener de otros lugares. 6.1 1. Preparación y montaje del tejido <ol><li> Si el corte es necesario, utilice un criomicrotomo a la sección de tejido en rodajas gruesas 10-100 micras de -10 a -20 ° C a menos que se recomienda para un tipo de tejido en particular. </li><li> Monte secciones sobre una superficie plana (por ejemplo, químico previo limpiar portaobjetos de vidrio) directamente sin modificadores químicos. Para cortes de tejidos, deshielo de montaje en los sectores y asegurar el soporte de la muestra a una etapa de enfriamiento Peltier-inmediatamente después de la descongelación de montaje para mantener el tejido congelado en todo momento durante el análisis. Este paso es necesario para minimizar / evitar la migración molecular en la sección. </li><li> Si es necesario, utilice un disipador de calor equipadas con un ventilador de baja potencia-para facilitar la extracción de calor de la etapa de Peltier para mantener el tejido congelado. </li><li> En un ambiente húmedo durante un período prolongado de tiempo (1-2 horas), para inspeccionar la condensación de agua o hielo en la superficie del tejido. Condensación de agua en el tejido negativamente afecta al rendimiento de imagen en los experimentos LAESI 1. </li><li> Si es necesario, utilice un deshumidificador habitación o lugar de la muestra enfriada en una cámara llena de un gas inerte (por ejemplo, gas, nitrógeno seco) para evitar la condensación. 1 </li></ol> 2. Optimización de la fuente de iones LAESI La fuente de iones LAESI consta de un láser en el infrarrojo medio, una serie de elementos ópticos para dirigir la luz y el enfoque, así como los titulares adicionales de la muestra, los componentes de enfriamiento, las etapas de traducción, y un sistema de distribución del disolvente. La Figura 1 muestra la disposición típica de estos elementos con respecto a la entrada de la fuente de iones de presión atmosférica de un espectrómetro de masas. <ol><li> Como se ilustra en la Figura 1, la posición de la muestra de 15 a 20 mm por debajo del orificio del cono de masa de muestreo espectrómetro (d O FP-). </li><li> Operar un láser infrarrojo medio en longitud de onda de 2.94 micras y 10 Hz frecuencia de repetición. Atenuar la salida del láser de ~ 100 μJ / pulso de energía. </li><li> Use una combinación de espejos de oro y una lente de enfoque transparente a la longitud de onda de láser (por ejemplo, una cafetería plano-convexo 2 o lentes de ZnSe) para acoplar la energía del pulso láser en la muestra en incidencia normal (ver el ángulo de incidencia con respecto al derecho de superficie de la muestra en la Figura 1). </li><li> La posición del infrarrojo medio eje del haz 8.5 mm por delante del orificio del cono de masa de muestreo del espectrómetro. </li><li> Ajustar la posición de la lente de enfoque y la energía del pulso del haz de láser para lograr la eliminación de tejido en el punto focal. Las dimensiones del volumen de ablación determinar el píxel (o voxel en imágenes tridimensionales) de tamaño de la aplicación de imágenes. </li><li> La posición de un emisor nanospray en línea con el eje de entrada del espectrómetro de masas y en una distancia boquilla con orificio-emisor de ~ 10 mm (ver Figura 1). </li><li> Para el electrospray, prepare solución al 50% de metanol con 0,1% de ácido acético o el 0,1% de aditivo de acetato de amonio para el modo de iones positivos o negativos, respectivamente. Dependiendo de la muestra, otros disolventes orgánicos, tales como acetonitrilo, isopropanol, etc, pueden sustituir el metanol en concentraciones apropiadas para la tarea analítica. La estabilidad de la electrospray es crucial para el éxito de imagen. Dependiendo de la selección del disolvente, el caudal y la tensión de fumigación deben ser ajustados para lograr spray estable. </li><li> De reactivos LAESI 6 en aplicaciones de imagen, la solución electrosprayed puede contener reactivos. </li><li> Use una bomba de una jeringa para aplicar la solución de electrospray a través del emisor de electrospray con un caudal de alrededor de 300 nL / min. </li><li> Si el orificio espectrómetro de masas se mantiene a baja tensión (&lt;500 V medido contra el suelo), generar electrospray mediante la aplicación de alta tensión directamente al emisor electrospray (por ejemplo, 3000 V) oa través de una unión de metal. De lo contrario, baja directamente del emisor electrospray o mediante la unión de metal para establecer electrospray. </li><li> Operar la fuente de electrospray en el cono de chorro de pulverización para la generación de iones de modo más eficiente por LAESI. Para el efecto de las variables que operan en los modos de fumigación y su efecto en los espectros de masas, ver las discusiones en otros lugares. 5,7,8 </li><li> Ajuste cuidadosamente las distancias relativas de la configuración LAESI para optimizar el rendimiento de iones LAESI mientras se mantiene el rayo láser, el emisor, y los ejes de orificios en el mismo plano. Por favor, encontrará las instrucciones detalladas en otros lugares. 5 </li><li> Con un microscopio óptico, determinar las dimensiones laterales del cráter de ablación en la muestra. </li><li> Durante tres dimensiones los experimentos de imagen LAESI, realizar la ablación con pulsos individuales y determinar la profundidad de un voxel utilizando, por ejemplo, el modo de z-stack en microscopía óptica. 