Name: A 96 de microtitulación y placa basada en el método para la formación de Control y pruebas de sensibilidad antifúngica Candida albicans Las biopelículas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-10-21T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: Aprende a formar biopelículas de Candida albicans en placas de microtitulación de 96 pocillos y evaluar la susceptibilidad antifúngica mediante un método colorimétrico sencillo y reproducible.

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Biopelícula relacionadas con el trabajo en el laboratorio es financiado por donaciones y numeradas R21DE017294 R21AI080930 del Instituto Nacional de Investigación Dental y Craneofacial y el Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas (a JLL-R.). El contenido es responsabilidad exclusiva de sus autores y no representan necesariamente la opinión oficial de la NIDCR, el NIAID oa los NIH.

1. Preparación de C. albicans C. albicans es un microorganismo del grupo de riesgo 1/BSL1. Recuerde siempre que un buen uso de las técnicas de asepsia / estéril para trabajar con este microorganismo y seguir los procedimientos institucionales para la eliminación apropiada de tales materiales. <ol><li> Preparar un cultivo de una noche de C. albicans en YPD (levadura peptona dextrosa) medio líquido mediante la inoculación de una sola colonia de C. albicans en 25 ml de YPD. </li><li> Incubar la cultura en un agitador orbital (180 rpm) a 30 ° C durante la noche. La mayoría de C. albicans cepas crecerá a medida que las células de levadura bajo estas condiciones. </li><li> Centrifugar los cultivos durante la noche (alrededor de 3.000 rpm, 5-10 minutos), lavar las células dos veces con PBS estéril, y resuspender el precipitado final en unos 20-25 ml de medio RPMI 1640 tamponado con 165 mM de ácido morpholinepropanesulfonic a pH 7,0 y pre-calentado a 37 ° C (a partir de ahora este medio se conoce simplemente como "RPMI 1640"). </li><li> Recuento de células con un hemocitómetro. Después de contar, preparar una suspensión de células a una densidad final de 1,0 x 10 6 células / ml en RPMI 1640. Nota: Dado que las células tienen una tendencia a agregarse, es importante agitar vigorosamente entre los lavados y antes de pipetear. </li></ol> 2. Instalación de la placa de 96 pocillos de microtitulación para la formación del biofilm <ol><li> Con una pipeta multicanal añadir 100 ml de C. albicans suspensión en los pozos seleccionados de la placa de 96 pocillos de microtitulación (-s). No agregar celdas a los pozos en la columna 12, ya que estos sirven como controles negativos. </li><li> Cubrir la placa de microtitulación de todo con su tapa original, sellado con parafilm, colocarlo dentro de una incubadora y se incuba durante 24 horas a 37 ° C. La duración de la incubación se puede adaptar al diseño experimental específico. Por ejemplo, es posible examinar la cinética de formación del biofilm en un período de 24 a 48 horas en la siembra y el procesamiento de múltiples placas de cada plato en diferentes puntos temporales (es decir, 2, 4, 8, 12, 24 y 48 horas) </li><li> Después de la formación del biofilm, usando una pipeta multicanal aspirar el medio con cuidado de no tocar y alterar las biopelículas que se forman en cada uno de los pozos. </li><li> Utilizando una pipeta multicanal placas se lavan tres veces en PBS estéril (200 l por pocillo). Por otra parte, el uso de una lavadora automática de placas de microtitulación. Entre los mismos, y sobre todo después del último lavado, la fuga de las placas en posición invertida por secante con toallas de papel para quitar cualquier residuo de PBS. En este punto, los biofilms formados en el fondo de los pozos deben ser claramente visibles incluso a simple vista y también se puede visualizar mediante un microscopio invertido (Figura 