Name: La inducción y la puntuación clínica de enfermedades crónico-recurrente encefalomielitis autoinmune experimental (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-04T00:00:00.000+00:00
Duration: 26 min 48 s
Description: Aprende a inducir y evaluar la encefalomielitis autoinmune experimental crónico-recurrente en ratas DA. Este modelo animal reproduce características clínicas e histológicas de la esclerosis múltiple humana.

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Inducción y control de enfermedades crónico-recurrente de EAE La emulsión es una mezcla de 1:1 de antígeno en solución acuosa añadido a complementarse adyuvante completo de Freund. Es muy importante añadir el antígeno al adyuvante y no al revés! Hay una gran cantidad de residuos y la hora de hacer la inyección de una emulsión. Siempre prepare 1,5 o 2 veces más de lo que usted necesita. El uso de mortero en autoclave, maja, jeringas de vidrio, y los puentes. Todos los plásticos deben ser estériles. La preparación se puede hacer en una mesa de laboratorio periódicas. 1. Preparación de la coadyuvante complementado Pesar 30 mg de Mycobacterium tuberculosis (Difco Catálogo # 231141) y ponerlo en un mortero. Convertirlo en polvo fino, sin presionar demasiado para no romper las bacterias. Añadir 10 ml de adyuvante completo de Freund H37Ra (Difco Catálogo # 231131) y mezclar. Este adyuvante complementado ahora contiene 4 mg / ml de Mycobacterium tuberculosis. Transferir a un tubo. 2. Preparación del homogenado de médula espinal Recoger la médula espinal de ratas DA (edad / sexo no importa) y almacenar congelados a -80 ° C. Pesar la médula espinal congelados para tener suficiente para mezclar 1:1 (peso: volumen) con el adyuvante complementado. Picar la médula espinal tan fina como sea posible con una hoja de afeitar, la transferencia del mortero utilizado en la sección 1, y hacer una pasta con la mano del mortero. 3. Preparación de la emulsión <ol><li> Lugar complementado adyuvante completo de Freund en un tubo. Vortex a alta velocidad. Añadir la caída de la médula espinal homogenado a gota y agitación. Cuando todos los homogeneizado de la médula espinal, se añade, vortex por 5 minutos más. La mezcla se debe a su vez de color rosa claro. </li><li> Ponga la emulsión en una jeringa de 5 ml de vidrio y vincularlo a otra jeringa de vidrio de 5 ml con un puente 18G (catálogo Fisher º 14-825-17L). Enviar la emulsión con una jeringa a otra hasta que se vuelve difícil (5-10 min). Si hay más de 5 ml de la emulsión se prepara, use varias jeringas de 5 ml NO utilice jeringas más grandes. </li><li> La emulsión puede ser almacenada en las jeringas a 4 ° C durante 3 semanas. Recomiendo la preparación de por lo menos 12 horas de anticipación para verificar que no se descompone. Debe permanecer espesa y no por separado en dos fases. El color va a cambiar durante la noche para una luz de color amarillo o beige. </li></ol> 4. La inmunización de las ratas <ol><li> Mezcla de la emulsión en las jeringas durante unos minutos y traslado a la jeringa utilizada para la inyección. Inyectar 200 l por vía subcutánea en la base misma de la cola el uso de agujas 23G y jeringas de 3 ml Luer-Lock a corto plazo con la anestesia. </li><li> Los beneficiarios son las 7-9 semanas de edad las ratas hembras DA. Tenemos nuestras ratas de Harlan Sprague Dawley. </li><li> Las ratas deben ser observadas dos veces al día y pesados ​​diariamente. Los signos clínicos se espera 7-15 días después de la inyección de la emulsión. </li></ol> Puntuación clínica: 0: sin enfermedad 0.5: cojera cola distal 1: la cola cojera 2: paraparesia leve, ataxia 3: paraparesia moderada, los viajes de las ratas de vez en cuando 3.5: una pata trasera está paralizado, el otro se mueve 4: parálisis completa las extremidades posteriores 5: parálisis completa las extremidades posteriores y la incontinencia 6: respiración moribunda, la dificultad, no comer ni beber. La eutanasia de inmediato.

CB y KGC son co-fundadores y asesores de Airmid Inc.

Hay algunas consideraciones importantes para este protocolo. La genética de las ratas DA variará ligeramente dependiendo del criador que se compran. Estas diferencias pueden aumentar o disminuir la susceptibilidad de las ratas de EAE la inducción. Si su ratas son más susceptibles a la EAE tendrá que reducir la fuerza de la vacunación mediante el uso sin suplemento completo de Freund adyuvante o neoadyuvante aunque incompleto de Freund. También puede considerar la reducción de la cantidad de emulsión inyecta o diluir el homogeneizado...

