Name: Bioensayos para vigilar la resistencia insecticida (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-30T16:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: Aprende a realizar bioensayos para detectar resistencia a insecticidas en plagas de artrópodos mediante análisis de concentración letal LC50. Este método permite evaluar la susceptibilidad y mejorar estrategias de manejo integrado.

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Nos gustaría dar las gracias a Cotton Incorporated Programa de Apoyo Estatal # 08-317MO, USDA / CSREES SR-IPM subvención 2009-34103-20018 y Landis internacional para financiar la investigación relativa a esta publicación.

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<li>Lopez, J. D. Jr, Hoffman, W. C., Latheef, M. A., Fritz, B. K., Martin, D. E., Lan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+toxicity+of+selected+insecticides+against+thrips+on+cotton+in+laboratory+bioassays%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cotton+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of toxicity of selected insecticides against thrips on cotton in laboratory bioassays.</a> J. Cotton Sci. 12, 188-194 (2008).</li>
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<li>Snodgrass, G. L., Scott, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seasonal+changes+in+pyrethroid+resistance+in+tarnished+plant+bug+%28Heteroptera%3A+Miridae%29+populations+during+a+three+year+period+in+the+delta+area+of+Arkansas%2C+Louisiana+and+Mississippi%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Seasonal changes in pyrethroid resistance in tarnished plant bug (Heteroptera: Miridae) populations during a three year period in the delta area of Arkansas, Louisiana and Mississippi.</a> J. Econ. Entomol. 93, 441-446 (2000).</li>
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</ol>

El valor de LC50 se puede utilizar para establecer como línea base de susceptibilidad de una población objetivo (s). El valor de estos datos puede estar en las encuestas de seguimiento futuro o para el propósito inmediato de comparar los resultados actuales con la de un determinado previamente LC 50 para determinar la susceptibilidad de la población objetivo ha cambiado. Real CL 50 valores se pueden comparar entre las poblaciones mediante el examen de los intervalos de confianza del 95%, si los límites superior e inferior no se superponen, entonces es probable que la población ha experimentado un cambio significativo en la susceptibilidad y en algunos casos es una indicación de la resistencia 33. La LC 50 s también se puede utilizar para examinar los cambios estacionales en los insecticidas esusceptibilitye 28, o comparar las respuestas entre las especies o insecticida AI s. Una labor considerable también utilizan estos datos para comparar las respuestas entre hombres y mujeres de 10 o entre los adultos y estados inmaduros, 10,34. A veces, los intervalos de confianza son amplios o no puede ser calculado. Para obtener más estrictos los intervalos de confianza realizar el bioensayo con más insectos y las concentraciones / o más.

<table><tbody><tr><td>Probeta de vidrio de 50-100 ml </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Matraz aforado con tapón (se pueden usar matraces de color ámbar para pesticidas sensibles a la luz, como los piretroides)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Viales de centelleo de vidrio de 20 ml con tapas sin revestimiento</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Un método para colorear los viales (pintura o marcadores)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acetona</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Calentador comercial para perros calientes (elemento calefactor desconectado)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 botellas de lavado (una modificada de modo que la abertura sea grande para una entrega rápida del líquido y otra con abertura pequeña en el pico para una entrega lenta de los líquidos)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Barquilla pequeña para pesar (asegúrese de que todos los materiales plásticos sean resistentes a la acetona)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acceso a una balanza con lectura de 0,001 g o mayor precisión.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm M</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipeta repetidora</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Puntas adecuadas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetas de vidrio que encajen en el matraz aforado.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cámara de flujo laminar (utilizada para eliminar el olor de la acetona)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Un lugar para almacenar soluciones de insecticida y viales [refrigerador (soluciones), cuarto oscuro o congelador, según el producto químico (viales)]</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bioensayos para vigilar la resistencia insecticida