1). Los biofilms son ahora listo para ser procesado por las pruebas de sensibilidad antifúngica ensayos. (Si el objetivo principal del experimento es evaluar el grado de formación del biofilm, las placas están listas para ser procesadas por el método colorimétrico. Para ello, el reactivo XTT / menadiona (ver paso 3) se pueden agregar y el color resultante leer con un lector de placas de microtitulación). </li></ol> 3. Pruebas de sensibilidad antifúngica de las biopelículas <ol><li> A partir de soluciones madre o el polvo, preparar una solución de trabajo en medio RPMI 1640 de cada uno de antimicóticos para ser probado. Las concentraciones típicas de alta son 1.024 mg / ml para fluconazol, y 16 mg / ml tanto para la anfotericina B y caspofungina. Otras concentraciones pueden ser utilizados para los diferentes agentes. </li><li> Con una pipeta multicanal, 200 l de la alta concentración de trabajo de antimicóticos para los pozos correspondientes en la columna 1 de cada placa de microtitulación que contienen las biopelículas fúngicas. </li><li> Añadir 100 ml de RPMI 1640 a cada pocillo de las columnas 2 a 10. </li><li> Añadir 100 ml de RPMI 1640 a los pozos en la columna 11. </li><li> Eliminar 100 L de agente antifúngico de los pozos de la columna 1 y añadir a los pozos adyacentes en la columna 2 (ya que contiene 100 l de media). </li><li> Mezclar el contenido y pipeteando arriba y abajo para realizar una dilución doble de serie, y eliminar las puntas. </li><li> Repita el movimiento a la derecha hasta los pozos de la columna 10, después de lo cual se descarta la final de 100 l de volumen de los pozos de la columna 10 después de la mezcla. De esta manera, una serie de diluciones al doble de su agente (-s) de interés se han creado a partir de la mayoría concentrados en los pozos de la columna 1, por lo que se concentró en los pozos de la columna 10. Biofilms sin respuesta en la columna 11 servirán como controles positivos, y los pozos se agotan en la columna 12 servirán como controles negativos. </li><li> Se cubren las placas con sus tapas, sello con parafilm y se incuba durante 24 -48 horas a 37 ° C. </li><li> Después del período de incubación, lavar los platos como en el Paso 2.4 antes (3 x PBS). </li><li> Con una pipeta multicanal añadir 100 ml de XTT / menadiona solución a cada pocillo que contenga un biofilm pre-lavado, así como a los pozos de control negativo para la medición de la X de fondoTT-colorimétrico los niveles. <ol><li> La XTT se prepara como una solución saturada a 0,5 g / L de lactato de Ringer estéril, PBS o solución salina, que debe ser esterilizada por filtración, con un 0,22 micras de poro del filtro de tamaño. La solución XTT es sensible a la luz, por lo que se debe cubrir con papel de aluminio durante la preparación. Una vez preparada y esterilizada por filtración, alícuota en 10 ml de volumen de trabajo, y guardar a -70 ° C. Proteger los tubos de la luz con papel de aluminio. Descongele sólo como tubos que sean necesarias para un experimento en particular antes de su uso. </li><li> Menadiona se prepara como una solución de 10 mM de valores en acetona al 100%, alícuotas en volúmenes más pequeños (unos 50 l) y almacenados a -70 ° C. Prepare la solución XTT / menadiona antes de su uso, mediante la adición de 1 l de la solución madre de menadiona con un tubo que contiene 10 ml de la solución XTT descongelado. </li></ol></li><li> Se cubren las placas en papel de aluminio y se incuban en la oscuridad durante 2 horas a 37 ° C. </li><li> Descubrir las placas. Con una pipeta multicanal eliminar el 80 l del sobrenadante resultante de color de cada pozo y la transferencia en los pocillos correspondientes de una nueva placa de microtitulación. </li><li> Leer la placa (-s) en un lector de placas microtiter a 490 nm. </li><li> Calcular la concentración