Name: El mantenimiento de Wolbachia en medio libre de células (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 33 s
Description: Aprenda a purificar Wolbachia pipientis de células de Anopheles gambiae mediante lisis con perlas de vidrio y centrifugación diferencial. Este método permite cultivar la bacteria en medio libre de células y evaluar su viabilidad.

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el mantenimiento de wolbachia en medio libre de células

Maintaining Wolbachia in Cell-free Medium

En este protocolo de vídeo, los procedimientos se demuestra que (1) purificar simbiontes Wolbachia fuera de las células cultivadas de mosquitos, (2) utilizar un ensayo fluorescente para determinar la viabilidad de la Wolbachia purificada y (3) mantener la Wolbachia ahora extracelular en el medio libre de células . Purificada Wolbachia permanecen vivos en la fase extracelular, pero no se replican hasta que re-inoculados en células eucariotas. Wolbachia extracelular purificado de esta manera permanecer viables por lo menos una semana a temperatura ambiente, y posiblemente más. Purificada Wolbachia son adecuados para la microinyección, la extracción de ADN y otras aplicaciones.

Este video describe un método para la purificación de Wolbachia pipientis de una línea celular Anopheles gambiae y el cultivo de la endosimbionte en medio libre de células. Un ensayo de viabilidad de la bacteria se demuestra.

El mantenimiento de Wolbachia en medio libre de células

En este protocolo en vídeo, se demuestran los procedimientos para (1) purificar simbiontes de Wolbachia a partir de cultivos de células de mosquito, (2) utilizar un ensayo fluorescente para ...

Me llamo Courtney Ston. Trabajo en la Escuela de Salud Pública Johns Hopkins Bloomberg, en el laboratorio del Dr. Jason Rascon. Hoy realizaremos la purificación bacteriana a partir de células de insecto cultivadas.En realidad, es un procedimiento muy sencillo. Comenzamos recolectando nuestras células y luego rompemos físicamente las membranas de las células huésped eucariotas mediante lisis con perlas de vidrio. A continuación, utilizamos centrifugación diferencial para separar las bacterias de los restos celulares del huésped.Luego utilizamos una serie de pasos de filtración para eliminar aún más las partículas de células huésped, de modo que al final quede únicamente el pellet bacteriano purificado. Esta es, de hecho, una de las principales exigencias. Es una cabina de cultivo celular y se utiliza para mantener todo estéril porque los cultivos celulares son muy propensos a la contaminación.También necesitamos medio de cultivo celular, las propias células, y las cultivamos en frascos de plástico. También necesitamos perlas de vidrio de tres milímetros, tubos cónicos de 50 ml, y necesitamos una centrífuga capaz de realizar una centrifugación a alta velocidad, aproximadamente 18.000

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Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Wolbachia Infección bacteriana en Drosophila

Cuantitativos y automatizada de alto rendimiento del genoma completo de RNAi pantallas en C. elegans</em

Vampiric Aislamiento de líquido extracelular de<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Este video presenta un método para aislar y cultivar estérilmente células embrionarias de C. elegans  in vitro.

Digestión enzimática y disociación manual: un método para preparar embriones de C. elegans para cultivo celular

C. elegans usualmente se cultivan en placas de agar sólido o en cultivos líquidos sembradas con E. coli. Para evitar subproductos bacterianos de confusión estudios toxicológicos y nutricionales, se utilizó un medio líquido axénicos, CEHR, para crecer y sincronizar un gran número de gusanos para una gama de aplicaciones posteriores.

El cultivo Caenorhabditis elegans En axénico Liquid Media y Creación de transgénicos Worms por bombardeo de micropartículas

Los mosquitos Aedes aegypti infectados con Wolbachia están siendo liberados en las poblaciones naturales para suprimir la transmisión de arbovirus. Se describen métodos para posterior Ae. aegypti con Wolbachia infecciones en el laboratorio para los experimentos y la liberación del campo, tomar precauciones para reducir al mínimo la selección y adaptación de laboratorio.

Mantener los mosquitos Aedes aegypti infectados con Wolbachia

Este protocolo describe cómo establecer infección viral en vivo de Drosophila melanogaster utilizando el método de inyección de nano y técnicas básicas para analizar interacción virus-huésped.

Establecimiento de la infección Viral y análisis de la interacción huésped-Virus en Drosophila Melanogaster

Se utilizaron cuatro métodos para detectar Wolbachia intracelular, que se complementaron entre sí y mejoraron la precisión de detección de la infección por Wolbachia de Aa23 derivada de Aedes albopictus y Aa23-T curada de la infección nativa por Wolbachia utilizando antibióticos.

Detección de Wolbachia Strain wAlbB en líneas celulares de Aedes albopictus

Aquí se presenta un protocolo optimizado para cultivar nematodos individuales aislados en medios sólidos en dispositivos microfabricados de múltiples pocillos. Este enfoque permite que los animales individuales sean monitoreados a lo largo de sus vidas para una variedad de fenotipos relacionados con el envejecimiento y la salud, incluida la actividad, el tamaño y la forma del cuerpo, la geometría del movimiento y la supervivencia.

Cultivo a largo plazo y monitorización de Caenorhabditis elegans aislada en medios sólidos en dispositivos multipocillos

Aquí, presentamos un protocolo para cultivar nematodos individuales aislados en medios sólidos para el seguimiento de parámetros fisiológicos de por vida y la cuantificación de fluorescencia. Este sistema de cultivo incluye una barrera de ácido palmítico alrededor de pozos de un solo gusano para evitar que los animales huyan, lo que permite el uso de intervenciones aversivas, incluidas bacterias patógenas y estresores químicos.

Cultivo a largo plazo de Caenorhabditis elegans individuales en medios sólidos para la monitorización longitudinal de fluorescencia e intervenciones aversivas

Las líneas celulares son útiles en estudios sobre organismos intracelulares que no pueden cultivarse fuera de sus células huésped. Aunque las líneas infectadas por Wolbachia han permitido muchos descubrimientos, la heterogeneidad dentro de estas líneas puede conducir a resultados experimentales variables. Presentamos un protocolo para la generación de clones unicelulares y cultivos continuos a partir de células JW18 infectadas con Wolbachia.

Generación de cultivos monoclonales a partir de la línea celular Drosophila melanogaster JW18 infectada por Wolbachia

Aprenda a purificar Wolbachia pipientis de células de Anopheles gambiae mediante lisis con perlas de vidrio y centrifugación diferencial. Este método permite cultivar la bacteria en medio libre de células y evaluar su viabilidad.

El mantenimiento de Wolbachia en medio libre de células

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