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

Resistencia a las plagas a los plaguicidas es un problema cada vez mayor, porque los plaguicidas son una parte integral de la producción agrícola de alto rendimiento. Cuando pocos productos están etiquetados para cada una plaga dentro de un sistema de cultivo en particular, las opciones de control químico son limitadas. Por lo tanto, el mismo producto (s) se utilizan en repetidas ocasiones y la presión de selección continua se coloca sobre la plaga objetivo. Hay costos financieros y ambientales asociados con el desarrollo de poblaciones resistentes. El costo de la resistencia a los plaguicidas se ha estimado en aproximadamente $ 1.5 mil millones anualmente en los Estados Unidos. En este documento se describen los protocolos utilizados actualmente para controlar artrópodos (insectos, específicamente) la población para el desarrollo de resistencia. La prueba vial adulto se utiliza para medir la toxicidad de los insecticidas de contacto y una modificación de esta prueba se utiliza para las plantas insecticidas sistémicos. En estos bioensayos, los insectos son expuestos a insecticidas de calidad técnica y las respuestas (mortalidad) registrada en un determinado intervalo de post-exposición. Los datos de mortalidad son sometidos a análisis de los registros de dosis probit para generar estimaciones de la concentración letal que proporciona la mortalidad en un 50% (LC 50) de las poblaciones objetivo y una serie de límites de confianza (CL) como las estimaciones de la variabilidad de los datos. Cuando estos datos se recogen para una amplia gama de insecticidas susceptibles poblaciones, el CL 50 se puede utilizar como datos de referencia a efectos de control en el futuro. Después de las poblaciones han estado expuestas a los productos, los resultados pueden ser comparados a un determinado previamente LC 50 con la misma metodología.

Este manuscrito demuestra y discute las técnicas utilizadas para estudiar la susceptibilidad de pesticidas y detectar la resistencia a los pesticidas de contacto y sistémicos en las plagas de artrópodos.

Bioensayos para vigilar la resistencia insecticida

La resistencia de las plagas a los pesticidas es un problema creciente, ya que los pesticidas son una parte integral de la agricultura de producción de alto rendimiento. Cuando pocos productos...

