Name: Los cambios en la morfología de la glándula mamaria y el riesgo de cáncer de mama en ratas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-16T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: Aprende a disecar y preparar montajes completos de glándula mamaria en ratas para analizar la morfología y predecir el riesgo de cáncer de mama. Este método evalúa elongación epitelial, yemas terminales y diferenciación.

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Instituto Nacional del Cáncer (U54 CA00100970), Instituto Nacional del Cáncer (1 R03 CA150040-01), ACS (116602-PF-09-018-01-CNE)

1. Extirpación de la glándula mamaria abdominal y Preparación de un monte se <ol><li> La eutanasia de los animales de acuerdo con las directrices IACUC. Pin del animal en la espalda de sus piernas con las agujas, o la cinta de las piernas sobre el tablero de la superficie, y limpie la piel húmeda con etanol (EtOH). Levante la piel un poco con pinzas y con unas tijeras afiladas hacer una incisión en la piel partida entre los dos pezones # 5 y cortar hacia el cuello. Hacer una incisión en Y invertida de la línea media hacia las patas traseras. Si torácica glándulas mamarias son también para ser recogidos, hacer también una incisión Y de la línea media entre el par # 2 pezones hacia las patas delanteras. </li><li> Disección de la piel con una tijera abierta en un lado de la incisión en Y invertida para exponer la glándula mamaria abdominal # 4; las glándulas mamarias se adhiere a la piel. Pin de la piel con agujas en el tablero de la superficie, para exponer completamente la glándula. El trabajo de un lado y de la glándula en el momento. </li><li> Disecar la glándula mamaria, libre de la piel, ya sea usando unas tijeras afiladas y / o un bisturí, a partir de la zona proximal cerca del pezón y de trabajo hacia el extremo distal de la glándula hacia la espina dorsal del animal. (Esto puede tardar varios minutos, especialmente en una rata más.) </li><li> Inmediatamente se extendió la glándula separado en un portaobjetos de vidrio debidamente etiquetados (usar un lápiz adecuado marcador permanente y / o "una pluma de diamantes"), y la propagación de la glándula cuidado correspondiente a su tamaño y forma original in situ. La lámina de vidrio debe ser mayor que la glándula. Después de la difusión de la glándula en la diapositiva, dejar que repose en la mesa por un rato, para que la glándula se pega en la diapositiva, pero no deje que se seque. </li><li> Poner la diapositiva en un frasco que contiene el fijador de Carnoy (75% de ácido acético glacial, 25% de etanol absoluto = EtOH), dejar que se fija a la temperatura ambiente (TA) en la campana extractora de humos de 2 días o más. Diapositivas también se pueden dejar en el fijador durante un largo periodo de tiempo. </li><li> Se lavan los portas en un 70% EtOH durante 1 hora a temperatura ambiente. </li><li> Enjuague con agua destilada durante 30 min a temperatura ambiente. </li><li> Mancha en Alum Carmine mancha *) durante 2 días o más (hasta que vea que los ganglios linfáticos se han manchado a través, buscar en la parte posterior de la diapositiva). </li><li> De lavado en serie creciente de EtOH, 1 hora en cada uno: 70% -&gt; 95% -&gt; 100%. Después del último lavado en EtOH absoluto puesto que las glándulas en xileno. Deje reposar en la campana extractora de humos en RT por lo menos durante 2 días. Este último paso es la limpieza de la delipidación glándula mamaria significado de la almohadilla de grasa mamaria, y el consiguiente aumento de la transparencia. El más grasa de la glándula es el mayor tiempo de limpieza es necesaria. </li><li> Montar con cubreobjetos utilizando un medio de montaje, como Permount. Deje secar bien las diapositivas (varios días) antes de observar bajo un microscopio estereoscópico. * Alum Carmine manchas: Coloque 1 g de carmín (Sigma C1022) y 2,5 g de aluminio sulfato de potasio (Sigma A7167) en 500 ml de agua destilada y hervir durante 20 minutos. Ajustar el volumen final de 500 ml con agua. Filtro y el refrigerador. Solución puede ser utilizada por varios meses. Desechar cuando el color se debilita. </li></ol> 2. Análisis de la morfología de la glándula mamaria monte entero Toda la glándula mamaria se monta la morfología se analiza de acuerdo a los siguientes criterios de valoración y los resultados correlacionados con el riesgo de cáncer de mama. <ol><li> Glándula mamaria todo el montaje en el PND 21 (pre-púberes