Name: PCR rápido ciclo térmico con convección térmica microescala (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-05T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 2 s
Description: Aprende PCR por convección térmica para amplificación rápida de ADN usando dinámica de fluidos computacional. Este método simplifica el termociclado y mejora la accesibilidad en biología molecular.

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Nosotros agradecemos a T. Ragucci, Watkins B., S. Wong, y Wallek B. en Lynntech, Inc. para asistencia técnica y muchas discusiones útiles. Este trabajo fue apoyado por los EE.UU. National Science Foundation (NSF) en virtud de concesión CBET-0933688.

1. Diseño básico de la convección termociclador <ol><li> Hemos construido un sencillo dispositivo que consta de ciclos térmicos convectivo intercambiables de plástico reacción de la cámara "cartuchos" que se encuentra entre dos placas de aluminio, cuya temperatura se controla de forma independiente 7 (Figura 2). </li><li> Pozos cilíndricos reactor están integrados por conjuntos de mecanizado de agujeros en los bloques de policarbonato, con diferentes combinaciones de diámetro del agujero y espesor de la lámina de plástico empleadas para lograr las relaciones de aspecto que desee (altura / diámetro = h / d). Dos geometrías diferentes reactor se consideran en los resultados presentados aquí: h / d = 9: h = 15,9 mm, d = 1,75 mm, 38,2 l de volumen; h / d = 3: h = 6,02 mm, d = 1,98 mm, 18,5 l volumen. </li><li> La superficie del fondo del reactor se calienta con un bloque de aluminio que contiene los calentadores de cartucho de interfaz con un controlador de temperatura microprocesser impulsada. </li><li> La temperatura en la superficie superior del reactor se regula con un bloque de aluminio conectado a un baño de agua de recirculación. </li><li> Todo el conjunto se fija mediante tornillos de nylon para limitar la conducción térmica entre los bloques de aluminio de oposición. </li></ol> 2. Preparación y carga de la mezcla de reacción PCR <ol><li> Un típico de 100 l mezcla de reacción contiene 10 l de solución tampón 10x, 6 l de 25 mM MgCl 2, 10 l de dNTPs (2 mM cada uno), 41,2 l de agua desionizada, 10 l de β-actina de la sonda, 10 l de β -actina cebador, 10 L de primer inversa β-actina, 2 l de ADN genómico humano plantilla (10 ng / l) y 0,8 l de ADN polimerasa KOD (2,5 unidades / l). </li><li> Antes de cargar los reactivos, sellar la superficie inferior de la cámara de PCR utilizando una delgada lámina de cinta de aluminio. </li><li> Lave los pocillos con un reactor de 10 mg / ml de solución acuosa de albúmina de suero bovino seguido por la lluvia-X Anti-Fog. </li><li> Reactivos pipeta en los pozos de reactor con tiempo de carga de gel puntas de pipeta y sellar la superficie superior con cinta de teflón FEP. </li></ol> 3. Ejecución de la reacción en el termociclador convectiva <ol><li> Antes de iniciar la reacción, precalentar los dos bloques de aluminio a la temperatura deseada de la superficie superior e inferior. </li><li> Sandwich del reactor de plástico cargado con reactivos de PCR entre los bloques de aluminio para calefacción, y rápidamente apretar el montaje mediante tornillos de nylon. </li><li> Después de la reacción ha tenido lugar durante el tiempo deseado, apagar los calentadores y el lugar más bajo (caliente) la superficie del dispositivo en la parte superior de un bloque de metal enfriada rápidamente para que se enfríe y detener el flujo de convección. </li><li> Retire el reactor de plástico y una pipeta de los productos de las fuentes (con las puntas de gel de carga de largo) para su posterior análisis. </li></ol> 4. Realizar un análisis de electroforesis en gel <ol><li> Prepare un 2% en peso de gel de agarosa al calentar 10 g de agarosa con 500 ml de solución tampón 1x en un plato caliente revolviendo hasta que la solución se aclare. </li><li> Cargar el gel de agarosa en la bandeja de fundición e insertar el peine. Deje que el conjunto de gel de ~ 30 min. </li><li> Retirar el peine y añadir 1x tampón TAE hasta que el gel se sumerge. </li><li> Muestras teñidas con fluorescencia de ADN contienen 2 l 100x SYBR Green solución que, dos muestras de ADN l, 2 l colorante de carga 6x Orange, y 4 l buffer TAE. </li><li> Añadir las muestras de ADN en los pocillos y ejecutar la separación de 60 V durante 1 h con un marcador de 100 bp de ADN escalera de tamaño. </li><li> Quitar el gel y la fotografía bajo la luz UV para obtener el resultado. </li></ol> 5. Los resultados representativos: Diseño óptimo de termocicladores convección consiste en elegir la correcta geometría del reactor que generará un flujo circulatorio, capaz de transportar los reactivos a través de las temperaturas clave que participan en el proceso de PCR. Los parámetros geométricos que se pueden variar en los reactores cilíndricos aquí consideradas son la altura (h) y diámetro (d), o equivalentemente la relación de aspecto (h / d). Hemos explorado los campos de flujo 3-D dentro de convección reactores de PCR en un rango de diferentes relaciones de aspecto utilizando la dinámica de fluidos computacional (CFD), y encontró que los patrones complejos pueden surgir inesperadamente. Más importante aún, nuestro análisis ha descubierto un subconjunto de estos campos de flujo complejo que aceleran de manera significativa la reacción 12. Estos efectos geométricos se puede ver claramente al comparar los campos de flujo en reactores de relaciones de aspecto de alta y baja. En el caso de la relación de aspecto de alto (h / d = 9; un cilindro alto y delgado), los elementos del fluido son advección a lo largo de trayectorias que trazan los caminos que son esencialmente