3 </li></ol> 3. Imagen Molecular y Análisis de Datos En el experimento de imágenes, la muestra de tejido se mueve en el plano focal del láser en las direcciones X e Y, con tamaños de paso mayor o igual a las dimensiones de la mancha de ablación. La resolución espacial es limitada por el enfoque del rayo láser incidente. <ol><li> Seleccione el área de interés en la superficie de la muestra y obtener el (X, Y) las coordenadas de los límites correspondientes. </li><li> Elija un algoritmo de grillado (por ejemplo, la red de adaptación, las imágenes seleccionadas región, rejilla rectangular, espiral, Z escaneo, etc) con el que trama la superficie de la muestra con una selección de tiempo de permanencia en cada píxel en el área a explorar. </li><li> Utilice una etapa de traducción de tres ejes y un software que es capaz de barrido de la muestra de acuerdo a la red predeterminado. </li><li> Calcular el tiempo total requerido para obtener imágenes. </li><li> Desactivar la adquisición de datos de plazo del espectrómetro de masas. Si esto no es posible, establecer el límite de tiempo de adquisición de datos para el valor de imágenes en tiempo calculado. </li><li> Iniciar la fuente de láser en el infrarrojo medio a una tasa de repetición adecuada para producir suficiente relación señal-ruido en el espectro de masas en el tiempo de permanencia en cada píxel para llevar a cabo un experimento LAESI imagen lateral. De imagen molecular en 3D, utilice una velocidad de adquisición de espectro más alta que la tasa de repetición fuente láser de éxito masivo analizar los iones generados en un pulso de láser. Espere a que la señal de arranque para iniciar la secuencia de la ablación. </li><li> Encienda la fuente de electrospray. Asegúrese de que no es solución suficiente para el tiempo total requerido para obtener imágenes. </li><li> Al mismo tiempo iniciar la adquisición de espectros de masa, la ablación por láser infrarrojo medio, y la exploración de la superficie. </li><li> Cuando la carrera de imagen ha terminado, ¡ALTO a la exploración de la superficie, el láser infrarrojo medio, y la adquisición de datos. </li><li> Desactivar la fuente de láser. </li><li> Apague el alto voltaje. </li><li> Apague la bomba de jeringa. </li><li> Ajuste el espectrómetro de masas para el modo STANDBY. </li><li> Apague el sistema electrónico de refrigeración Peltier. </li><li> Cerrar el flujo de gas inerte, si se utiliza. </li><li> Utilice un software para correlacionar las coordenadas absolutas de los píxeles en las imágenes laterales o en el análisis de los voxels en 3D con los espectros correspondientes. </li><li> Trace la intensidad de la señal de iones seleccionados para un m / z valor frente a las coordenadas absolutas de análisis para la obtención de imágenes moleculares lateral y 3D. </li></ol> 4. Resultados representante La figura 2 muestra resultados representativos para algunos tipos de tejidos principales y las modalidades de imagen. El panel A muestra un caso de una sección de tejido animal que ha sido congelado durante el experimento, para evitar la deshidratación. 1 Además, la muestra se encuentra en un entorno de gas nitrógeno seco para evitar los vapores de agua ambiental se condense en la superficie de la muestra. Una sección de la corona de 100 micras de espesor de un cerebro de rata (Rattus norvegicus) fue fotografiada lateralmente con LAESI. Las regiones anatómicas del cerebro (véase la imagen óptica en el panel A) muestra una buena correlación con la imagen molecular obtenido para la PC plasmalógenos (O-33: 3) y / o PE (O-36: 3) con m / z 728,559. El panel B muestra la imagen en 3D LAESI de una planta de Zebra (Aphelandra squarrosa) tejido de la hoja. Debido a que las hojas poseen un mecanismo de defensa natural contra la deshidratación, la muestra podría ser interrogado en el medio ambiente. 3 El obtuvieron imágenes en 3D molecular reveló una variedad de patrones de distribución de metabolitos primarios y secundarios. Entre otros, acacetin con m / z 285,076 se detectó a cuenta de iones mayores en los sectores de color amarillo de la segunda y tercera capa de la parte superior con una distribución homogénea en los demás. Esta distribución de acuerdo con el patrón de la variegación se ve en la imagen óptica. <img src="/files/ftp_upload/2097/2097fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Esquema del sistema LAESI (ES, punta de electrospray emisor, o bien que los orificios de la masa del cono de muestreo espectrómetro, FL, lentes de enfoque, FP, punto focal, P, Peltier etapa de enfriamiento, SA, el disipador de calor). Una porción de las partículas expulsadas durante la mitad de la ablación IR (puntos rojos) se funde con el electrospray para producir gotitas cargadas sembrados con moléculas e iones de la muestra (puntos verdes). Los iones liberados de estas gotas son analizados y registrados por el espectrómetro de masas. <img src="/files/ftp_upload/2097/2097fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Los resultados representativos para el lateral y la imaginación en 3D. ng LAESI con espectrometría de masa (A) El panel superior muestra la óptica de la imagen de un cerebro de rata (Rattus norvegicus) sección coronal y la imagen molecular obtenido para la PC plasmalógenos (O-33: 3) y / o PE (O-36 : 3) con m / z 728,559. La barra de escala blanco corresponde a 1 mm. Adaptado con permiso de (Referencia 1). Copyright 2010 American Chemical Society. (B) La imagen inferior muestra las imágenes en 3D de una hoja de una planta abigarrada Zebra (Aphelandra squarrosa). Acacetin con m / z 285,076 se detectó a cuenta de iones de alta en el sector amarillo de la segunda y tercera capa de la parte superior con una distribución homogénea en los demás. Reproducido con permiso del (Referencia 3). Copyright 2009 Sociedad Americana de Química.

