Expresión génica mediante electroporación unicelular en cultivos de cortes de hipocampo de ratón

Comience con una rebanada de hipocampo de un cerebro de ratón cultivado en un inserto de cultivo en un plato.

Corte el inserto que contiene la rebanada y asegúrelo en una cámara de electroporación bajo un microscopio.

Perfunda la cámara con un tampón que contenga un bloqueador de canales de sodio dependiente de voltaje para inhibir la sobreexcitación y prevenir la toxicidad celular.

Coloque una pipeta que contenga plásmidos con el gen de interés cerca de la rebanada.

Mantenga la presión positiva para evitar la obstrucción de la pipeta mientras se acerca a una neurona del hipocampo objetivo hasta que se forme un hoyuelo en la membrana.

Cambie a presión negativa para crear un sello con la membrana.

Alterne entre presión positiva y negativa para minimizar el daño celular.

Aplique un pulso de electroporación para permeabilizar transitoriamente la membrana, facilitando la entrada de plásmidos.

Retire la pipeta mientras mantiene la presión positiva y repita la electroporación para las neuronas diana vecinas.

Transfiera la rebanada electroporada a un inserto nuevo e incube para permitir la expresión del gen de interés.

Para preparar cultivos en rodajas para la electroporación, transfiera los insert