El objetivo general del siguiente experimento es determinar si el insecto ha desarrollado resistencia al insecticida. Esto se logra preparando las concentraciones que se probarán, disolviendo el insecticida técnico en acetona para insecticidas de contacto según lo descrito por Plaid AL en 1987, o en solución acuosa de miel para insecticidas sistémicos según lo descrito por Snores Etol en 2008.Como segundo paso, coloque 0,5 mililitros de la solución insecticida en acetona en un vial de vidrio aislante de 20 mililitros, y gire los viales en un rodillo giratorio comercial con el elemento calefactor apagado o coloque 0,5 mililitros de la solución insecticida en agua con miel sobre un trozo de espuma floral colocado dentro de un vial. A continuación, recoja el insecto deseado para la prueba en vial de adultos con el fin de realizar el bioensayo, que monitorea los resultados de resistencia a insecticidas obtenidos al comparar la CL50 lograda mediante análisis de probit con CL50 preexistentes. Hola, mi nombre es Audra Miller.Soy del Centro de Investigación Delta del Colegio de Agricultura, Alimentos y Recursos Naturales de la Universidad de Missouri en Portageville, Missouri. Realizaré un experimento del laboratorio de entomología de la Dra. Kelly Kindle. Mostraré el procedimiento para detectar si está ocurriendo resistencia a insecticidas o no.Ahora comencemos. Es imprescindible utilizar las precauciones de seguridad adecuadas, como gafas de seguridad, mascarillas y guantes, entre otras. Al manipular insecticidas, consulte la hoja de datos de seguridad del material para conocer el equipo de protección personal recomendado para el pesticida específico que se está probando.Para preparar una solución stock, ajuste según la pureza y pese el insecticida técnico de forma adecuada. En la campana, llene parcialmente un matraz aforado con acetona. Añada el insecticida y enjuague el barquito de pesaje con acetona dentro del matraz.Llene el matraz aforado hasta la línea de graduación con acetona mezclando mediante inversiones sucesivas. Realice diluciones seriadas según sea necesario y codifique con colores los frascos según las concentraciones utilizando pintura o marcadores. Vierta aproximadamente la mitad del volumen correspondiente al número de frascos que se van a preparar en un vaso de precipitados pequeño cuando no se utilice la solución, y cúbralo para minimizar la evaporación.Utilice una pipeta repetidora para dispensar 0,5 mililitros en los viales. Trabaje desde la concentración más baja hasta la más alta, comenzando con el control de acetona únicamente, con el fin de recubrir el interior del vial con el insecticida de grado técnico. Coloque los viales en un rodillo giratorio comercial para salchichas con el calor apagado.Deje que los viales giren hasta que se haya evaporado todo el acetona. Examine cada vial individualmente para asegurar la sequedad. Recolecte los insectos que se van a probar utilizando trampas de feromonas, redes de barrido o cualquier otro medio de captura masiva.Proporcione alimento y humedad a los insectos durante ocho a 24 horas. Seleccione ejemplares sanos y activos para el bioensayo, con 10 a 25 insectos por prueba. Concentración. Coloque los insectos en los viales de manera que queden expuestos a todo el rango de concentraciones, no solo a una concentración a la vez.Después del tiempo de incubación adecuado, evalúe la mortalidad según criterios de movimiento coordinado, como la capacidad de enderezarse cuando se coloca sobre su superficie dorsal o el movimiento coordinado al ser estimulado suavemente. Si el insecto puede enderezarse pero vuelve a caer, no hay movimiento coordinado, por lo que debe considerarse muerto. Registre el número de individuos vivos y muertos y calcule el porcentaje de supervivencia para todas las concentraciones.Prepare viales con el insecticida técnico disuelto en solución acuosa de miel al 10 %. Pese la miel para preparar una solución acuosa de miel al 10 % en volumen, transfiera a un matraz aforado y agregue el insecticida grado técnico a la solución acuosa de miel, enjuagando el barquito de transferencia. Repita el proceso de dilución en cereales, pero utilice solución acuosa de miel en lugar de acetona. Corte un trozo de espuma floral y colóquelo dentro del vial Eloqua.Coloque 0,5 mL de solución sobre la espuma floral que contiene los insectos, tapando con una bola de algodón en lugar de una tapa. Realice el bioensayo de la misma manera que lo haría con insecticidas de contacto, corrigiendo la mortalidad en el control. Según Abbott, determine la concentración letal necesaria para matar al 50 % de una población y los intervalos de confianza al 95 %.Esto puede realizarse utilizando un programa informático como SAS Proc probate o Polo Plus; por ejemplo, en este programa de muestra para SAS, dosis representa la concentración utilizada en el bioensayo. N es el número de individuos probados a una concentración determinada y respuesta es el número de individuos muertos; se encuentra la probabilidad de 0,5 y este es el CL50 con límites de confianza de 0,1891 a 0,3273 microgramos por vial. Si existen datos de línea base para el insecto probado o un CL50 obtenido a partir de una población susceptible conocida, el nuevo CL50 puede compararse con el CL50 de los datos de línea base o de poblaciones susceptibles.Si la lc 50 basal fuera de 0,1487 microgramos por vial con límites de confianza de 0,1167 a 0,1793 microgramos por vial, se podría concluir que hubo un cambio significativo en la resistencia porque los límites de confianza no se superponen. Sin embargo, si la lc 50 basal fuera de 0,1487 microgramos por vial, pero los límites de confianza fueran de 0,0958 a 0,1983 microgramos por vial, no habría un aumento significativo en la resistencia porque los límites de confianza se solapan. Este experimento puede utilizarse para ayudar a determinar si la resistencia a insecticidas es la causa del fracaso del insecticida o no, pero recuerde que al trabajar con insecticidas siempre debe usar el equipo de protección adecuado. Ahora.Gracias por ver el video y mucha suerte con sus experimentos.

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Este vídeo explica los mecanismos de resistencia en las plantas a la herbivoría y demuestra una prueba de no-elección que estima la contribución relativa de antibiosis y tolerancia al salivazo de resistencia...

Caracterización de los mecanismos de resistencia Herbívoro: salivazo en Brachiaria Spp. como ejemplo

En este video, demostramos el ensayo de prueba tópica para determinar la toxicidad de un insecticida potencial en mosquitos hembra adultos. Utilizando un antagonista del receptor de dopamina que causa la inhibición letal de la neurotransmisión en los mosquitos, este método describe una forma de evaluar los efectos tóxicos de los insecticidas tras la aplicación tópica.

Ensayo de prueba tópica: una técnica para evaluar el potencial insecticida de los antagonistas de los receptores de dopamina en mosquitos hembra adultos mediante aplicación tópica

Se presenta un enfoque robusto y flexible para confirmar la resistencia a herbicidas en las poblaciones de malezas. Este protocolo permite inferir los niveles de resistencia a herbicidas y aplicarlos a una amplia gama de especies de malezas y herbicidas con adaptaciones menores.