<ol><li>Nemes, P., Woods, A. S., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Imaging+of+Small+Metabolites+and+Lipids+in+Rat+Brain+Tissues+at+Atmospheric-Pressure+by+Laser+Ablation+Electrospray+Ionization+Mass+Spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Imaging of Small Metabolites and Lipids in Rat Brain Tissues at Atmospheric-Pressure by Laser Ablation Electrospray Ionization Mass Spectrometry.</a> Anal Chem. 82, 982-988 (2010).</li>
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<li>Shrestha, B., Vertes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+metabolic+profiling+of+single+cells+by+laser+ablation+electrospray+ionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">In situ metabolic profiling of single cells by laser ablation electrospray ionization mass spectrometry.</a> Anal Chem. 81, 8265-8271 (2009).</li>
<li>Cooks, R. G., Ouyang, Z., Takats, Z., Wiseman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ambient+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Ambient mass spectrometry.</a> Science. 311, 1566-1570 (2006).</li>
</ol>

Diferentes tipos de tejidos presentan un contenido variable de agua y resistencia a la tracción, lo que, a su vez, puede afectar las características de ablación de las muestras. 9 Para mitigar estos efectos, se desea que los protocolos de la fluencia del láser, el manejo de muestras y análisis se revisará cuando se cambia entre principales tipos de tejidos. De celda o de mayor resolución de las investigaciones, a la luz del infrarrojo medio puede ser acoplado a una fibra óptica afilada en lugar de una lente de enfoque. 10 Mediante la colocación de la punta de la fibra en las proximidades de las celdas seleccionadas en un tejido, el análisis LAESI se puede realizar en un nivel de una sola célula. Como una etiqueta sin fuente de iones para la espectrometría de masas de ionización del ambiente, 11 LAESI ha mostrado un gran potencial para la investigación de los procesos bioquímicos en los tejidos. Con los beneficios añadidos de un análisis directo, las imágenes laterales y 3D, LAESI es un nuevo instrumento para la creación de perfiles de bioanálisis, así como aplicaciones de imágenes.