<table><tbody><tr><td>Adyuvante completo de Freund&amp;rsquo;s</td><td>Reactivo</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF 311-360-5</td><td>Producido por Difco</td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis H37Ra</td><td>Reactivo</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF3114-33-8</td><td>Producido por Difco</td></tr><tr><td>Rata DA</td><td>Animal</td><td>Harlan Laboratories</td><td></td><td>Hembras, 7-9 semanas de edad.</td></tr><tr><td>Jeringas de vidrio - 5 ml</td><td>Herramienta</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-823-10 B</td><td></td></tr><tr><td>Puente metálico - 18G</td><td>Herramienta</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-825-17L</td><td></td></tr><tr><td>Jeringas plásticas Luer Lok - 3 ml</td><td>Herramienta</td><td>BD Biosciences</td><td>309585</td><td></td></tr><tr><td>Agujas - 20G 1 1/2</td><td>Herramienta</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5C</td><td></td></tr></tbody></table>

la inducción y la puntuación clínica de enfermedades crónico-recurrente encefalomielitis autoinmune experimental

Induction and Clinical Scoring of Chronic-Relapsing Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad inflamatoria crónica del sistema nervioso central (SNC) que afecta comúnmente a los adultos jóvenes. Se caracteriza por la desmielinización y cicatrización glial en zonas diseminadas en el cerebro y la médula espinal. Estas lesiones alteran la conducción nerviosa e inducir el déficit neurológica incapacitante, que varían con la ubicación de las placas de mielina en el SNC (por ejemplo, paraparesia, parálisis, ceguera, incontinencia). La encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) es un modelo para la EM. EAE se les indujo accidentalmente en los seres humanos durante la vacunación contra la rabia, a partir de virus cultivados en la médula espinal de conejo. Los residuos de inyección espinal con el virus inactivado induce la enfermedad del SNC. A raíz de estas observaciones, un primer modelo de EAE se ha descrito en primates no humanos inmunizados con un homogeneizado de SNC por los ríos y Schwenther en 1935. EAE ha sido generada en una variedad de especies y pueden seguir diferentes cursos en función de la especie / variedad y la inmunización de antígeno utilizado. Por ejemplo, la inmunización de ratas Lewis con la proteína básica de mielina en emulsión con adyuvante induce un modelo de EAE aguda, mientras que el mismo antígeno induce una enfermedad crónica en los conejillos de indias. El modelo de EAE se describe aquí es inducida por la inmunización de ratas DA contra la médula espinal de ratas DA en emulsión en adyuvante completo de Freund. Ratas desarrollan una parálisis flácida ascendente dentro de 7-14 días después de la inmunización. Los signos clínicos siguen un curso remitente-recurrente durante varias semanas. Patología muestra gran infiltrado inmune en el SNC y las placas de desmielinización. Consideraciones especiales para el cuidado de los animales con EAE se describen al final del vídeo.

Este video muestra la puntuación de inducción y clínicas de un modelo animal de esclerosis múltiple: las enfermedades crónico-recidivante la encefalomielitis autoinmune experimental en ratas DA. La enfermedad, inducida por la inmunización de ratas con una emulsión que contiene la médula espinal de ratas y toda adyuvante completo de Freund, presenta un cuadro clínico parecido a la enfermedad humana.

La inducción y la puntuación clínica de enfermedades crónico-recurrente encefalomielitis autoinmune experimental

La esclerosis múltiple (EM) es una enfermedad inflamatoria crónica del sistema nervioso central (SNC) que afecta comúnmente a adultos jóvenes. Se caracteriza por...

Soy Christine Beaton. Soy investigadora asistente en el laboratorio de George Chen, en el Departamento de Fisiología y Biofísica de la Universidad de California en Irvine. Y lo que voy a mostrarles en los próximos días es cómo inducir y monitorear la EAE crónica recidivante, que significa encefalomielitis autoinmune experimental en ratas DA.Este es un modelo animal para la esclerosis múltiple, o debería decir, uno de los modelos animales para la esclerosis múltiple. Se caracteriza por una parálisis flácida ascendente en esos animales y por características histológicas que se asemejan a la enfermedad humana. Por lo tanto, este procedimiento llevará varios días.Así que el primer día voy a mostrarle cómo preparar la emulsión genética con homogenado de médula espinal roja ingenua en adyuvante completo de Freund. El segundo día, voy a mostrarle cómo inmunizar las ratas contra la EAE, y luego vamos a esperar entre siete y 15 días para observar los primeros signos clínicos en esos animales, momento en el cual le mostraré las diferentes etapas de progresión de la EAE en distintos animales. Primero, voy a mostrarle todos los reactivos y materiales necesarios para preparar la emulsión.Lo que

induction-clinical-scoring-chronic-relapsing-experimental-autoimmune

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

En este video se demuestra la forma de aislar las células mononucleares del sistema nervioso central de ratones con encefalomielitis autoinmune experimental.

