Name: Inducción y seguimiento de activos de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) en ratas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 26 s
Description: Aprende a inducir hipersensibilidad de tipo retardado activa en ratas Lewis usando una emulsión de antígeno KLH en adyuvante de Freund. Este método permite monitorear respuestas inflamatorias mediante mediciones de edema en modelos animales de inmunología.

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1. Preparación de la emulsión <ol><li> La emulsión es una mezcla de 1:1 de antígeno (DTH pueden ser inducidas a varios antígenos: ovoalbúmina, toxoide tetánico, hemocianina de lapa hemocianina ....) en una solución acuosa añade adyuvante completo de Freund. Es muy importante añadir el antígeno al adyuvante y no al revés! </li><li> Hay una gran cantidad de residuos y la hora de hacer la inyección de una emulsión, por lo que siempre preparan 1,5 o 2 veces más de lo que usted necesita. </li><li> Disolver el antígeno en solución salina para preparar a 2 mg / ml. No filtro, ya que no quiere perder los agregados! </li><li> Ponga adyuvante completo de Freund H37Ra (Difco, catálogo # 231.131) en un tubo y agitar a gran velocidad. Añadir la caída de antígeno a gota y agitación. Cuando todos los antígenos, se añade, vortex por 5 minutos más. La mezcla se debe a su vez blanco. </li><li> Ponga la emulsión en una jeringa de vidrio y vincularlo a otro jeringa de vidrio mediante un puente de 18G (catálogo Fisher º 14-825-17L). Enviar la emulsión con una jeringa a otra hasta que se vuelve difícil (5-10 min). Lo mejor es utilizar dos jeringas de 5 ml. Si hay más de 5 ml de la emulsión se requieren, el uso de varios conjuntos de jeringas de 5 ml. </li><li> La emulsión puede ser almacenada en las jeringas a 4 ° C durante 3 semanas. </li></ol> 2. La inmunización de las ratas <ol><li> Mezcla de la emulsión en las jeringas durante unos minutos y traslado a la jeringa utilizada para la inyección. Inyectar 200 ml por vía subcutánea en 1-2 sitios en la base de la cola el uso de agujas 23G y una punta Luer-Lok jeringa de 3 ml. </li></ol> 3. Desafío con el antígeno en la espalda <ol><li> Siete días después de la inmunización, se afeitan dos manchas en el dorso de las ratas y inyectar por vía intradérmica 20 ml de una solución de antígeno 1 mg / ml en un lugar y solución salina (o antígeno irrelevante) en el otro sitio. No filtrar la solución de antígeno, ya que pueden perder los agregados que potencian la reacción inflamatoria. </li><li> Las ratas deben ser anestesiado para evitar movimientos. Inyectar la solución por vía intradérmica con agujas 27G ½ y jeringas de 1 ml. Cambie las agujas entre las inyecciones. Nota: el reto se puede hacer en el pabellón de las orejas en lugar de la parte de atrás para mediciones más precisas. Ver video en <a href="/index/Details.stp?ID=325">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=325</a> </li></ol> 4. La medición de DTH <ol><li> El sitio de la inyección comenzará a girar y la hinchazón de color rojo como un signo de inflamación. Medir el diámetro de la zona inflamada con una regla o, mejor aún, un calibrador. La inflamación máximo debe ocurrir entre 24 y 72 horas. </li></ol>

<ol>
	<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+and+monitoring+of+adoptive+delayed-type+hypersensitivity+in+rats.">Induction and monitoring of adoptive delayed-type hypersensitivity in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. 8, (2007).</li></ol>

Los autores son los co-fundadores y asesores de Airmid Inc.

Para una medición más precisa de la reacción de DTH se recomienda un desafío a las ratas con el antígeno en el pabellón de la oreja. La reacción se puede medir una diferencia de inflamación del oído entre las autoridades de antígeno desafío auditivo y el oído desafió con solución salina sola o con el antígeno irrelevante. Una demostración del problema en el oído se muestra en 1.