<table><tbody><tr><td>Espectrómetro de masas</td><td>Waters</td><td>Q-TOF Premier</td><td></td></tr><tr><td>Láser de infrarrojo medio</td><td>Opotek Inc. (Carlsbad, CA)</td><td>Vibrant IR</td><td></td></tr></tbody></table>

presión atmosférica de imagen molecular de los tejidos biológicos y biopelículas por laesi espectrometría de masas

Atmospheric-pressure Molecular Imaging of Biological Tissues and Biofilms by LAESI Mass Spectrometry

Métodos de ionización del ambiente en la espectrometría de masas permiten a las investigaciones de análisis que se realiza directamente en un tejido o biofilm bajo nativos-como condiciones experimentales. La ablación con láser de ionización electrospray (LAESI) es un desarrollo, y es especialmente adecuado para la investigación de las muestras que contienen agua. LAESI utiliza un rayo láser en el infrarrojo medio (2,94 m de longitud de onda) para excitar las moléculas de agua de la muestra. Cuando el umbral de fluencia de la ablación es excedido, el material de la muestra es expulsado en forma de partículas y los proyectiles de viajar a decenas de milímetros por encima de la superficie de la muestra. En LAESI, esta pluma de ablación es interceptada por las gotas de gran carga para capturar una fracción de la muestra de material expulsado y convertir sus componentes químicos en iones en fase gaseosa. Un espectrómetro de masas equipados con una interfaz de iones de presión atmosférica de origen se emplea para analizar y registrar la composición de los iones liberados procedentes de la zona sondeado (píxel) de la muestra. Un interrogatorio sistemático a través de una matriz de píxeles abre un camino para la imagen molecular en el modo de análisis de microsonda. Un aspecto único de la imagen de masas LAESI espectrométrica perfiles de profundidad que, en combinación con la imagen lateral, permite en tres dimensiones (3D) de imágenes moleculares. Con las actuales resoluciones de la lateral y la profundidad de ~ 100 ~ micras y 40 micras, respectivamente, imágenes LAESI de espectrometría de masas ayuda a explorar la estructura molecular de los tejidos biológicos. En este documento, se revisan los principales elementos de un sistema de LAESI y proporcionar directrices para un experimento de imágenes exitosa.

La ablación con láser de ionización electrospray (LAESI) es una fuente de iones a presión atmosférica para la espectrometría de masas. En el modo de imagen, una sonda láser en el infrarrojo medio de la distribución de moléculas a través de una sección de tejido o biofilm uno. Esta técnica presenta un nuevo enfoque para los diversos estudios bioanalíticos realizado bajo condiciones experimentales nativos.

Presión atmosférica de Imagen Molecular de los tejidos biológicos y biopelículas por LAESI Espectrometría de Masas

Los métodos de ionización ambiental en espectrometría de masas permiten realizar investigaciones analíticas directamente sobre un tejido o una biopelícula bajo condiciones similares a las nativas...