circuitos cerrados, y que están encerrados en seguir el mismo camino durante largos períodos de tiempo (Figura 3a). En consecuencia, hay pocas oportunidades para el intercambio entre ftrayectorias bajas que exponga los reactivos a la secuencia óptima de las condiciones térmicas de PCR (que oscila entre el recocido y la desnaturalización extremos en las superficies superior e inferior del reactor) y el conjunto más grande de trayectorias restantes que no contribuyen a la amplificación (localizada cerca del centro del reactor). El campo de flujo es muy diferente a una relación de aspecto menor (h / d = 3, un menor, el cilindro más amplio), cada vez más caótica en el sentido de que las trayectorias líquido elemento ya no siguen los caminos cerrados (Figura 3b). Por lo tanto, a pesar de que los reactivos son sometidos a un perfil de temperatura más complejo, los elementos del fluido son capaces de explorar un rango más amplio de las trayectorias de modo que más del volumen de reactivo tiene una oportunidad para una óptima experiencia de perfiles térmicos. Estos resultados sugieren que mientras que contraintuitivamente trayectorias de flujo individual en h / d = 09 de mayo parecen ser más favorables para la PCR mediante la producción de perfiles de temperatura que "look" similar al empleado en un termociclador convencional, la naturaleza caótica del campo de flujo en h / d = 3 en última instancia, domina a escala mundial mediante la promoción de un mayor intercambio para que los reactivos no quedar atrapados en las trayectorias desfavorables por mucho tiempo. Para probar esta hipótesis y determinar que la geometría del reactor era más favorable para la PCR, se utilizaron dos de ellos para realizar la replicación de PCR de 295 pb un objetivo asociado con el gen de la β-actina de una plantilla de ADN genómico humano. Notablemente, de manera rutinaria lograr la amplificación del producto de destino correcto en sólo 10 minutos a h / d = 3 (Figura 4a), mientras que la misma reacción que requiere por lo menos 20 minutos antes de detectarse productos se observaron en h / d = 9 (Figura 4b) . La especificidad de la reacción es mucho mayor en h / d = 3, en un solo producto de PCR se obtiene, mientras que varios productos no específicos se generan en h / d = 9, donde las trampas de campo de flujo de fluidos en los elementos desfavorables trayectorias térmicas durante largos períodos de tiempo. <img src="/files/ftp_upload/2366/2366fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Convección térmica en una cámara cilíndrica cuya parte superior e inferior superficies se mantienen a diferentes temperaturas fijas. Si la temperatura en la superficie inferior es mayor que en la parte superior, un gradiente de densidad vertical se establece en el líquido cerrado que es capaz de generar un patrón de flujo circulatorio. Con la elección correcta de los parámetros geométricos (altura h y diámetro d), el campo de flujo de convección se puede aprovechar para accionar termociclado PCR cuando las superficies superior e inferior son manintained cerca de recocido y desnaturalización de las temperaturas, respectivamente (la gravedad actúa verticalmente hacia abajo). <img src="/files/ftp_upload/2366/2366fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. (A) Los componentes clave de un flujo convectivo termociclador de PCR. Un cartucho de reactor consiste en un bloque de policarbonato que contiene una serie de cámaras cilíndricas. El bloque se encuentra entre una placa superior diseñado para ser conectado a un baño de agua circulante y una placa inferior que incorpora calentadores integrados. (B) los reactivos de PCR se han cargado y sellado en el interior del cartucho de reactor, después de que el dispositivo está montado para llevar a cabo la reacción. Al terminar, el procucts puede ser fácilmente pipeta para un análisis posterior. <img src="/files/ftp_upload/2366/2366fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Simulaciones computacionales de 3-D los campos de flujo de convección generadas dentro de los reactores cilíndricos, con temperaturas de 53 y 96 ° C impuestas en las superficies superior e inferior, respectivamente. Los resultados se muestran en relaciones de aspecto de (a) h / d = 9 (38,2 l volumen del reactor) y (b) h / d = 3 (18,5 l volumen del reactor). Un representante trayectoria seguida por un elemento de fluido viaja a través del campo de flujo en 3D se muestra a la izquierda junto con las proyecciones vista superior y lateral de la ruta, la gráfica correspondiente de la temperatura en función del tiempo después de un elemento de fluido se muestra a la derecha. El perfil térmico en h / d = 9 aparece próxima a la de un termociclador convencional, pero el campo de flujo caótico en h / d = 3 es contraintuitivamente más favorable para la PCR. <img src="/files/ftp_upload/2366/2366fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Los resultados de la replicación del ADN obtenido en las geometrías del reactor se muestra en la Figura 3 (superior e inferior de las superficies se mantuvieron en 53 y 96 ° C, respectivamente). (A) PCR se acelera en h / d = 3, como es evidente por los productos de fuerte y visible después de tan sólo 10 minutos de tiempo de reacción (M: escalera de 100 pb, carriles 1-4: los productos de las reacciones en paralelo en 4 diferentes cámaras cilíndricas). (B h / d = 9 requiere por lo menos 20 minutos antes de que los productos visibles se observan, y varias bandas son la replicación del ADN evidente que indica que no son objeto específico, además del producto deseado (M: escalera de 100 pb, carriles 1-2: los productos de las reacciones en paralelo en dos cámaras cilíndricas diferentes).