Utilizar reactivos soluciones y jeringas estériles. Las jeringas de vidrio y los puentes 18G pueden ser esterilizados en autoclave. Leer material de la hoja de datos antes de manipular un reactivo por primera vez y usar el equipo protector apropiado.

inducción y seguimiento de activos de hipersensibilidad de tipo retardado (dth) en ratas

Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats

Retardada de hipersensibilidad (DTH) es una reacción inflamatoria mediada por CCR7-efector linfocitos T de memoria que se infiltran en el sitio de la inyección de un antígeno contra el que ha sido el sistema inmunológico preparado. La reacción inflamatoria se caracteriza por enrojecimiento e inflamación del sitio de estímulos antigénicos. Es un modelo práctico para determinar la eficacia in vivo de los inmunosupresores. DTH cutánea puede ser inducido, ya sea por transferencia adoptiva de linfocitos T antígeno-específicos o mediante la inmunización activa con un antígeno, y el desafío posterior intradérmica con el antígeno para inducir la reacción inflamatoria en la piel de una zona determinada. Respuestas DTH pueden ser inducidas a diversos antígenos, por ejemplo, la ovoalbúmina, la tuberculina, toxoide tetánico, o hemocianina de lapa hemocianina (KLH). Aquí se demuestra la forma de inducir una reacción activa de DTH en ratas Lewis. En primer lugar, preparará una emulsión de agua en aceite de KLH, nuestro antígeno de interés, en el adyuvante completo de Freund e inyectar esta emulsión por vía subcutánea a ratas. Esto se preparan al sistema inmunológico para desarrollar células T de memoria dirigidos a KLH. Siete días después, nos pondrá a prueba a las ratas por vía intradérmica en la espalda con KLH en un lado y con la ovoalbúmina, un antígeno irrelevante, en el otro lado. La reacción inflamatoria será visible 16-72 horas más tarde y en la zona roja e hinchada se medirá como una indicación de la gravedad de DTH.

Retardada de hipersensibilidad (DTH) es una reacción inflamatoria mediada por CCR7-efector linfocitos T de memoria. Aquí se demuestra la forma de inducir DTH activa en ratas Lewis y controlar la respuesta inflamatoria.

Inducción y seguimiento de activos de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) en ratas

La hipersensibilidad retardada (DTH) es una reacción inflamatoria mediada por linfocitos T de memoria efectores CCR7+ que infiltran el lugar de inyección de...

Hola, soy Christine Beaton. Trabajo en el laboratorio de George Chandy en el Departamento de Fisiología y Biofísica de la UCI. Hoy les mostraré cómo inducir la DHTr activa en ratas.Para ello, voy a preparar una emulsión de KLH, que es mi antígeno, en adyuvante de Freund. Luego, voy a inyectar esta emulsión en la base de la cola de ratas Lewis. Esto va a inducir la inmunización de las ratas contra KLH. Y en una semana voy a desafiar a las ratas con KLH y medir la reacción de hipersensibilidad tardía (DTH) mediante la medición del hinchazón.Ese es el sitio de desafío y lo estamos utilizando en el laboratorio para observar el efecto de los bloqueadores del canal PO sobre reacciones inflamatorias como la DH. Así que aquí está el adyuvante trans incompleto que voy a usar para preparar la emulsión. También podría usar el adyuvante trans completo.Aquí hay cuarzo de KLH, que es mi antígeno de hoy, y tengo una solución aquí a dos miligramos por ml. En PBS, voy a usar esta jeringa de cinco ml para extraer el adyuvante incompleto y transferirlo a un tubo de 15 ml. Luego, colocaré un tubo en el vórtex y, mientras se agita en el vórtex, añadiré mi antígeno gota a gota al adyuvante.Luego, voy a

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

Retardada de hipersensibilidad (DTH) es una reacción inflamatoria mediada por CCR7-T de memoria efectora (TEM) de linfocitos. Aquí se demuestra cómo activar antígenos específicos de células TEM, inducir DTH adoptivos en ratas Lewis y controlar la respuesta inflamatoria.