Con el fin de realizar un experimento de imagen por espectrometría de masas lazy en un tejido biológico o biopelícula, se prepara el montaje lazy para un funcionamiento robusto. El siguiente paso consiste en colocar la muestra sobre la platina y determinar las condiciones experimentales necesarias para la muestra en estudio. A continuación, se inicia el experimento de imagen molecular lazy en sentido lateral y se utilizan los datos requeridos para obtener las distribuciones moleculares espaciales.Los resultados muestran la arquitectura molecular de tejidos biológicos y biopelículas. Soy el Dr. Peter Nemes del Laboratorio de Investigación Vertus en la Universidad George Washington. La principal ventaja de la técnica lazy frente a otros métodos, incluidos los de microscopía confocal, óptica y métodos de imagen por espectrometría de masas como Maldi y sims, es que el análisis de la muestra puede realizarse directamente sobre el tejido en condiciones de presión atmosférica y no es necesario ningún tratamiento de la muestra.Monte directamente las secciones de tejido de interés sobre una superficie plana, como un portaobjetos de vidrio previamente limpiado químicamente y sin modificadores químicos. Fije la muestra inmediatamente a una etapa de enfriamiento Peltier si es necesario, utilizando un disipador de calor equipado con un ventilador de baja potencia para facilitar la eliminación de calor de la etapa Peltier. Luego, si se trabaja en un ambiente húmedo durante un período prolongado de aproximadamente una a dos horas, inspeccione la formación de condensación de agua o hielo sobre la superficie del tejido.La condensación de agua sobre el tejido afecta negativamente el rendimiento de la imagen en experimentos lazy. Si es necesario, utilice un deshumidificador de ambiente o coloque la muestra llamada en una cámara ambiental llena con un gas inerte, como gas nitrógeno seco, para prevenir la condensación. Después de optimizar las condiciones para mantener la muestra, proceda a optimizar la fuente de iones utilizada: la ablación láser, la ionización por electroaspersión, o la fuente de iones lazy, que consiste en un láser de infrarrojo medio, abreviado como mid ir, y una serie de elementos ópticos para la dirección y el enfoque de la luz.El montaje también incluye portamuestras adicionales, componentes de enfriamiento, etapas de traslación y un sistema de electroaspersión. Una porción de la materia particulada expulsada durante la ablación por infrarrojo medio se aglomera con la electroaspersión para producir gotas cargadas que contienen moléculas e iones de la muestra. Los iones liberados de estas gotas son analizados y registrados por el espectrómetro de masas, cuyo orificio se muestra aquí.La configuración lenta se realiza antes de comenzar el experimento. Se requieren ajustes precisos de los parámetros experimentales para adaptar la muestra elegida y optimizar la fuente de iones. Comience colocando la muestra entre 15 y 20 milímetros por debajo del orificio del cono de muestreo del espectrómetro de masas.Funcione el láser de infrarrojo medio a una longitud de onda de 2.94 micrómetros y una frecuencia de repetición de 10 hercios. Atenuar la salida del láser a aproximadamente 100 microjulios por energía de pulso. Utilice una combinación de espejos de oro y una lente focalizadora transparente a la longitud de onda del láser para acoplar la energía luminosa del láser hacia la muestra.En posición de incidencia normal, coloque el eje B del infrarrojo medio, de cinco a ocho milímetros delante de la abertura del cono de muestreo del espectrómetro de masas. Ajuste la posición de la lente de enfoque y la energía del pulso láser para lograr la eliminación de tejido en el punto focal hasta la profundidad deseada. Las dimensiones del volumen ablado.Determine el tamaño del píxel para la aplicación de obtención de imágenes. Coloque un emisor nanospray alineado con el eje de entrada del espectrómetro de masas y a una distancia de aproximadamente 10 milímetros entre la abertura y la punta del emisor. Para el electrospray, prepare una solución de metanol al 50 % con ácido acético al 0,1 % para el modo de iones positivos o acetato de amonio al 0,1 %.Para el modo de iones negativos. La estabilidad del electroespray es crucial para obtener una imagen exitosa. Dependiendo de la selección del disolvente, es necesario ajustar el caudal y el voltaje de pulverización para lograr un aerosol estable.Para aplicaciones reactivas, lentas y de obtención de imágenes, la solución de electroaspersión puede contener reactivos. Utilice una bomba de jeringa para suministrar la solución de electroaspersión a través del emisor de electroaspersión a un caudal de aproximadamente 300 nanolitros por