edad): <ul><li> Crecimiento epitelial: <ul><li> Distancia desde el pezón hasta el final del árbol epiteliales (en milímetros), medido con una regla </li></ul></li><li> Potencial de transformación maligna: <ul><li> Número de TEBS (yemas terminales final), se contaron bajo un microscopio de luz. TEBS son las mayores estructuras de bulbo situado a tan sólo en el extremo distal del árbol epiteliales mamarias </li></ul></li><li> Diferenciación: <ul><li> AB1 (alveolar yema) puntuación (0-5). Brotes alveolares se propagan a través del epitelio. </li><li> AB2 puntuación (0-5) </li></ul></li></ul> Montajes conjuntos se anotó con un microscopio óptico. El valor de la puntuación de AB1 y AB2 se añaden a una puntuación final de la diferenciación. </li><li> Glándula mamaria todo el montaje recogidos en PND 50 (post-puberal edad): <ul><li> Crecimiento epitelial: <ul><li> Distancia desde el ganglio linfático hasta el final del árbol epiteliales (en milímetros), medido con una regla. </li><li> Distancia desde la punta del árbol del epitelio hasta el final de la almohadilla de grasa, medido con una regla. </li></ul></li><li> Potencial de transformación maligna: <ul><li> Número de TEBS, contados bajo un microscopio de luz </li></ul></li><li> Diferenciación: <ul><li> AB1 puntuación (0-5) </li><li> AB2 puntuación (0-5) </li><li> Lóbulos puntuación (0-5) </li></ul></li></ul> Montajes conjuntos se anotó con un microscopio óptico. La diferenciación se evalúa de dos maneras. En primer lugar, las puntuaciones de AB1, AB2 y lobulillos se añaden a una puntuación final de la diferenciación. Además, la relación entre la puntuación de los lobulillos y los resultados AB1 + AB2 será calculada. ABs diferenciar a los lóbulos, y la mayor es la relación entre los lobulillos y los abdominales, el más diferenciado de la glándula. </li></ol> 3. Palpación y valoración del tumor de mama en ratas y la correlación con morfología de la glándula mamaria <ol><li> Para iniciar este procedimiento, mantenga la rata, sujetando el cuerpo con la palma de la mano sobre la espalda, con el dedo índice detrás de la cabeza y el pulgar y el segundo bajo la axila opuesta. A su vez la rata por lo que está mintiendo en su posterior, y palpar para detectar tumores de mama, los tumores palpables debe sentirse como un "bulto". </li><li> Luego, use una pinza para medir la anchura, longitud y altura del tumor. Calcular el volumen del tumor utilizando la fórmula del elipsoide de volumen, = 1/6πabc, donde 'a' = anchura, la longitud 'b' = y 'c' = altura. </li><li> Manual de registro de la ubicación y el tamaño del tumor en un cuaderno sobre una base semanal. Estos datos serán transferidos a una hoja de cálculo más tarde. </li></ol> 4. Resultados representante Disección cuidadosa de la almohadilla de grasa mamaria y su procesamiento para wholemount permitirá evaluar el estado de desarrollo de la glándula mamaria. Cuando cada paso se realiza correctamente, el conjunto de árboles epiteliales mamarias es claramente visible en la almohadilla de grasa, lo que permite determinar fácilmente el número de TEBS y el cálculo de la densidad de brotes alveolares y lobulillos. Errores en la preparación de wholemounts pueden incluir falta de analizar toda la almohadilla de grasa, la fijación insuficiente, y la limpieza inadecuada. Evaluación de la morfología de la glándula mamaria proporcionará información sobre el número de las actuales estructuras que pueden dar lugar a tumores de mama (TEBS), grado de diferenciación de las estructuras epiteliales (brotes alveolares y lóbulos), y la medida del crecimiento (alargamiento ductal). Es importante separar TEBS a los fines de terminales, este último se encuentra en el extremo distal del epitelio, de manera similar a TEBS, pero son más pequeños que TEBS y no dan lugar a tumores malignos. Extremos terminales también se ven en el árbol del epitelio. <img src="/files/ftp_upload/2260/2260fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1:. Representante de resultado bien preparado montar toda la glándula mamaria Todos los componentes de la glándula han sido debidamente disecados y manchas de carmín es óptima. <img src="/files/ftp_upload/2260/2260fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2:. Representante resultado de un mal preparados montar toda la glándula mamaria La glándula ha sido debidamente disecada (la porción distal de la glándula no se encuentra), no se ha estirado bien y delipidación no se ha producido por completo.