inhibitoria mínima sésiles SMIC50 y SMIC80, que son las concentraciones de antifúngicos en el que se detecta una disminución del 50% o 80% en las lecturas colorimétricas en comparación con el control de biofilms formados en la ausencia de medicamentos antifúngicos (en este caso los valores de la columna 11 , recuerda también a restar los valores de los controles negativos de los pozos en la columna 12 contiene sólo XTT). Resultados SMIC se puede presentar como una tabla (es decir, múltiples aislamientos contra varios antifúngicos) o, alternativamente, los resultados de cada individuo aislado de hongos contra hongos pueden ser presentados en forma de gráfico mediante el trazado de la inhibición por ciento frente a la concentración de antimicóticos. </li></ol> Ejemplo: Después de restar los valores en el control negativo, la densidad óptica promedio de las biopelículas de control formado en la columna 11 es 1,32. El SMIC50 es la concentración más baja antifúngico que conduce a la reducción de&gt; 50% en las lecturas colorimétricas, en este caso menos de 1,32 x 50/100 = 0,66. Asimismo, el SMIC80 es la concentración más baja antifúngico con lo que disminuye&gt; 80% en las lecturas colorimétricas, en este caso menos de 1,32 x 20/100 = 0.264. 4. Resultados representante La figura 1 muestra una microfotografía de una C. albicans formación de biopelículas sobre el fondo de un pozo en una placa de microtitulación de 96 pocillos tomadas con un microscopio invertido. La figura 2 muestra XTT-colorimétrico lecturas (OD 490 valores) para cada una de las biopelículas de 11 C. albicans cepa de tipo salvaje formado en cada una de las 8 líneas diferentes de la misma placa de 96 pocillo de microtitulación. La Figura 3 muestra la actividad de la anfotericina B en diferentes concentraciones en contra de C. albicans biopelículas, las flechas indican SMIC50 y SMIC80 valores. <img src="/files/ftp_upload/2287/2287fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. (A) El panel A muestra una microfotografía tomada con una cámara conectada a un microscopio invertido de una C. albicans formación de biopelículas sobre el fondo del pozo después de la aspiración de medio RPMI y posteriores lavados con PBS. (B) Una micrografía de una típica C. albicans biofilm visualiza mediante microscopía electrónica de barrido. Las barras son 100 micras y 10 micras para los grupos A y B, respectivamente. <img src="/files/ftp_upload/2287/2287fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Formación de múltiples equivalentes C. albicans biopelículas en placas de 96 pocillos de microtitulación. lecturas colorimétricas (OD 490 valores) de XTT de reducción de los ensayos de los biofilms formados por una C. albicans de tipo salvaje en los pozos de placas de microtitulación. Los valores son para el 11 de biofilms independiente formada en cada uno de 8 líneas diferentes de la misma placa de 96 pocillo de microtitulación. Los resultados de las diferentes filas se compararon mediante análisis de un solo sentido de varianza y el test de Bartlett para homogeneidad de varianzas y comparaciones múltiples de Bonferroni el post-test. No se observaron diferencias estadísticamente significativas se observaron al comparar todos los pares de filas entre sí (P&gt; 0,05). <img src="/files/ftp_upload/2287/2287fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Los resultados típicos de las pruebas de sensibilidad antifúngica contra C. albicans biofilms. Gráfico que muestra los resultados típicos de la eficacia de diferentes concentraciones de anfotericina B contra las biopelículas de C. albicans cepa de tipo salvaje. Los valores se expresan como porcentaje medio de lecturas colorimétricas para los ensayos de reducción de XTT-en comparación con el control de los pozos. SMIC50 y SMIC80 valores se indican con flechas.

