Name: Organotípicos culturas rebanada hipocampo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-03T17:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Aprende a cultivar rebanadas organotípicas de hipocampo preservando su arquitectura celular durante dos semanas. Este método permite estudiar la función hipocampal en neurociencia con integridad tisular.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Este trabajo fue financiado por el NINDS - NIH R01NS060756

1. Antes de iniciar la preparación de cortes de hipocampo. <ol><li> Preparar la máquina de cortar el tejido mediante la colocación de una lámina de teflón y el montaje de un disco nuevo. </li><li> Limpie el cultivo de tejidos (TC) capucha con etanol 70% y establecer el interior microscopio de disección. Esterilizar el capó, un microscopio, un cortador de tejido y todos los instrumentos de disección durante 15 minutos con luz UV. </li><li> Preparar seis placas de TC. Añadir 750 medios de comunicación l cultura rebanada (SCM) por pozo y colocar insertos de cultivo de células en cada pocillo. Asegúrese de que las membranas son completamente mojado sin burbujas por debajo. Coloque las placas en la incubadora a 35 ° C gaseada, con 5% de CO 2 hasta que se necesite. </li><li> Verter 50 ml de baja Na + ACSF (disección de solución) en un vaso de 100 ml y colocarlo en la mezcla de hielo y sal. La burbuja de la baja de Na + ACSF con un 5% de CO 2 / 95% O 2 hasta que cambia de color y formas ACSF una mezcla de lechada de la solución congelada y líquidos (10-20 min). </li><li> Obtener una rata P5-P7 cachorro. Hasta tres crías se pueden utilizar. </li></ol> 2. Rebanadas de preparación del hipocampo. <ol><li> Cortar la cabeza del animal con una tijera filosa. Cortar la piel y exponer el cráneo. Abrir el cráneo por el corte de lado a lado a lo largo de la línea de interaural y después a lo largo de la sutura sagital con unas tijeras pequeñas. Un corte opcional de lado a lado en la parte delantera se puede hacer para facilitar la eliminación de los huesos y la exposición del cerebro. Saque el cerebro rápidamente con una cuchara de espátula redondeada micro y lo coloca en el lodo de la disección de solución a enfriar por aproximadamente 1 minuto. Vierta unos 10 ml de solución de disección fría en un plato de 60 mm y la transferencia del cerebro del vaso al plato. El cerebro debe ser cubierto con la disección de una solución. </li><li> Bajo el microscopio de disección: Coloque el cerebro y mantenerlo en la línea media con la pinza de disección pegada a la parte inferior de la placa de 60 mm. Use la herramienta de hipocampo de disección para separar los hemisferios del cerebro medio, dejando de lado. Los hipocampos son expuestos en cada hemisferio. Luego, suavemente saque el hipocampo con el hipocampo, la disección de la herramienta. Utilice la aguja de disección para aislar completamente el hipocampo y la limpieza tanto como sea posible. </li><li> Con una punta de cortado de un filtro P1000 punta de pipeta, Aspire con cuidado el hipocampo y su transferencia a la hoja de teflón en la máquina de cortar el tejido. La posición del hipocampo en su lado cóncavo. </li><li> Alinear a la perpendicular de hipocampo de la hoja para obtener cortes coronales y drenar el exceso de líquido. </li><li> Cortar el hipocampo cada 400 micras. </li><li> Vierta unos 10 ml de frío SMC en un plato de 60 mm y la transferencia de rodajas de hipocampo de la máquina de cortar con otro cortó P1000 filtro de la boquilla y SCM frío. Evite hacer burbujas. </li><li> Con la ayuda de una espátula de iris y una espátula recta suavemente separar las rodajas de unos de los otros. </li><li> Separado rodajas bien definidos y en buen estado de las lonjas de daños. </li></ol> 3. Las rebanadas de hipocampo Cultura <ol><li> Lleve las placas de seis pozos con SMC y las inserciones de cultivo de células de la incubadora. Con la ayuda de otro cortó P1000 punta del filtro, la transferencia de porciones individuales en la membrana. Coloque rebanadas de 5.4 por membrana. Tenga cuidado de