Los protocolos para pruebas de resistencia a los herbicidas robusta en diferentes especies de malezas

evaluaciones insecticidas a menudo se dirigen a los insectos adultos, en lugar de estadios inmaduros. A continuación, se presenta un protocolo para la evaluación de insecticidas contra los huevos de insectos de la cama con una comparación a la primera etapa de ninfa chinches. Estos protocolos podrían ajustarse para otros insectos para evaluar la eficacia insecticida en etapas de la vida no adultos.

Un método para evaluar la eficacia insecticida contra las chinches,<em&gt; Cimex lectularius</em&gt;, Los huevos y la primera estadios

Arenas de bioensayo de foto-la atracción se utilizan para determinar los colores de luz óptima para maximizar la atracción de insectos; sin embargo pruebas biológicas y los métodos son específicos de hábitat y comportamiento de insectos. Modificaciones y equipo adaptable se explican para insectos nocturnos o diurnos y terrestres o aéreos.

Elementos clave de la prueba biológica de atracción foto insectos estudios o programas de monitoreo

Se describen los protocolos para la evaluación de la toxicidad de los químicos a los mosquitos inmaduros y adultos para el desarrollo como nuevas clases de larvicidas, adulticidas y endectocidas. Los protocolos permiten pruebas de alto rendimiento de múltiples químicos en dosis de un solo punto y posterior evaluación por análisis de respuesta de dosis para determinar toxicidad en contacto o por ingestión.

Protocolos para las pruebas de la toxicidad de la novela química insecticida para mosquitos

Aquí, presentamos un protocolo para producir casa mosca carboxilesterasa proteínas en vitro con un sistema de expresión de baculovirus mediada por células de insectos y caracterizar funcionalmente más adelante su papel en la metabolización de permetrina, de tal modo, que confieren piretroides resistencia mediante la realización de celular MTT análisis y en vitro estudios metabólicos.

Caracterización funcional de carboxilesterasas en casa resistente al insecticida moscas, Musca Domestica

La eficacia de los plaguicidas de salud pública dirigidas a insectos molestos y vectores de la enfermedad no es uniforme a través de diferentes zonas ecológicas. Aquí presentamos un sistema de técnicas utilizando insectos vectores cautivo como centinelas para la eficacia de pesticidas a derivar mapas electrónicos de apoyo a la evaluación estándar de los plaguicidas en múltiples entornos.

Eficacia de pesticidas contra mosquitos vectores de la enfermedad en el campo de visualización

Describimos la metodología e importancia del bioensayo de aplicación tópica para medir la susceptibilidad a insecticidas en mosquitos y moscas de la fruta. El ensayo presentado es de alto rendimiento, utiliza masa de insectos, lo que permite calcular una dosis letal relativizada en masa en lugar de concentración, y probablemente tiene una variabilidad más baja que otros métodos similares.

Bioensayo de aplicación tópica para cuantificar la toxicidad de insecticidas para mosquitos y moscas de la fruta

Este protocolo describe el ensayo de alimentación obligada para evaluar el efecto potencialmente tóxico de un fitoquímico en las larvas de insectos lepidópteros. Este es un bioensayo de insectos altamente escalable, fácil de optimizar la dosis subletal y letal, la actividad disuasoria y el efecto fisiológico. Esto podría usarse para detectar insecticidas ecológicos.

Desarrollo de un sistema de ensayo de alimentación para evaluar el efecto insecticida de los fitoquímicos en Helicoverpa armigera

Este estudio tuvo como objetivo investigar la relación entre el momento de la aplicación del pesticida y la actividad de las abejas, medida mediante bioacústica, en la soja. El análisis mostró que la aplicación de pesticidas, independientemente del momento, no tuvo efecto sobre la actividad de las abejas, la defoliación ni el rendimiento. Sin embargo, la actividad de abejas fue mayor más tarde ese día y durante el pico de floración de la soja.

Evaluación de la repelencia de una combinación de insecticida y fungicida para abejas mediante bioacústica

Aprende a realizar bioensayos para detectar resistencia a insecticidas en plagas de artrópodos mediante análisis de concentración letal LC50. Este método permite evaluar la susceptibilidad y mejorar estrategias de manejo integrado.

Bioensayos para vigilar la resistencia insecticida

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