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</ol>

La interacción entre el flujo y la reacción química puede cambiar drásticamente bajo la influencia de la advección caótica. Pero estos estados de flujo complejas son difíciles de estudiar, sobre todo en geometrías 3D realista donde los efectos se vuelven importantes. Rayleigh-Bénard convección en h / d&gt; 1, no sólo proporciona una plataforma conveniente para explorar estos fenómenos, su aplicación para realizar PCR también permite el acoplamiento entre las reacciones químicas y el flujo que se probaron. Esta capacidad única permite seleccionar los estados de flujo óptimo en el acto de efectos caóticos (contraintuitivamente) para acelerar la velocidad de replicación del ADN.

<table><tbody><tr><td>Kit de polimerasa KOD</td><td>Novagen, EMD Millipore</td><td>71085-3</td><td></td></tr><tr><td>Kit de reactivos de control TaqMan &amp;#946;-actina</td><td>Applied Biosystems</td><td>401846</td><td></td></tr><tr><td>Cinta de aluminio</td><td>Axygen Scientific</td><td>PCR-AS-200</td><td></td></tr><tr><td>Albúmina sérica bovina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>Rain-X Anti-Vaho</td><td>SOPUS Products</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Puntas de pipeta largas para carga de geles</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-151</td><td></td></tr><tr><td>Cinta de teflón FEP</td><td>McMaster-Carr</td><td>7562A17</td><td></td></tr><tr><td>Gel de agarosa</td><td>Bio-Rad</td><td>161-3107</td><td></td></tr><tr><td>Tampón de electroforesis TAE</td><td>Bio-Rad</td><td>141-0743</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Green I</td><td>Invitrogen</td><td>S7563</td><td></td></tr><tr><td>Tinte marcador naranja 6x</td><td>Fermentas</td><td>R0631</td><td></td></tr><tr><td>Escalera de ADN de 100 pb como marcador de tamaño</td><td>Bio-Rad</td><td>170-8202</td><td></td></tr></tbody></table>