no colocar las rodajas o bien cerca de la pared de inserción o cerca unos de otros. Cuando es necesario, use una espátula para separar las rebanadas del iris. Retire el exceso de medio. Toque rodajas lo menos posible una vez que están en la membrana. </li><li> Mover la placa posterior a la incubadora y la cultura a 35 ° C y CO 2 al 5%. </li><li> Cambiar SMC cada 48 horas dentro de la campana TC por la aspiración del SMC con una pipeta Pasteur. Añadir 750 l de agua dulce precalentado SMC por pozo. Asegúrese de que no se forman burbujas en la membrana. </li></ol> 4. Soluciones <ol><li> Bajo Na + ACSF - Solución de disección de las culturas rebanada Para desionizada y estéril H 2 O añadir: <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Por 500 ml </td><td> Para 1000 ml </td><td> La concentración final </td></tr><tr><td> CaCl2 (1 M) </td><td> 0,5 ml </td><td> 1 mL </td><td> 1 mM </td></tr><tr><td> D-glucosa </td><td> 0,901 g </td><td> 1,802 g </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 0,149 g </td><td> 0,298 g </td><td> 4 mM </td></tr><tr><td> MgCl 2 (1 M) </td><td> 2,5 ml </td><td> 5 ml </td><td> 5 mM </td></tr><tr><td> NaHCO3 </td><td> 1,092 g </td><td> 2,184 g </td><td> 26 mM </td></tr><tr><td> Sacarosa </td><td> 40 g </td><td> 80 g </td><td> 234 mm </td></tr><tr><td> Solución de rojo fenol al 0,5% en DPBS </td><td> 0,5 ml </td><td> 1 mL </td><td> 0,1% v / v </td></tr></tbody></table> Mix ~ 30 min Sterilize por paso a través de filtro de 0.22μm Alícuotas de 50 ml tomar y almacenar a 4 ° C no más de 2 meses. </li><li> Rebanada de medio de cultivo (SCM) <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Por 500 ml </td><td> Para 1000 ml </td><td> La concentración final </td></tr><tr><td> MEM medio Eagle </td><td> 4,2 g </td><td> 8,4 g </td><td> 8,4 g / l </td></tr><tr><td> Suero de caballo inactivado por calor </td><td> 100 ml </td><td> 200 ml </td><td> 20% </td></tr><tr><td> L-Glutamina (200 mM) </td><td> 2,5 ml </td><td> 5 ml </td><td> 1 mM </td></tr><tr><td> CaCl2 (1 M) </td><td> 0,5 ml </td><td> 1 mL </td><td> 1 mM </td></tr><tr><td> MgSO 4 (1 M) </td><td> 1 mL </td><td> 2 mL </td><td> 2 mM </td></tr><tr><td> La insulina (1 mg / ml), disuelta en HCl 0,01 N </td><td> 0,5 ml </td><td> 1 mL </td><td> 1 mg / l </td></tr><tr><td> El ácido ascórbico, la solución (25% w / v) </td><td> 0.024 ml </td><td> 0.048 ml </td><td> 0,00125% </td></tr><tr><td> D-glucosa </td><td> 1.16g </td><td> 2.32g </td><td> 13 mM </td></tr><tr><td> NaHCO3 </td><td> 0,22 g </td><td> 0,44 g </td><td> 5,2 mM </td></tr><tr><td> Hepes </td><td> 3.58g </td><td> 7.16g </td><td> 30 mM </td></tr></tbody></table> Mezcle hasta que esté completamente disuelta y llevar a temperatura ambiente. Ajustar el pH a 7.27 a 7.28 con NaOH 1 N Medir la osmolaridad. Ajuste a 320 mmol / kg con agua desionizada y esterilizada H 2 O. Esperan agregar aproximadamente 25 a 40 mL. Compruebe la osmolaridad de nuevo. *** PH puede cambiar un poco mientras se ajusta la osmolaridad, esto está bien, es más importante que la osmolaridad está en el rango correcto (317-323). Esterilizar por paso a través de filtro de 0,22 micras. Hacer alícuotas de 20 ml y almacenar durante un máximo de dos o tres semanas a 4 ° C. Acciones Gluatamine: preparar a una concentración de 200 mM y almacenar a -20 ° C en alícuotas de 2,5 ml. De valores de ácido ascórbico: preparar a una concentración de 25% (w / v) y almacenados a -20 ° C en alícuotas de 100 mL. </li></ol> 5. Los resultados representativos: Rebanadas debe verse blanca bajo un microscopio de disección sin manchas negro y bien definidos y en buen estado CA1, CA3 y giro dentado regiones. La contaminación bacteriana se ve fácilmente como el movimiento negro moteado en el medio o la turbidez de la SCM. Cuando se coloca bajo el microscopio, la superficie de la porción debe verse limpio después de 4 días de cultivo con los cuerpos de células claras y visiblemente. Si no hay cuerpos de células claras se ven y muchos residuos que cubre la superficie después de 4 días, entonces no es un trozo sano.