minuto. Si el orificio del espectrómetro de masas se mantiene a un voltaje bajo, por ejemplo, por debajo de unos 500 voltios medidos con respecto a tierra, genere la electroaspersión aplicando un voltaje alto, por ejemplo, 3000 voltios directamente al emisor de electroaspersión o a través de una unión metálica.Funcione la fuente de electroaspersión en modo de pulverización de chorro cónico para una generación de iones más eficiente; ajuste cuidadosamente las distancias relativas del montaje lazy para optimizar el rendimiento de iones, manteniendo al mismo tiempo el haz láser, el emisor y los ejes del orificio en el mismo plano mediante un microscopio óptico. Determine las dimensiones laterales del cráter de ablación en la muestra para experimentos de imágenes tridimensionales lazy. Realice la ablación con pulsos individuales y determine la profundidad de un vóxel utilizando, por ejemplo, el modo de apilamiento en Z en microscopía óptica.Ahora que las condiciones de montaje del tejido y la fuente de ionización están optimizadas, continúe con la imagen molecular en el experimento de imagen. La muestra de tejido se mueve en el plano focal del láser en las direcciones x e y con tamaños de paso mayores o iguales a las dimensiones del punto de ablación. La resolución espacial está limitada por el enfoque del haz láser incidente.Seleccione un área de interés sobre la superficie de la muestra y obtenga las coordenadas XY de los límites correspondientes. Elija un algoritmo de cuadrícula para escanear la superficie de la muestra con un tiempo de permanencia seleccionado en cada píxel sobre el área que se va a imaginar. Utilice una etapa de traslación XYZ y un software capaz de mover la muestra de acuerdo con la cuadrícula predeterminada.Luego, calcule el tiempo total requerido para la adquisición de imágenes. Inicie la fuente de láser de infrarrojo medio a una frecuencia de repetición adecuada para producir una relación señal-ruido suficiente para los iones seleccionados en el espectro de masas dentro del tiempo de permanencia en cada píxel. Para realizar un experimento de imagen lateral lenta, encienda la fuente de electroaspersión.Asegúrese de que hay suficiente solución para el tiempo completo necesario para la obtención de imágenes. Ahora inicie simultáneamente la adquisición de espectros de masas, la ablación con láser de infrarrojo medio y el escaneo de la superficie, y recopile los datos. Cuando finalice la corrida de obtención de imágenes, detenga el escaneo de la superficie, el láser de infrarrojo medio y la adquisición de datos.Desactive la fuente láser, apague el alto voltaje, desconecte la bomba de jeringa y configure el espectrómetro de masas en modo de espera. Además, apague la electrónica de enfriamiento del palt y cierre el flujo de gas inerte. Si se utilizó.Finalmente, represente gráficamente la señal de intensidad iónica para un valor de MZ seleccionado frente a las coordenadas absolutas de análisis para obtener imágenes moleculares laterales o 3D. Estas son imágenes representativas de imágenes laterales por escaneo lento de una sección coronal de 100 micrómetros de grosor de un cerebro de rata. La sección se mantuvo congelada durante el experimento y se conservó en un entorno de gas nitrógeno seco.Las regiones anatómicas del cerebro muestran una buena correlación con la imagen molecular obtenida para dos plasmodios con MZ 2 78 0,59. Este es un experimento de imagen molecular en 3D utilizando tejido foliar de planta cebra analizado en el ambiente, junto con otros metabolitos primarios y secundarios. ASCE con MZ 2 85 0,076 se detectó con recuentos de iones más altos en los sectores amarillos de la segunda y tercera capa desde la parte superior, con una distribución homogénea.En los otros, esta distribución coincidió con el patrón de la variación observada en la imagen óptica. H después de su desarrollo. La técnica perezosa allanó el camino para que los investigadores en el campo de la química analítica y B estudiaran la composición molecular y la organización espacial de tejidos y biopelículas con contenido apreciable de agua.No olvide que trabajar con un láser de infrarrojo medio y una fuente eléctrica de pulverización puede ser extremadamente peligroso. Siempre siga los protocolos estándar de seguridad con láseres y aplique un blindaje adecuado a todas las conexiones eléctricas durante este procedimiento.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Análisis de las células individuales se realiza por espectrometría de masas en las células animales y vegetales a la presión atmosférica mediante el uso de una fibra óptica para afilado de la muestra de las células de ionización electrospray ablación con láser (LAESI) espectrometría de masas.