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</ol>

JLL-R posee la equidad en las tecnologías de MicrobeHTS, Inc., que es el desarrollo de agentes antifúngicos. Tecnologías MicrobeHTS, Inc. no proporcionó apoyo financiero para estos estudios.

A continuación se describe una forma simple, rápida, económica y altamente reproducible 96 modelo y placa de microtitulación para la formación de biopelículas de Candida, junto con un método colorimétrico que mide la actividad metabólica de las células dentro del biofilm con XTT. Este modelo 96 y placas de microtitulación para la formación de biofilm fue desarrollado originalmente para C. albicans, pero se puede utilizar para otras especies de Candida. y fácilmente adaptable a otros hongos. El...

<table><tbody><tr><td>Agar Sabouraud-dextrosa</td><td>BD Biosciences</td><td>211584</td><td>Para preparar placas para subcultivos frescos de aislamientos fúngicos</td></tr><tr><td>YPD: dextrosa de peptona de levadura</td><td>US Biological</td><td>Y2076</td><td>Medio para la propagación de cultivos líquidos nocturnos</td></tr><tr><td>RPMI-1640 sin bicarbonato de sodio suplementado con L-glutamina</td><td>Cellgro</td><td>50-020-PB</td><td>Medio líquido para la formación de biopelículas</td></tr><tr><td>Ácido morfolinopropanosulfónico (MOPS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP308</td><td>Para tamponar el RPMI 1640</td></tr><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato, PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P4417</td><td>Tampón para lavados</td></tr><tr><td>Sal sódica de XTT</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X4251</td><td>Ver arriba las instrucciones de preparación</td></tr><tr><td>Lactato de Ringer&amp;rsquo;s</td><td>Hospira Inc.</td><td>NDC0409-7953-09</td><td>Para la preparación de la solución de XTT</td></tr><tr><td>Menadiona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5625</td><td>Precaución: peligroso por contacto dérmico, inhalación o ingestión</td></tr><tr><td>Placas de Petri</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-757-12</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cónicos para centrífuga de 15 ml</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cónicos para centrífuga de 50 ml</td><td>Corning</td><td>430828</td><td></td></tr><tr><td>Placas de microtitulación de 96 pocillos: de poliestireno, fondo plano, tratadas para cultivo celular</td><td>Corning</td><td>3595</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta multicanal y puntas</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Incubadora</td><td>Cualquier proveedor</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lector de placas de microtitulación</td><td>Cualquier proveedor</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

a 96 de microtitulación y placa basada en el método para la formación de control y pruebas de sensibilidad antifúngica candida albicans las biopelículas

A 96 Well Microtiter Plate-based Method for Monitoring Formation and Antifungal Susceptibility Testing of Candida albicans Biofilms

Candida albicans es la causa más frecuente de las infecciones por hongos en una creciente población de pacientes inmunocomprometidos y la candidiasis es ahora la tercera enfermedad más común en los hospitales de los EE.UU.. Diferentes manifestaciones de la candidiasis se asocia con la formación de biofilm, tanto en los tejidos del huésped y / o dispositivos médicos (catéteres es decir). Formación de biopelículas lleva consecuencias negativas en la clínica, como las células dentro de los biofilms están protegidos de las respuestas inmunitarias del huésped y de la acción de los antifúngicos. Hemos desarrollado un modelo simple, rápido y robusto in vitro para la formación de C. biofilms albicans de 96 y placas microtiter, que también puede ser utilizado para las pruebas de bio-película de sensibilidad antifúngica. La lectura de este ensayo es colorimétrico, basado en la reducción de XTT (una sal de tetrazolio) por las células metabólicamente activas biopelículas fúngicas. Un experimento típico dura aproximadamente 24 horas para la formación de biofilm, con un adicional de 24 horas para las pruebas de sensibilidad antifúngica. Debido a su simplicidad y el uso de materiales de laboratorio comúnmente disponibles y el equipo, esta técnica democratiza la investigación del biofilm y representa un paso importante hacia la normalización de las pruebas de sensibilidad antifúngica de las biopelículas fúngicas.

Se describe un método simple, rápido y robusto para la formación de<em&gt; Candida albicans</em&gt; Biofilms de 96 placas de microtitulación bien y su utilidad en las pruebas de sensibilidad antifúngica de las células dentro de los biofilms.

A 96 de microtitulación y placa basada en el método para la formación de Control y pruebas de sensibilidad antifúngica Candida albicans Las biopelículas

*Candida albicans* sigue siendo la causa más frecuente de infecciones fúngicas en una población creciente de pacientes inmunocomprometidos y la candidiasis es ahora la tercera...