<ol><li>Martin, S. J., Grimwood, P. D., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+and+memory%3A+an+evaluation+of+the+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity and memory: an evaluation of the hypothesis.</a> Annu Rev Neurosci. 23, 649-711 (2000).</li>
<li>Bliss, T. V., Collingridge, G. L., Morris, R. G. I. ntroduction <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+potentiation+and+structure+of+the+issue%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Long-term potentiation and structure of the issue.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 358, 607-611 (2003).</li>
<li>Shepherd, G. M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShepherd%2C+GM+%22The+synaptic+organization+of+the+brain%22">The synaptic organization of the brain</a>. , 5th edn, University Press. Oxford. (2004).</li>
<li>Malinow, R., Tsien, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+enhancement+shown+by+whole-cell+recordings+of+long-term+potentiation+in+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Presynaptic enhancement shown by whole-cell recordings of long-term potentiation in hippocampal slices.</a> Nature. 346, 177-180 (1990).</li>
<li>Malinow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+green+fluorescent+protein+%28GFP%29+into+hippocampal+neurons+through+viral+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Introduction of green fluorescent protein (GFP) into hippocampal neurons through viral infection.</a> Cold Spring Harb Protoc. , (2010).</li>
<li>Shi, S., Hayashi, Y., Esteban, J. A., Malinow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subunit-specific+rules+governing+AMPA+receptor+trafficking+to+synapses+in+hippocampal+pyramidal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Subunit-specific rules governing AMPA receptor trafficking to synapses in hippocampal pyramidal neurons.</a> Cell. 105, 331-343 (2001).</li>
<li>Woods, G., Zito, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+gene+gun+bullets+and+biolistic+transfection+of+neurons+in+slice+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of gene gun bullets and biolistic transfection of neurons in slice culture.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Esteban, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PKA+phosphorylation+of+AMPA+receptor+subunits+controls+synaptic+trafficking+underlying+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">PKA phosphorylation of AMPA receptor subunits controls synaptic trafficking underlying plasticity.</a> Nat Neurosci. 6, 136-143 (2003).</li>
<li>Mainen, Z. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-photon+imaging+in+living+brain+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Two-photon imaging in living brain slices.</a> Methods. 18, 231-239 (1999).</li>
<li>Barria, A., Malinow, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subunit-specific+NMDA+receptor+trafficking+to+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Subunit-specific NMDA receptor trafficking to synapses.</a> Neuron. 35, 345-353 (2002).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> J Neurosci Methods. 37, 173-182 (1991).</li>
<li>Simoni, A. D. e, Griesinger, C. B., Edwards, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+rat+CA1+neurones+in+acute+versus+organotypic+slices%3A+role+of+experience+in+synaptic+morphology+and+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Development of rat CA1 neurones in acute versus organotypic slices: role of experience in synaptic morphology and activity.</a> J Physiol. 550, 135-147 (2003).</li>
</ol>

Este método se basa en el método descrito por primera vez por Stoppini et al. 11 y ofrece una manera rápida a las rebanadas de hipocampo cultura. El aspecto más importante de este protocolo es la de mantener las rebanadas estéril, por lo tanto, es fundamental utilizar técnicas apropiadas y estéril para desinfectar y esterilizar adecuadamente todo el material en contacto con el tejido. Fuentes diferentes sueros pueden influir en la calidad de los cortes. Recomendamos proba...

<table><tbody><tr><td>Insertos para cultivo celular</td><td>EMD Millipore</td><td>PICM03050</td><td></td></tr><tr><td>Placas de 6 pocillos</td><td>BD Biosciences</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Cortador de tejidos</td><td>Stoelting Co.</td><td>51425/51415</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio</td><td>Olympus Corporation</td><td>SZX7-ILLD2-100</td><td></td></tr><tr><td>Herramienta para disección de hipocampo</td><td>F.S.T.</td><td>10099-15</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras grandes de uso general. Perfección</td><td>F.S.T.</td><td>37500-00/37000-00 diestras/zurdas</td><td></td></tr><tr><td>Espátula de iris</td><td>F.S.T.</td><td>10093-13</td><td></td></tr><tr><td>Espátula recta</td><td>F.S.T.</td><td>10094-13</td><td></td></tr><tr><td>Microespátula cuchara redondeada</td><td>VWR international</td><td>57949-039</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de corte simple para disección</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>72946</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas para disección</td><td>Dumont</td><td>#2</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras pequeñas para disección</td><td>F.S.T.</td><td>14060-10</td><td></td></tr><tr><td>Medio MEM Eagle</td><td>Cellgro</td><td>50-019 PB</td><td></td></tr><tr><td>Suero de caballo inactivado por calor</td><td>Invitrogen</td><td>26050-88</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamina (200 mM)</td><td>Invitrogen</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; (1 M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3881</td><td></td></tr><tr><td>MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; (1 M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2773</td><td></td></tr><tr><td>Insulina (1 mg/ml), disuelta en HCl 0,01 N</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I0516</td><td></td></tr><tr><td>Ácido ascórbico, solución (25 %)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4544</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5767</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6014</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7523</td><td></td></tr><tr><td>Sacarosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S5016</td><td></td></tr><tr><td>Solución de rojo de fenol al 0,5 % en DPBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0290</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td></td></tr><tr><td>MgCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; (1 M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td></td></tr></tbody></table>