pcr rápido ciclo térmico con convección térmica microescala

Rapid PCR Thermocycling using Microscale Thermal Convection

Muchos ensayos de biología molecular dependen de alguna manera en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para amplificar una muestra de ADN diana inicial se diluye a una concentración detectable. Pero el diseño de hardware convencionales termociclado PCR, en su mayoría sobre la base de enormes bloques de metal de calefacción, cuya temperatura es regulada por los calentadores de termoeléctricas, limita la velocidad de reacción alcanzables 1. Capacidad eléctrica es necesaria para calentar y enfriar repetidas veces la mezcla de reactivos, lo que limita la capacidad de implementar estos instrumentos en un formato portátil. Convección térmica ha surgido como un enfoque alternativo termociclado prometedor que tiene el potencial para superar estas limitaciones 2-9. Flujos convectivos son una ocurrencia diaria en una gran variedad de escenarios que van desde la atmósfera de la Tierra, los océanos, y el interior, a las lámparas de lava decorativa y colorida. El movimiento del fluido se inicia de la misma manera en cada caso: a la inestabilidad de flotabilidad impulsado surge cuando un volumen limitado de líquido es sometido a un gradiente de temperatura espacial. Estos mismos fenómenos constituyen un medio atractivo para realizar termociclado PCR. Mediante la aplicación de un gradiente de temperatura estática a través de una geometría del reactor se diseñan adecuadamente, un continuo flujo circulatorio se puede establecer que en repetidas ocasiones que el transporte a través de reactivos de PCR zonas de temperatura asociado a la desnaturalización, hibridación, y las fases de extensión de la reacción (Figura 1). Termociclado por lo tanto, se puede accionar de una manera pseudo-isotérmica simplemente sosteniendo dos superficies opuestas a una temperatura fija, eliminando la necesidad de calentar y enfriar repetidamente el instrumento. Uno de los principales desafíos que enfrenta el diseño de termocicladores convección es la necesidad de controlar con precisión la velocidad espacial y distribución de la temperatura dentro del reactor para asegurarse de que los reactivos de forma secuencial ocupan las zonas de temperatura correcta para un período de tiempo suficiente 10,11. A continuación se describen los resultados de nuestros esfuerzos para investigar el 3-D y la velocidad de distribución de la temperatura en el micro de convección termocicladores 12. Inesperadamente, se ha descubierto un subconjunto de las trayectorias de flujo de complejos que son muy favorables para PCR debido a una combinación sinérgica de (1) intercambio continuo entre las líneas de flujo que ofrece una mayor oportunidad para los reactivos para probar toda la gama de perfiles de temperatura óptima, y ​​( 2) aumento del tiempo dedicado en la zona de temperatura de extensión de la limitación de velocidad de paso de la PCR. Extremadamente rápidos tiempos de amplificación de ADN (de menos de 10 min) se pueden conseguir en los reactores diseñados para generar esos flujos.

Se describe un nuevo método para llevar a cabo la replicación del ADN a través de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Convección térmica se aprovecha de los reactivos de transporte continuo entre la desnaturalización, hibridación, extensión y condiciones por el mantenimiento de las superficies opuestas del reactor a temperatura constante. Este diseño inherentemente simples promesas para hacer un rápido PCR más accesible.

PCR rápido ciclo térmico con convección térmica microescala

Muchos ensayos de biología molecular dependen, de alguna manera, de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para amplificar una muestra de ADN diana inicialmente diluida hasta un nivel detectable...