El objetivo general de este procedimiento es formar biopelículas de Candida albicans y examinar su susceptibilidad frente a agentes antifúngicos. Esto se logra primero formando estas biopelículas fúngicas en los pocillos de placas microtituladoras de 96 pocillos; luego se añaden antifúngicos a las biopelículas preformadas y se incuban durante 24 a 48 horas tras esta incubación.Se utiliza un método colorimétrico que mide la actividad metabólica de las células dentro de los biofilms para evaluar la actividad de estos antifúngicos, con el fin de establecer la concentración mínima inhibitoria de los antifúngicos frente a los biofilms. En definitiva, se pueden obtener resultados que muestran la capacidad de formación de biofilms y las pruebas de susceptibilidad antifúngica mediante un método sencillo y fácil basado en placas microtituladoras de 96 pocillos, acoplado a una lectura colorimétrica. La principal ventaja de esta técnica es que es sencilla, relativamente económica, altamente reproducible y permite la formación de múltiples biofilms equivalentes.Además, es compatible con la tecnología de plataforma de 96 pocillos comúnmente disponible en la mayoría de los laboratorios de investigación y clínicos. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la terapia de los cánidos. Dado que muy a menudo, estas infecciones están asociadas con la formación de biopelículas.Utilizando técnicas adecuadas de manipulación microbiológica, retire un asa completa de células de un subcultivo reciente de albicans en una placa de dextrosa SAU con cobre Alan e inocule en un matraz Erlenmeyer de 125 mililitros que contenga 25 mililitros de caldo de dextrosa pepona de levadura. Coloque el cultivo en un agitador orbital ajustado a 180 RRP M y 30 grados Celsius, e incube durante la noche. Tras la incubación nocturna, vierta los cultivos de levadura en tubos cónicos de 50 mililitros y centrifugue a 3000 RBM durante cinco a 10 minutos. Deseche el sobrenadante y vortexee.Agite vigorosamente el precipitado para desagregar las células. Luego, agregue PBS estéril para lavar antes de centrifugar nuevamente las culturas. Repita este paso de lavado una vez más antes de resuspender las células.En aproximadamente 20 mililitros de RPMI 1640, medio tamponado a pH 7,0. Utilizando una solución de mops 165 milimolar y previamente calentada a 37 grados Celsius, prepare una dilución uno a 100 utilizando un hemocitómetro estándar y un microscopio de campo brillante. Cuente las células.Luego, prepare una suspensión final de células a una concentración de 1 × 10⁶ por mililitro en RPMI 1640 tamponado y tibio. Utilizando una pipeta multicanal, añada 100 microlitros de la suspensión de *C. albicans* en los pozos seleccionados de una placa microtituladora estéril de 96 pozos con fondo plano. Deje los pozos de la columna 12 vacíos, ya que servirán como controles negativos.Después de cubrir y sellar la placa con paraform, incubarla a 37 grados Celsius durante 24 horas para permitir la formación de biopelículas. Tras la incubación, aspirar y desechar suavemente el medio de cada pocillo, teniendo cuidado de no perturbar las biopelículas formadas en el fondo.Para lavar, añada 200 microlitros de PBS a cada pocillo y drene invirtiendo cuidadosamente la placa y presionándola sobre una pila de toallas de papel. Repita este paso de lavado tres veces. En este punto, los biopelículas son detectables a simple vista y pueden visualizarse mediante un microscopio invertido utilizando SEM.Podemos apreciar que los biopel&iacute;culas consisten en una mezcla entrelazada