Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:12 min. • November 28th, 2025
Comienza con un tubo colocado dentro de una cámara anaeróbica que contiene un medio rico en nutrientes y una fibra fermentable prehidratada.
Las condiciones de privación de oxígeno dentro del tubo imitan el ambiente anaeróbico del colon humano.
A continuación, añade una muestra hecesal diluida y homogeneizada que contenga microbios intestinales al tubo e incubala.
Invierte regularmente el tubo para mezclar los microbios con la fibra.
Durante la incubación, los microbios metabolizan y fermentan la fibra de forma anaeróbica, produciendo ácidos grasos de cadena corta y otros metabolitos, lo que reduce el pH del medio.
Recoge alícuotas de la mezcla fermentada a intervalos regulares para monitorizar la producción de metabolitos y comprobar su pH.
Centrifuga las alicuotas a bajas temperaturas para separar la biomasa microbiana en un pellet.
Transfiere el sobrenadante que contiene los metabolitos y los ácidos grasos de cadena corta a un tubo nuevo.
Congelar tanto la biomasa microbiana como el sobrenadante en nitrógeno líquido.
Finalmente, almacenar las muestras a baja temperatura para su análisis posterior.
Mantén los tubos inoculados a 37 grados Celsius dentro de la cámara anaeróbica, e invierte suavemente una vez cada hora para volver a suspender las fibras y el inóculo. Después de 3, 6, 9 o 24 horas, saca la cantidad adecuada de medio fermentado y centrifuga las muestras a 14.000 veces g durante 10 minutos a cuatro grados Celsius.
Congela inmediatamente el sobrenadante y el pellet en nitrógeno líquido, luego tras la congelación rápida, almacena el sobrenadante para el análisis de ácidos grasos de cadena corta y el pellet para el análisis del microbioma, a menos 80 grados Celsius.