El análisis directo de las células individuales mediante espectrometría de masas a presión atmosférica

Secundaria ionización electrospray espectrometría de masas (SESI-MS) permite la detección de compuestos orgánicos volátiles (COV), sin necesidad de ningún tratamiento previo de la muestra. Este protocolo proporciona instrucciones para la rápida (en minutos) caracterización de compuestos orgánicos volátiles bacteriana con el SESI-MS.

La caracterización de compuestos volátiles bacteriana secundaria con ionización electrospray espectrometría de masas (SESI-MS)

La desorción de ionización por electrospray espectrometría de masas (DESI-MS) es un método por el cual las muestras ambiente, incluidos los tejidos biológicos, se pueden obtener imágenes con la preparación mínima de la muestra. Por rastering la muestra por debajo de la sonda de ionización, esta técnica de aerosol a base proporciona una resolución espacial suficiente para discernir las características moleculares de interés dentro de las secciones de tejido.

Obtención de imágenes de tejidos biológicos por desorción ionización electrospray espectrometría de masas

Desglose espectroscopia inducida por láser se realiza en órgano fino y tejido del tumor con éxito detectado elementos naturales y gadolinio inyectado artificialmente (Gd), emitidas a partir de nanopartículas a base de D-os. Imágenes de los elementos químicos alcanzaron una resolución de 100 micras y la sensibilidad cuantitativa sub-mM. La compatibilidad de la instalación con el microscopio óptico estándar enfatiza su potencial para proporcionar múltiples imágenes de un mismo tejido biológico.

Inducida por láser Breakdown Spectroscopy: un nuevo enfoque para el mapeo y cuantificación de nanopartículas en tejidos de órganos

Aquí, presentamos protocolos para realizar tanto imágenes de espectrometría de masas ambiental (MSI) de tejidos como análisis in situ de MS de células individuales vivas (SCMS) utilizando la sonda única, que es un dispositivo multifuncional miniaturizado para el análisis de MS.

Aplicaciones de la sonda: Single-Imaging espectrometría de masas y análisis de celda única bajo condiciones ambientales

Se desarrolló una fuente de imágenes de espectrometría de masas (MSI) operada a presión atmosférica mediante el acoplamiento de la desorción láser de infrarrojo medio y la postionización por electrospray. La matriz de hielo exógeno se utilizó como matriz absorbente de energía para facilitar la desorción resonante del material relacionado con los tejidos. Este manuscrito proporciona un protocolo paso a paso para realizar IR-MALDESI MSI en ratones neonatos de cuerpo entero.

Todo el cuerpo de Espectrometría de Masas de imágenes por infrarrojos asistida por matriz de desorción láser de ionización electrospray (IR-MALDESI)

Un protocolo para la caracterización de la composición química de la respiración exhalada en tiempo real mediante el uso de ionización secundaria nanoelectrospray junto a alta resolución, espectrometría de masas se demuestra.

Análisis de la respiración en tiempo real mediante el uso de ionización secundaria Nanoelectrospray acoplada a espectrometría de masas de alta resolución

Este protocolo describe un método reproducible y confiable para la preparación a base de la sublimación de formalina fijada destinado para el spectrometry total de la proyección de imagen del tejido.

Óptima preparación de formol fijada muestras para péptidos basados en matriz asistida por láser de desorción/ionización espectrometría de masas de flujos de trabajo

Un novedoso método de preparación de la muestra fue desarrollado para acomodar el cocultivo de células y tejidos para detectar cambio de molécula pequeña usando spectrometry total de la proyección de imagen.

Molécula pequeña comunicación entre tejidos y células mediante espectrometría de masas en la proyección de imagen de captura

El objetivo de este protocolo es proporcionar una guía detallada sobre la preparación de la muestra al planificar experimentos con MALDI MSI para maximizar la detección metabólica y molecular en muestras biológicas.

Preparación de muestras para perfiles metabólicos utilizando imágenes de espectrometría de masas MALDI

Aprende a realizar imagen molecular de tejidos biológicos y biopelículas mediante espectrometría de masas LAESI a presión atmosférica sin preparación previa de muestras.

Presión atmosférica de Imagen Molecular de los tejidos biológicos y biopelículas por LAESI Espectrometría de Masas

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