<ol><li>Rasmussen, S. B., Young, L. J. T., Smith, G. H. Preparing mammary gland whole mounts form mice. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRasmussen%2C+SB+%22Methods+in+Mammary+Gland+Biology+and+Breast+Cancer+Research%22">Methods in Mammary Gland Biology and Breast Cancer Research</a>. Ip, M. M., Asch, B. B. , Kluwer Academic / Plenum Publishers. New York. 75-85 (2000).</li>
<li>Consensus statements from Mammary Gland Whole Mount Round Robin meeting. Oakland, CA, , (2009).</li>
<li>Hilakivi-Clarke, L., Clarke, R., Onojafe, I., Raygada, M., Cho, E., &amp, L. ippman, E, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+maternal+diet+high+in+n-6+polyunsaturated+fats+alters+mammary+gland+development%2C+puberty+onset%2C+and+breast+cancer+risk+among+female+rat+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">A maternal diet high in n-6 polyunsaturated fats alters mammary gland development, puberty onset, and breast cancer risk among female rat offspring.</a> Proc Natl Acad Sci. 94, 9372-9377 (1997).</li>
<li>Russo, I. H., Russo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammary+gland+neoplasia+in+long-term+rodent+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Mammary gland neoplasia in long-term rodent studies.</a> Environ. Health Perspect. 104 (9), 938-967 (1996).</li>
<li>Hilakivi-Clarke, L., de Assis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+origins+of+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22TRENDS+in+Endocrinol+and+Metabol%22%5BJournal%5D)">Fetal origins of breast cancer.</a> TRENDS in Endocrinol and Metabol. 17 (9), 340-348 (2006).</li>
<li>Hilakivi-Clarke, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutritional+modulation+of+terminal+end+buds%3A+its+relevance+to+breast+cancer+prevention%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Cancer+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Nutritional modulation of terminal end buds: its relevance to breast cancer prevention.</a> Curr Cancer Drug Targets. 7 (4), 465-474 (2007).</li>
<li>Silva Idos, S., De Stavola, B., Mccormack, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Collaborative+Group+On+Pre-Natal+Risk+Factors+And+Subsequent+Risk+Of+Breast+Cancer.+Birth+size+and+breast+cancer+risk%3A+re-analysis+of+individual+participant+data+from+32+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+Medicine%22%5BJournal%5D)">Collaborative Group On Pre-Natal Risk Factors And Subsequent Risk Of Breast Cancer. Birth size and breast cancer risk: re-analysis of individual participant data from 32 studies.</a> PloS Medicine. 5, e193-e193 (2008).</li>
<li>Warri, A., Saarinen, N. M., Makela, S., Hilakivi-Clarke, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+early+life+genistein+exposures+in+modifying+breast+cancer+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">The role of early life genistein exposures in modifying breast cancer risk.</a> Br J Cancer. 98, 1485-1493 (2008).</li>
<li>Russo, J., Hu, Y. F., Yang, X., Russo, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental%2C+cellular%2C+and+molecular+basis+of+human+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Natl+Cancer+Inst+Monogr%22%5BJournal%5D)">Developmental, cellular, and molecular basis of human breast cancer.</a> J Natl Cancer Inst Monogr. , 17-37 (2000).</li>
<li>Oza, A. M., Boyd, N. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammographic+parenchymal+patterns%3A+A+marker+of+breast+cancer+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Epidemiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Mammographic parenchymal patterns: A marker of breast cancer risk.</a> Epidemiological Reviews. 15, 196-208 (1993).</li>
</ol>

Evaluación de la glándula mamaria morfológicas puntos finales y el crecimiento del árbol epiteliales se puede utilizar para predecir si las manipulaciones tempranas de la vida la dieta, u otras manipulaciones que alteran el medio ambiente en el útero o prepuberal hormonal, modificar el riesgo de cáncer de mama más tarde. Dado que el cáncer de mama en humanos se inicia en las estructuras mamarias (unidades de terminal ductal lobular, TDLUs), similar a TEBS en ratas, esta técnica se puede utilizar para determinar el potencial de las exposiciones de la primera infancia para afectar el riesgo de cáncer de mama. Además, en las mujeres la densidad mamográfica de alta aumenta el riesgo de cáncer de mama por 4-6 veces, y la evaluación del crecimiento de árboles epiteliales mamarias se puede utilizar para identificar los factores que determinan la densidad mamográfica y los factores que reducen la densidad. Para obtener esta información, la glándula mamaria debe estar completamente disecados, bien tirante en un portaobjetos de vidrio de modo que todos sus componentes pueden ser visualizados con un microscopio. Además, adecuada coloración carmín y delipidación en xileno proporcionará toda monta que son adecuados para la evaluación del riesgo de cáncer de mama.