de filamentos y c&eacute;lulas levaduriformes. Una vez que se ha verificado la formaci&oacute;n de biopel&iacute;culas, se puede comenzar a probar agentes antif&uacute;ngicos utilizando medio RPMI 1640 tamponado; prepare soluciones de trabajo de alta concentraci&oacute;n de los agentes antif&uacute;ngicos que se van a probar. Las concentraciones altas t&iacute;picas son de 1024 microgramos por mililitro para fluconazol y 16 microgramos por mililitro para anfotericina B y CASPO fungi beri.A continuación, agregue 200 microlitros de soluciones antifúngicas a los pocillos de la columna uno y 100 microlitros de medio RPMI 1640 tamponado a los pocillos de las columnas dos a once. Realice una serie de diluciones dobles sucesivas transfiriendo 100 microlitros de las soluciones antifúngicas de alta concentración desde los pocillos de la columna uno a los de la columna dos.Después de mezclar suavemente mediante pipeteo ascendente y descendente, pipetee 100 microlitros desde los pocillos de la columna dos hacia los de la columna tres, y así sucesivamente hasta la columna 10. No agregue ninguna solución antifúngica a la columna 11, ya que servirá como control positivo, y deseche los últimos 100 microlitros de los pocillos de la columna 10. Todos los pocillos, excepto los de la columna 12.Debería tener ahora un volumen final de 100 microlitros. Cubra la placa, séllela con parafina e incúbela a 37 grados Celsius durante 24 a 48 horas para permitir que los antifúngicos actúen tras la incubación. Después de lavar la placa tres veces con PBS como se describió anteriormente, añada 100 microlitros de solución de medio XTT por pocillo a todos los pocillos, incluyendo los pocillos de control negativo.En la columna 12. Cubra la placa, envuélvala en papel de aluminio para protegerla de la luz e incúbela a 37 grados Celsius durante dos horas. Para permitir el desarrollo del color tras la incubación, retire el envoltorio de la placa.La solución de XTT inicialmente clara se habrá vuelto naranja tras ser procesada por células metabólicamente activas. Transfiera 80 microlitros de los sobrenadantes coloreados a una placa microtituladora nueva con fondo plano. Utilice un lector de placas microtituladoras colorimétrico ajustado a una longitud de onda de 490 nanómetros para leer la placa como se muestra aquí. En ausencia de antifúngicos, las lecturas colorimétricas no fueron tratadas.Los biofilms del solicitante SEA en diferentes filas son equivalentes. Con el fin de evaluar primero el efecto de los compuestos antifúngicos probados, reste un valor promedio de fondo obtenido de los pocillos de control negativo en la columna 12 de todos los demás valores. A continuación, calcule el porcentaje de inhibición utilizando los controles positivos en la fila 11.Como valores máximos, las concentraciones antifúngicas en las que se detecta una disminución del 50 % o del 80 % en las lecturas colorimétricas son conocidas como concentraciones mínimas inhibitorias de Cecil. Estos valores suelen utilizarse como medida de referencia de la potencia de un compuesto. Mediante este sencillo método de alto rendimiento, se pueden formar biofilms fúngicos in vitro en 24 horas, y tras su desarrollo inicial, se pueden seleccionar compuestos para analizar su actividad antifúngica.Esta técnica allanó el camino para que los investigadores en el campo de la micología médica exploraran la formación de biopelículas y examinaran la actividad de los agentes antifúngicos. Nuevamente, las células en biopelículas.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