Aislamiento de células mononucleares de la del sistema nervioso central de ratas con EAE

El video demuestra la inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón mediante la inyección de una combinación de glicoproteínas de oligodendrocitos de mielina y Mycobacterium tuberculosis inactivada. El modelo permite a los investigadores estudiar los mecanismos de la enfermedad y probar intervenciones terapéuticas.

Inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón

En este video, se establece un modelo de ratón de esclerosis múltiple utilizando encefalomielitis autoinmune experimental (EAE). Al ratón se le inyecta una emulsión que contiene un péptido neuronal y un adyuvante, lo que desencadena una respuesta inmunitaria que activa las células T autorreactivas. A esto le sigue una inyección de toxina pertussis (PTX) para aumentar la permeabilidad de la barrera hematoencefálica, lo que permite que las células T autorreactivas se infiltren en el cerebro. Esta...

Este manuscrito describe los métodos para la inducción y puntuación del modelo experimental de encefalomielitis autoinmune (EAE), junto con la evaluación de la distribución de células inmunitarias y los niveles de citocinas de ARNm en ganglios linfáticos, bazo, sangre y médula espinal mediante citometría de flujo y PCR cuantitativa, respectivamente, en varias fases de la enfermedad.

La inducción de la encefalomielitis autoinmune experimental en ratones y evaluación de la distribución de la enfermedad dependiente de las células inmunes en diversos tejidos

Aquí, presentamos los protocolos para investigar el deterioro de la unidad neurovascular durante la encefalomielitis autoinmune experimental en vivo. Específicamente abordamos cómo determinar permeabilidad de la barrera blood - brain y gelatinasa actividad involucrada en la migración de leucocitos a través de la glía INCURVATA4.

Visualizar el deterioro de las barreras endoteliales y Glial de la unidad Neurovascular durante la encefalomielitis Autoinmune Experimental In Vivo

Este manuscrito presenta un protocolo para inducir la encefalomielitis autoinmune experimental activa (EAE) en ratones. También se presenta un método para el aislamiento y caracterización de los linfocitos infiltrados en el sistema nervioso central (SNC) para mostrar cómo los linfocitos participan en el desarrollo de la enfermedad autoinmune del SNC.

Análisis citométrico de flujo de infiltración de linfocitos en el sistema nervioso central durante la encefalomielitis autoinmune experimental

El presente protocolo describe la inducción de encefalomielitis autoinmune experimental en un modelo de ratón utilizando glicoproteína oligodendrocitos de mielina y monitoreando el proceso de la enfermedad utilizando un sistema de puntuación clínica. Los síntomas experimentales relacionados con la encefalomielitis autoinmune se analizan mediante análisis de tomografía microcomputarizada de fémur de ratón y prueba de campo abierto para evaluar el proceso de la enfermedad de manera integral.

Inducción y diversos indicadores de evaluación de la encefalomielitis autoinmune experimental

La encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) sirve como modelo animal de esclerosis múltiple. En este artículo se describe un enfoque para la puntuación de la inflamación, desmielinización y lesión axonal de la médula espinal en EAE. Además, se presenta un método para cuantificar los niveles de luz de neurofilamentos solubles en el suero de ratones, lo que facilita la evaluación de la lesión axonal en ratones vivos.

Puntuación de la inflamación del sistema nervioso central, la desmielinización y la lesión axonal en la encefalomielitis autoinmune experimental

La encefalomielitis autoinmune experimental es uno de los modelos murinos de esclerosis múltiple más utilizados. En el protocolo actual, los ratones C57BL/6J de ambos sexos son inmunizados con el péptido glicoproteico de los oligodendrocitos de mielina, lo que resulta principalmente en paresia ascendente de la cola y las extremidades. Aquí discutimos el protocolo de inducción y evaluación de EAE.

Modelización de la esclerosis múltiple en los dos sexos: encefalomielitis autoinmune experimental inducida por MOG35-55

La encefalomielitis autoinmune experimental (EAE) es un modelo animal de esclerosis múltiple (EM), que comparte con la enfermedad humana una respuesta autoinmune humoral robusta. En este trabajo presentamos un protocolo ELISA sencillo y flexible para cuantificar autoanticuerpos en el suero de ratones inmunizados con EAE.

Cuantificación de anticuerpos autorreactivos en ratones tras encefalomielitis autoinmune experimental

Aprende a inducir y evaluar la encefalomielitis autoinmune experimental crónico-recurrente en ratas DA. Este modelo animal reproduce características clínicas e histológicas de la esclerosis múltiple humana.

La inducción y la puntuación clínica de enfermedades crónico-recurrente encefalomielitis autoinmune experimental

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