El objetivo general de este procedimiento es demostrar cómo se puede aplicar el principio de termociclado por PCR mediante convección térmica para llevar a cabo una reacción real. Esto se logra primero introduciendo la idea de cómo funciona el termociclado por convección natural, junto con los principios básicos de diseño. El segundo paso del procedimiento consiste en mostrar cómo preparar el cartucho del reactor y cargar los reactivos en su interior.El tercer paso del procedimiento consiste en ensamblar el cartucho del reactor en la unidad calefactora y realizar la reacción. El paso final del procedimiento es retirar los reactivos tras la reacción y verificar los resultados mediante electroforesis en gel. En última instancia, se pueden obtener resultados que muestran la replicación rápida de ADN mediante termociclado PCR por convección natural.Hola, soy Radha OU del laboratorio UGAs en la Universidad Texas A&M. Hoy les mostraré un procedimiento para realizar la termociclación rápida por PCR utilizando la convección natural, como en una lámpara de lava. Utilizamos este procedimiento en el laboratorio para estudiar el diseño y la optimización de dispositivos de termociclación que aprovechan este principio.Así que comencemos. Este protocolo comienza con el diseño y la construcción de un dispositivo sencillo de termociclado convectivo. El dispositivo utilizado para esta demostración consta de cartuchos intercambiables de cámaras de reacción de plástico que se colocan entre dos placas de aluminio cuyas temperaturas son controladas independientemente.Los pozos del reactor cilíndrico se integraron mediante el mecanizado de matrices de orificios en bloques de policarbonato, utilizando diferentes combinaciones de diámetro de orificio y espesor de lámina plástica para lograr las relaciones de aspecto deseadas. El diseño óptimo consiste en seleccionar la geometría adecuada del reactor que genere un flujo circulatorio capaz de transportar los reactivos a través de las temperaturas clave involucradas en el proceso de PCR. Los parámetros geométricos que pueden variarse en los reactores cilíndricos considerados aquí son la altura y el diámetro, o equivalentemente, la relación de aspecto.La superficie inferior del reactor se calienta mediante un bloque de aluminio que contiene calentadores cartucho conectados a un controlador de temperatura accionado por microprocesador. La temperatura en la superficie superior del reactor se regula usando un bloque de aluminio conectado a un baño de agua recirculante. Todo el conjunto se sujeta mediante tornillos de nailon para limitar la conducción térmica entre los bloques de aluminio opuestos.Prepare cada liberación de 100 microlitros de reacción de PCR mezclando solución tampón 10 veces, cloruro de magnesio 25 milimolar, dos DTPs de agua destilada, la sonda de beta actina, el cebador directo y el cebador inverso, la plantilla genómica humana, ADN y la polimerasa K-O-D-D-N-A. Antes de cargar los reactivos, selle la superficie inferior de la cámara de PCR utilizando una lámina delgada de cinta de aluminio, enjuague los pozos del reactor con una solución acuosa de albúmina de suero bovino de 10 miligramos por mililitro, seguido de Rain X antiempañante. Finalmente, pipetee los reactivos en los pozos del reactor utilizando puntas para carga de geles y selle la superficie superior con cinta de teflón FEP.Antes de comenzar la reacción, precaliente ambos bloques de aluminio a las temperaturas deseadas para las superficies superior e inferior. Coloque el reactor de plástico cargado con los reactivos de PCR entre los bloques calefactores de aluminio y sujete rápidamente el conjunto utilizando tornillos de nailon. Una vez transcurrido el tiempo deseado de reacción, apague los calentadores y coloque la superficie calentada inferior del dispositivo sobre un bloque de metal refrigerado para enfriarlo rápidamente y detener el flujo convectivo.Retire el reactor de plástico y pipetee los productos fuera de los pocillos para su posterior análisis. Prepare un gel de agarosa al 2 % calentando 10 gramos de agarosa con 500 mililitros de tampón 1× en una placa calefactora con agitación hasta que la solución se vuelva transparente. Cargue el gel de agarosa en el molde de vertido e inserte el peine.Deje que el gel se solidifique durante aproximadamente 30 minutos. Retire el peine y agregue tampón TAE 1× hasta que el gel quede sumergido. Prepare muestras de ADN teñidas con fluorescencia utilizando dos microlitros de verde cyber 100×.Una solución de dos microlitros de muestra de ADN, dos microlitros de colorante naranja de carga seis veces y cuatro microlitros de tampón TAE. Cargue un marcador de tamaño de ADN de 100 pares de bases y las muestras de ADN en los pocillos del gel. Separe el ADN haciendo correr el gel a 60 voltios durante una hora.Retire el gel y fotografíelo bajo luz ultravioleta para obtener el resultado. Se investigaron campos de flujo tridimensionales dentro de reactores de PCR convectivos en un rango de diferentes proporciones de aspecto utilizando dinámica de fluidos computacional o CFD. Estos datos revelaron que pueden surgir patrones complejos y que un subconjunto de estos campos de flujo complejos puede acelerar significativamente la reacción.Estos efectos geométricos pueden observarse claramente al comparar los campos de flujo en reactores con altas y bajas relaciones de aspecto, siendo la relación de aspecto alta. Los elementos del fluido se ven afectados a lo largo de trayectorias, describiendo caminos que son esencialmente bucles cerrados y quedan atrapados siguiendo los mismos recorridos durante largos períodos de tiempo. En consecuencia, existe poca oportunidad de intercambio entre las trayectorias de flujo que exponen los reactivos a la secuencia óptima de condiciones térmicas para la PCR y el conjunto mucho mayor de trayectorias restantes que no contribuyen a la amplificación.El campo de flujo es muy diferente en una relación de aspecto más pequeña. El campo de flujo es más caótico, ya que las trayectorias de los elementos de fluido ya no siguen caminos cerrados. Aunque las reacciones están sujetas a un perfil de temperatura más complejo, los elementos de fluido pueden explorar un rango mucho más amplio de trayectorias, de modo que una mayor parte del volumen del reactivo tiene la oportunidad de experimentar perfiles térmicos óptimos.Estos resultados sugieren que, aunque las trayectorias individuales del flujo en H sobre D igual a nueve pueden parecer más favorables para la PCR al producir perfiles de temperatura similares a los empleados en un termociclador convencional, la naturaleza caótica del campo de flujo en HOD igual a tres domina finalmente a escala global al promover un intercambio mejorado, de modo que los reactivos no quedan atrapados en trayectorias desfavorables durante mucho tiempo. Para probar esta hipótesis y determinar qué geometría de reactor era más favorable para la PCR, ambos cilindros se utilizaron para realizar la replicación por PCR de un fragmento diana de 295 pares de bases asociado al gen de la beta actina a partir de una plantilla de ADN genómico humano; la amplificación del producto diana correcto se logró repetidamente en solo 10 minutos a H sobre D igual a tres.Por el contrario, la misma reacción requirió al menos 20 minutos antes de que se observaran productos detectables a una relación H/D igual a nueve. La especificidad de la reacción también es mucho mayor a una relación H/D igual a tres, donde se obtiene un único producto de PCR. Mientras que múltiples productos no específicos se generan a una relación H/D igual a nueve, donde el campo de flujo atrapa elementos de fluido en trayectorias térmicas desfavorables durante períodos prolongados de tiempo.Acabamos de mostrarle cómo realizar una reacción de PCR utilizando un termociclador de flujo convectivo. Al realizar este procedimiento, es importante recordar sellar los reactivos dentro de la cámara del reactor sin introducir bolsas de aire. Estas perturbarían el campo de flujo en el interior y podrían inhibir la reacción.Así que eso es todo. Gracias por ver este video y buena suerte con sus experimentos.