<table><tbody><tr><td>Ácido acético glacial</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>AX0073-9</td><td>Carnoy&amp;rsquo;s Fixative</td></tr><tr><td>Etileno absoluto</td><td>The Waner-Graham Co.</td><td>64-17-5</td><td>Carnoy&amp;rsquo;s Fixative</td></tr><tr><td>Carmín</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1022</td><td>Solución de carmín</td></tr><tr><td>Sulfato de aluminio y potasio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7167</td><td>Solución de carmín</td></tr></tbody></table>

los cambios en la morfología de la glándula mamaria y el riesgo de cáncer de mama en ratas

Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

Los estudios en modelos de roedores de cáncer de mama muestran que la exposición a factores de la dieta / hormonal durante el período en el útero y la pubertad, cuando la glándula mamaria sufre de modelado amplia y re-modelado, alterar la susceptibilidad a carcinógenos inducida por tumores mamarios. Hallazgos similares han sido descritos en los seres humanos: por ejemplo, peso al nacer aumenta más alto riesgo de desarrollar cáncer de mama y la ingesta de soja durante la infancia reduce el riesgo de cáncer de mama. Se cree que estas modificaciones en la dieta prenatal y postnatal persistente inducir cambios morfológicos en la glándula mamaria que, a su vez modificar el riesgo de cáncer de mama en el futuro. Estos cambios morfológicos probablemente se deben a modificaciones epigenéticas, como los cambios en la metilación del ADN, histonas y la expresión de miRNA que luego afectan la transcripción de genes. En este artículo se describe cómo los cambios en la morfología de la glándula mamaria puede predecir el riesgo de cáncer de mama en ratas. El protocolo se describe específicamente cómo analizar y eliminar las ratas de la glándula mamaria abdominal y la forma de preparar montajes de la glándula mamaria completa. También se describe la forma de analizar la morfología de la glándula mamaria de acuerdo con tres puntos finales (número de yemas terminales de final, la elongación y la diferenciación del epitelio) y utilizar los datos para predecir el riesgo de desarrollar cáncer mamario.

El protocolo describe cómo diseccionar la rata de las glándulas mamarias abdominales y la forma de preparar montajes de la glándula mamaria completa. También se describe la forma de analizar la morfología de la glándula mamaria con tres puntos finales (número de yemas terminales de final, la elongación y la diferenciación del epitelio) y utilizar estos resultados para predecir el riesgo de cáncer de mama en ratas que fueron expuestas a modificaciones en la dieta<em&gt; En el útero</em&gt; O durante la prepubertad.

Los cambios en la morfología de la glándula mamaria y el riesgo de cáncer de mama en ratas

Los estudios en modelos de roedores con cáncer de mama muestran que las exposiciones a factores dietéticos u hormonales durante los periodos in utero y puberal, cuando la glándula mamaria...