Inducción y Seguimiento de Adopción de hipersensibilidad retardada en ratas

Aquí se demuestra un método para inducir y registrar el progreso de un retraso de tipo de hipersensibilidad (DTH) la reacción en el oído de la rata. Esto es seguido por una demostración de la elaboración de tejidos de ratas oído para la imagen de dos fotones de la respuesta del efector / memoria de células T.

Imágenes de las células efectoras T de memoria en el oído después de la inducción de DTH adoptivos

Este video muestra la forma de inducir hipofisitis autoinmune en ratones SJL y la forma de evaluar su gravedad por la histopatología.

La inducción de la hipofisitis autoinmune experimental en ratones SJL

Se describe un ensayo de diagnóstico valiosa que potencialmente podría ser utilizado para decidir la retirada de la inmunosupresión después del trasplante sin riesgo elevado de rechazo del injerto. El ensayo utiliza los principios de la hipersensibilidad de tipo retardado y proporciona una evaluación precisa de ambos donantes respuestas inmunes efectoras y reglamentarias específicas montados por los destinatarios.

Trans-vivo hipersensibilidad de tipo retardada Ensayo para Antigen Reglamento Específico

Las respuestas alérgicas, caracterizados por la activación de los mastocitos y basófilos, están impulsados ​​por la reticulación de IgE y liberación de mediadores proinflamatorios. Una evaluación cuantitativa de las respuestas alérgicas se puede lograr mediante el uso de colorante azul de Evans para monitorear los cambios en la permeabilidad vascular después de la provocación con alergeno.

Medición anafilaxia local en ratones

Aquí presentamos un nuevo método para medir con precisión las diferencias de temperatura del cuerpo en pasiva Anafilaxia sistémica (PSA) y modelos de ratón de alergia de alimentos utilizando un termómetro infrarrojo. Este procedimiento ha sido duplicado exactamente en resultados anteriores de PSA.

Medición de la temperatura del cuerpo de ratón con termómetro infrarrojo pasiva Anafilaxia sistémica y evaluación de la alergia alimentaria

Describimos un modelo de inmunización in vivo, traslacional de hepatitis en ratones BALB / c que se puede utilizar para estudiar la patogénesis de la hepatitis autoinmune inducida por medicamentos, incluidas las diferencias de sexo observadas en esta enfermedad. Describiremos cómo este modelo demuestra análisis reproducibles utilizando técnicas experimentales in vivo e in vitro.

Inducción de hepatitis autoinmune inducida por fármacos en ratones BALB/c para el estudio de sus mecanismos patógenos

La hipersensibilidad de contacto (CHS) es un modelo experimental murino de dermatitis alérgica de contacto (ACD). El CHS se basa en la sensibilización con hapteno reactivo mediante la pintura de la piel afeitada del pecho y el abdomen, con un posterior desafío de la piel del oído con un hapteno diluido, causando una reacción de hinchazón que se evalúa de varias maneras.

Hipersensibilidad de contacto como modelo murino de dermatitis alérgica de contacto

El estudio demuestra el papel de la piel en la modulación de las respuestas inmunitarias en ratones a través de la inmunización epicutánea (EC). La inmunización de la AE con un antígeno proteico puede suprimir las respuestas inmunitarias en la hipersensibilidad de contacto o revertir la supresión inducida por la piel cuando se combina con patrones moleculares asociados a patógenos. La inmunización anticonceptiva anticonceptiva (AE) se muestra prometedora como un enfoque eficaz y sin agujas para...

Modelo murino de inmunomodulación inducida epicutáneamente

Esfuerzos para aislar a la subunidad catalítica de la telomerasa, TERT, en cantidades suficientes para realizar estudios estructurales, han tenido un éxito limitado desde hace más de una década. En este sentido, los actuales métodos para el aislamiento de la recombinación del TERT Tribolium castaneum...

En la reconstitución in vitro de los activos T. castaneum telomerasa

Aprende a inducir hipersensibilidad de tipo retardado activa en ratas Lewis usando una emulsión de antígeno KLH en adyuvante de Freund. Este método permite monitorear respuestas inflamatorias mediante mediciones de edema en modelos animales de inmunología.

Inducción y seguimiento de activos de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) en ratas

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