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Este protocolo describe los pasos críticos y precauciones necesarias para realizar la célula multiplex transcripción reversa reacción en cadena polimerasa después de patch-clamp. Esta técnica es un método simple y eficaz para analizar el perfil de expresión de un conjunto predeterminado de genes de una sola célula caracterizada por grabaciones de patch-clamp.

Sola célula Multiplex transcripción reversa reacción en cadena polimerasa después de Patch-clamp

La reticulación cinética y el análisis del ADNc es un método que permite la investigación de la dinámica de las interacciones proteína-ARN en células vivas a alta resolución temporal. Aquí se describe el protocolo en detalle, incluido el crecimiento de células de levadura, la reticulación UV, la recolección, la purificación de proteínas y los pasos de preparación de la biblioteca de secuenciación de próxima generación.

Monitorización de la dinámica de interacción proteína-ARN in vivo a alta resolución temporal utilizando χCRAC

Este protocolo describe cómo construir un sistema de cadena de polimerasa de flujo continuo basado en un chip microfluídico y cómo construir un sistema de electroforesis capilar en el laboratorio. Presenta un método sencillo para el análisis de ácidos nucleicos en el laboratorio.

Amplificación de Escherichia coli en un chip microfluídico de PCR de flujo continuo y su detección con un sistema de electroforesis capilar

La determinación del genotipo completo de una muestra de cola de ratón, incluyendo la digestión del tejido y la lectura de PCR, se realiza en una hora y media utilizando SYBR Sigma verde Extract-N-Amp PCR kit de tejido.

Genotipificación rápida de tejido de ratón utilizando extracto-N-Amp tejido Sigma PCR Kit

El Solaris qPCR ensayos de expresión génica son nuevas pre-diseñados qPCR primer / sonda combinaciones diseñadas para simplificar el proceso de qPCR sin sacrificar la especificidad y la robustez de la prueba.

Cuantitativas PCR en tiempo real utilizando el Thermo Scientific Solaris qPCR ensayo

Aprende PCR por convección térmica para amplificación rápida de ADN usando dinámica de fluidos computacional. Este método simplifica el termociclado y mejora la accesibilidad en biología molecular.

PCR rápido ciclo térmico con convección térmica microescala

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