El objetivo general de este procedimiento es mostrar cómo diseccionar y preparar una montura completa de glándula mamaria y analizar su morfología para predecir el riesgo de cáncer de mama. Esto se logra primero mediante la disección de una glándula mamaria abdominal de rata, y luego preparando una montura completa de glándula mamaria a partir de la glándula diseccionada. El siguiente paso consiste en analizar la glándula mamaria.La morfología se hace visible en los montajes con orificio. El paso final del procedimiento consiste en palpar una rata para detectar un tumor de memoria y medir el volumen del tumor en milímetros. Mediante el uso de un calibrador, se pueden obtener resultados definitivos que muestran cambios en la morfología de la glándula de memoria mediante la identificación de las estructuras en la memoria, los montajes caseros y el recuento o puntuación de sus cantidades bajo un microscopio.Este método puede ayudar a responder preguntas clave sobre exposiciones tempranas en la vida y el cáncer de mama, como la forma en que las exposiciones dietéticas o ambientales durante el desarrollo pueden afectar la diferenciación del epitelio mamario y, por ende, el riesgo de cáncer de mama en etapas posteriores de la vida. Las implicaciones de esta técnica se extienden también a la prevención del cáncer de mama. Por ejemplo, podemos estudiar exposiciones ambientales y dietéticas durante el desarrollo y observar los cambios en la glándula mamaria, así como determinar si están relacionados con un riesgo aumentado o disminuido de cáncer de mama.La demostración del procedimiento de palpación tumoral estará a cargo de Idli Cruz, técnica animal y gerente de recursos compartidos de animales. Para comenzar el procedimiento de extracción de la glándula mamaria, primero fije el animal sacrificado sobre la tabla de superficie en posición dorsal mediante agujas colocadas en sus patas. Luego humedezca la piel con etanol.Levante ligeramente la piel con pinzas y tijeras finas. Realice una incisión media en la piel, comenzando entre los pezones número cinco y corte hacia el cuello. A continuación, haga una incisión en forma de Y invertida desde la línea media hacia las patas traseras.Corte la piel con tijeras a un lado de la incisión en forma de Y invertida para exponer la glándula de memoria abdominal número cuatro, que está adherida a la piel. Fije la piel sobre la superficie del tablero con agujas para exponer completamente la glándula. A continuación, use tijeras afiladas para separar la glándula de memoria de la piel.Comience desde la zona proximal cercana al pezón y avance hacia el extremo distal de la glándula, en dirección a la columna vertebral del animal. Una vez que la glándula mamaria esté separada, extiéndala inmediatamente sobre un portaobjetos para la preparación de una preparación en montaje completo. El portaobjetos debe ser más grande que la glándula y estar etiquetado adecuadamente con un marcador permanente o un lápiz de diamante; extienda cuidadosamente la glándula conservando su tamaño y forma originales en C dos.Después de extender la glándula sobre el portaobjetos, déjelo sobre la mesa durante aproximadamente 30 minutos para que la glándula se adhiera al portaobjetos, pero sin permitir que se seque. A continuación, coloque el portaobjetos en un frasco que contenga fijador car-noise y déjelo a temperatura ambiente en la campana extractora durante dos días o más, tras al menos dos días. Lave el portaobjetos con etanol al 70 % durante una hora a temperatura ambiente.Lave la preparación con agua destilada durante 30 minutos a temperatura ambiente. A continuación, tiña la glándula con tinción de carmín alumbre durante dos días o más. La tinción se considera completa cuando revise el reverso de la preparación y observe que los ganglios linfáticos han sido completamente tiñidos.Lave el portaobjetos en una serie de concentraciones crecientes de etanol, durante una hora cada una. Comience con etanol al 70%, seguido de etanol al 95% y, en tercer lugar, con etanol al 100%. Para obtener preparaciones completas de glándula mamaria que sean técnicamente adecuadas para el análisis morfológico, son esenciales dos pasos: la disección de la glándula completa y la eliminación de lípidos del lecho adiposo mamario.La glándula se coloca en xileno para eliminar los lípidos y aumentar la transparencia. Este proceso de aclarado se llevará a cabo durante dos días o más, dependiendo del tamaño de la glándula y la cantidad de grasa presente. Después del último lavado en etanol absoluto, coloque la preparación en xileno.Deje la glándula en xileno a temperatura ambiente durante al menos dos días. Una vez completada la descalcificación, monte el portaobjetos con un cubreobjetos. Utilizando un medio de montaje como