El ensayo describe un método rápido para medir la formación de biopelículas a principios de bacterias y hongos. Este método utiliza una placa de microtitulación como sustrato para la formación de biopelículas microbianas, y el biofilm se visualiza utilizando la cepa de cristal violeta. El ensayo ofrece ya sea un ensayo cualitativo o cuantitativo de la formación de biofilm temprano.

Plato de microtitulación de formación de biopelículas de ensayo

Hemos desarrollado una plataforma de microarrays de alta densidad que consiste en 3D nano-biopelículas...

Candida albicans biofilm Chip (Ca BChip) para la selección de alto rendimiento antifúngico

Este video muestra un ensayo in vitro para detectar compuestos antifúngicos utilizando un ensayo de microdilución de caldo. Los compuestos de prueba se diluyen en serie en una placa de microtitulación y se incuban con un inóculo fúngico. Después de la incubación, se examina la placa en busca de pocillos sin crecimiento fúngico visible para evaluar el potencial antifúngico de los compuestos de prueba y su concentración inhibitoria mínima (CMI).

Un ensayo de microdilución de caldo in vitro para el cribado de compuestos antifúngicos

Este video muestra una técnica in vitro para estudiar el efecto de los anticuerpos en las biopelículas fúngicas. El hongo patógeno Candida tropicalis segrega un factor de virulencia secretado como proteinasa 2 (Sap2), facilitando la formación de biopelículas. Al introducir un suero inactivado por calor que contiene anticuerpos específicos contra Sap2 que inhiben la maduración de la biopelícula, se evalúa la viabilidad de las células fúngicas mediante un ensayo cromogénico.

Un ensayo in vitro para evaluar el efecto de los anticuerpos sobre el biofilm de Candida tropicalis

Presentamos un procedimiento experimental de desarrollo de biofilm de Candida albicans en un modelo subcutáneo de ratón. Las biopelículas fúngicas se cuantificaron determinando el número de unidades formadoras de colonias y mediante una imagen de bioluminiscencia no invasiva, donde la cantidad de luz que se produce se corresponde con el número de células viables.

Candida albicans biopelícula Desarrollo de Cuerpos Extraños médicamente relevantes en un modelo de ratón subcutánea Seguido por bioluminiscencia Imaging

Este protocolo describe el uso de un dispositivo microfluídico automatizado personalizable para visualizar la formación de biopelículas de Candida albicans en condiciones fisiológicas de host.

Visualización de la formación de Biofilm de Candida albicans utilizando un dispositivo microfluídico automatizado

Un método microdilución en caldo fácil y adaptable para la detección de compuestos antifúngicos y extractos.

Microdilución en Vitro proyección de caldo: un método fácil y rápido para detectar nuevos compuestos antimicóticos

Aquí, presentamos un protocolo paso a paso para investigar la respiración mitocondrial y la función glucolisis en Candida Albicans utilizando un analizador de flujo adicional.

Bio-energética investigación de Candida albicans utilizando en tiempo real extracelular flujo análisis

Para ver y cuantificar las características internas de las biopelículas de Candida albicans, preparamos especímenes fijos intactos que se clarifican mediante la coincidencia del índice de refracción. A continuación, la microscopía de seccionamiento óptico se puede utilizar para obtener datos de imagen tridimensionales a través del espesor completo de la biopelícula.

Aclaración e imagen de Candida albicans Biofilms

Este protocolo describe un método para obtener datos cuantitativos sobre la actividad antifúngica de péptidos y otros compuestos, como agentes antifúngicos de moléculas pequeñas, contra Candida albicans. Su uso de la densidad óptica en lugar de contar las unidades formadoras de colonias para cuantificar la inhibición del crecimiento ahorra tiempo y recursos.

Cuantificación de la actividad antifúngica de péptidos contra Candida albicans

En el presente documento se describe un protocolo basado en placas de microtitulación de 96 pocillos que utiliza un ensayo de reducción de 2,3-bis(2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-5-carboxanilida-2H-tetrazolio (XTT), para estudiar los efectos de los anticuerpos en las biopelículas formadas por C. tropicalis. Este protocolo in vitro se puede utilizar para comprobar el efecto de posibles nuevos compuestos antifúngicos sobre la actividad metabólica de las células de especies de Candida en...

Un ensayo de reducción soluble a base de tetrazolio para evaluar el efecto de los anticuerpos en las biopelículas de Candida tropicalis

Aprende a formar biopelículas de Candida albicans en placas de microtitulación de 96 pocillos y evaluar la susceptibilidad antifúngica mediante un método colorimétrico sencillo y reproducible.

A 96 de microtitulación y placa basada en el método para la formación de Control y pruebas de sensibilidad antifúngica Candida albicans Las biopelículas (Video) | JoVE Journal

A 96 de microtitulación y placa basada en el método para la formación de Control y pruebas de sensibilidad antifúngica Candida albicans Las biopelículas

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