Per Mount, deje secar el portaobjetos durante varios días en la campana extractora antes de observarlo bajo un microscopio estereoscópico; la morfología del montaje de la glándula se analiza según tres puntos finales: alargamiento epitelial, número de brotes terminales y diferenciación.Luego, los resultados se correlacionan con el riesgo de cáncer de mama. Primero, demostraremos el análisis de una preparación en montura de glándula mamaria de un individuo prepuberal para evaluar el alargamiento epitelial. Utilice una regla para medir en milímetros la distancia desde el pezón hasta el extremo del árbol epitelial.El segundo parámetro, el número de brotes terminales o TBs, refleja el potencial de transformación maligna. Mediante un microscopio óptico, cuente el número de TBs, que son las estructuras más grandes y bulbosas, ubicadas únicamente en el extremo distal del árbol epitelial mamario. Para el tercer parámetro, que es la diferenciación, se examina también el preparado completo bajo el microscopio óptico.La diferenciación se mide mediante la puntuación de los brotes alveolares, que están distribuidos a lo largo del epitelio. A los dos tipos de brotes alveolares, denominados AB uno y AB dos, se les asigna una puntuación de cero a cinco según su abundancia en la glándula. Luego, se suman los valores de puntuación de AB uno y AB dos para obtener una puntuación final de diferenciación.El análisis morfológico de una preparación de glándula mamaria pospúber de H es similar al de una preparación de glándula mamaria prepúber de H, con las siguientes diferencias. Para examinar la elongación epitelial, primero, utilice una regla para medir la distancia en milímetros desde el ganglio linfático hasta el extremo del árbol epitelial. Segundo, mida la distancia desde la punta del árbol epitelial hasta el extremo del cojín adiposo.También en milímetros para el análisis de la diferenciación. En una preparación montada de glándula mamaria de adulto pospúber, además de los brotes alveolares, los lobulillos se puntúan en una escala de cero a cinco bajo un microscopio óptico. La puntuación refleja la abundancia de lobulillos en la glándula.Luego, la diferenciación se evalúa de dos maneras. Primero, se suman los valores de puntuación de AB uno, AB dos y LOEs para obtener una puntuación final de diferenciación. Segundo, se calcula la relación entre la puntuación de LOEs y la suma de las puntuaciones de AB uno y AB dos.Dado que los ABS diferencian dos LOE, una glándula más diferenciada tendrá una proporción más alta de LOE respecto a abs. Para comenzar este procedimiento, sostenga la rata agarrando todo el cuerpo con la palma sobre la espalda, el dedo índice detrás de la cabeza y el pulgar y el segundo dedo debajo de la axila opuesta. Gire la rata para que quede acostada sobre su parte posterior y palpe para detectar cualquier tumor mamario; los tumores palpables deben sentirse como un bulto.A continuación, utilice un calibre para medir el ancho, la longitud y la altura del tumor. Calcule el volumen tumoral utilizando la fórmula del elipsoide. El volumen equivale a un sexto de pi, A, B, C, donde A equivale al ancho, B equivale a la longitud y C equivale a la altura.Registre manualmente la ubicación y el tamaño del tumor en un cuaderno de forma semanal. Estos datos se transferirán posteriormente a una hoja de cálculo cuando se diseccionen y procesen correctamente. En el soporte del orificio de la glándula de la memoria, todos sus componentes deben ser claramente visibles, como se muestra en este ejemplo.En contraste, este es un ejemplo de una preparación deficiente de montaje de glándula mamaria en agujero. La glándula no se ha diseccionado adecuadamente porque le falta la porción distal. Además, la glándula no se estiró correctamente y no ha ocurrido la dilatación.Completamente mostrado. A continuación se presentan resultados representativos de cómo los cambios en la morfología de las glándulas mamarias pueden predecir el riesgo de cáncer de mama. En ratas expuestas al carcinógeno DMBA cuando se contó el número de brotes terminales o TBS, el grupo tratado presentó un mayor número de TBS a los 21 días en comparación con el grupo control.Estos cambios en la morfología de la glándula MA se asociaron con una proporción mayor de tumores de memoria en ratas del grupo de tratamiento en comparación con el grupo control. Como se muestra en este gráfico. Es importante recordar, al intentar este procedimiento, disecar toda la glándula MA y eliminar todas las grasas para asegurar una buena visualización de las estructuras de la glándula mamaria.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo diseccionar y preparar un montaje de glándula mamaria y cómo analizar su morfología para predecir el riesgo de cáncer de mama.

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En este artículo se muestra el procedimiento desarrollado por Enviaselo...

Procedimiento de mama epiteliales de Trasplantes

Este método describe la forma de analizar y evaluar el desarrollo de la glándula mamaria y la función de los ratones. Extirpado las glándulas mamarias son evaluados por el grado de desarrollo con montaje completo, mientras que la eyección de leche se evaluó mediante un ensayo basado en la oxitocina contracción de las células mioepiteliales.

Evaluación de la glándula mamaria de desarrollo y función en modelos de ratón

El protocolo de inmunofluorescencia indirecta descrito en este artículo permite la detección y la localización de las proteínas en la glándula mamaria del ratón. Un método completo se da para preparar muestras de glándula mamaria, para llevar a cabo la inmunohistoquímica, a la imagen las secciones de tejido mediante microscopía de fluorescencia, y para reconstruir imágenes.

Inmunofluorescencia indirecta en secciones congeladas de ratón Glándula Mamaria

Se desarrolló un procedimiento quirúrgico para administrar células tumorales mamarias al hígado murino mediante inyección en la vena porta. Este modelo permite la investigación de las etapas tardías de la metástasis hepática en un huésped totalmente competente para el sistema inmunitario, incluida la extravasación de células tumorales, la siembra, la supervivencia y el crecimiento metastásico en el hígado.

Una inyección Modelo vena porta del hígado para estudiar la metástasis del cáncer de mama

El desarrollo de la glándula mamaria en el roedor se ha evaluado típicamente mediante evaluaciones descriptivas o mediante la medición de atributos físicos básicos. La densidad de ramificación es un indicador del desarrollo mamario que es difícil de cuantificar objetivamente. Este protocolo describe un método fiable para la evaluación cuantitativa de las características de ramificación de las glándulas mamarias.

Cuantificación de la densidad de ramificación en las monturas enteras de la glándula mamaria de rata usando el método de análisis Sholl

Desarrollamos un método para eliminar, procesar, seccionar y teñir exitosamente, para la evaluación histopatológica, el tejido mamario que originalmente había sido fijado en diapositivas como monturas enteras. Este método puede promover la recolección y evaluación de monturas enteras de glándulas mamarias en estudios de referencia de pruebas reproductivas y de desarrollo.

Seccionando los Montes Enteros de las Glándulas Mamarias para la Identificación de Lesiones

Aquí, presentamos un protocolo para el aislamiento de entero, intacto el ratón glándulas mamarias para investigar la expresión de matriz extracelular (ECM) y morfología ductal. Las glándulas abdominales de ratón #4 se extrajeron de ratones femeninos nulíparas del 8-10 semanas de edad fijado en formalina tamponada neutra, seccionadas y teñido mediante inmunohistoquímica para las proteínas de la ECM.

Aislamiento de las glándulas mamarias del ratón intacto, todo para el análisis de expresión de la matriz extracelular y la morfología de la glándula

El objetivo de este protocolo es describir un nuevo enfoque de modelado de cáncer de mama basado en la inyección intraductal de adenovirus Cre-expressing en las glándulas mamarias del ratón. Este enfoque permite la manipulación específica del tipo de célula y del órgano de los eventos oncogénicos de una manera controlada temporalmente.

Modelar el cáncer de mama a través de una inyección intraductal de Adenovirus C-expreso en la Glándula Mamaria del Ratón

Este artículo describe un método de trasplante para injertar células epiteliales mamarias de ratas de donantes en la almohadilla de grasa blanca interescapular de los animales receptores. Este método se puede utilizar para examinar los efectos del huésped y/o del donante en el desarrollo del epitelio mamario y elimina la necesidad de pre-clearing, extendiendo así la utilidad de esta técnica.

Trasplante de células epiteliales de rata mamaria en la almohadilla de grasa blanca interescapular

Los modelos de xenoinjerto derivado del paciente (PDX) y los modelos de ratón genéticamente modificados trasplantables recapitulan fielmente la enfermedad humana y son modelos preferidos para la investigación básica y traslacional del cáncer de mama. Aquí, se describe un método para trasplantar ortotópicamente fragmentos de tumores de mama en la almohadilla de grasa mamaria para estudiar la biología del tumor y evaluar la respuesta al fármaco.

Trasplante ortotópico de tumores de mama como modelos preclínicos para el cáncer de mama

Se describe un procedimiento para la administración de una solución ablativa química al árbol ductal mamario de rata para el tratamiento preventivo guiado por imágenes del cáncer de mama. Las células epiteliales mamarias pueden ser atacadas con un daño tisular colateral mínimo a través de la canulación directamente en la abertura del pezón y la infusión intraductal de una solución ablativa a base de etanol al 70%.

Visualización de rayos X del tratamiento ablativo intraductal a base de etanol para la prevención del cáncer de mama en modelos de rata

Aprende a disecar y preparar montajes completos de glándula mamaria en ratas para analizar la morfología y predecir el riesgo de cáncer de mama. Este método evalúa elongación epitelial, yemas terminales y diferenciación.

Los cambios en la morfología de la glándula mamaria y el riesgo de cáncer de mama en ratas

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