organotípicos culturas rebanada hipocampo

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

El hipocampo, un componente del sistema límbico, juega un papel importante en la memoria a largo plazo y la navegación espacial 1. Las neuronas del hipocampo puede modificar la fuerza de sus conexiones después de breves períodos de fuerte activación. Este fenómeno, conocido como potenciación a largo plazo (LTP) puede durar horas o días y se ha convertido en el mecanismo mejor candidato para el aprendizaje y la memoria 2. Además, la anatomía bien definida y la conectividad del hipocampo 3 se ha convertido en un sistema modelo clásico para estudiar la transmisión sináptica y la plasticidad sináptica 4. A medida que nuestra comprensión de la fisiología de las sinapsis del hipocampo creció y los jugadores molecular se identificó, la necesidad de manipular las proteínas sinápticas se convirtió en un imperativo. Organotípicos culturas del hipocampo ofrecen la posibilidad de la manipulación genética fácil y precisa la intervención farmacológica, sino mantener la organización sináptica que es fundamental para comprender la función de la sinapsis en un contexto más natural que los métodos de rutina de la cultura neuronas disociadas. Aquí presentamos un método para preparar y cultura rodajas de hipocampo que se pueden adaptar fácilmente a otras regiones del cerebro. Este método permite un fácil acceso a los cortes para la manipulación genética por métodos diferentes como la infección viral o biolística 5,6 7. Además, los cortes pueden ser fácilmente recuperados para los ensayos bioquímicos 8, o transferirse a microscopios para imágenes 9 o 10 experimentos electrofisiológicos.

Se describe un método para preparar organotípicos rodajas de hipocampo que se pueden adaptar fácilmente a otras regiones del cerebro. Cortes de cerebro se ponen en membranas porosas y medios de cultivo se le permite formar una interfase. Este método conserva la arquitectura bruto del hipocampo durante un máximo de 2 semanas en la cultura.

Organotípicos culturas rebanada hipocampo

El hipocampo, un componente del sistema límbico, desempeña funciones importantes en la memoria a largo plazo y la navegación espacial 1. Las neuronas hipocampales pueden modificar la ...

El objetivo general de este procedimiento es cultivar cortes organotípicos del hipocampo. Esto se logra primero mediante la disección del hipocampo. El segundo paso del procedimiento consiste en seccionar el hipocampo.El tercer paso del procedimiento consiste en separar y clasificar las secciones del hipocampo. El paso final del procedimiento es cultivar las secciones del hipocampo. En última instancia, se pueden obtener resultados que muestran secciones orgánicas sanas del hipocampo mediante la visualización con un microscopio de disección o un microscopio.Hola, mi nombre es Jimena Opitz y soy científica investigadora en el laboratorio del Dr. Andres bar en la Universidad de Washington. En Seattle, demostraré el procedimiento para el cultivo de cortes organotípicos del hipocampo, LICs. Por lo general, las personas nuevas en este método tendrán dificultades debido a la necesidad de diseccionar y cortar rápidamente los hipocampos y de prevenir la contaminación, la solución de disección estéril y el cultivo de cortes.El medio puede prepararse hasta tres semanas de antemano y almacenarse a cuatro grados Celsius como se describe en el protocolo escrito. Antes del corte del hipocampo, p

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

El organoptypic modelo del hipocampo es una parte la...

El organotípicos rebanada hipocampo modelo de cultivo para el examen de la lesión neuronal

Este video muestra un método para preparar cultivos organotípicos de cortes de hipocampo a partir del cerebro de un cachorro de rata. Describe los pasos involucrados en la disección del hipocampo, el corte y las condiciones de cultivo necesarias para promover la viabilidad y el crecimiento celular en las rodajas del hipocampo, generando en última instancia cultivos de cortes organotípicos.

Preparación de cultivos organotípicos de cortes a partir del hipocampo de un cachorro de rata

Se describe una técnica para estudiar las células NG2 y los oligodendrocitos utilizando un sistema de cultivo en cortes del prosencéfalo y el cerebelo.  Este método permite examinar la dinámica de proliferación y diferenciación de las células dentro del linaje de oligodendrocitos, donde el entorno extracelular puede manipularse fácilmente mientras se mantiene la citoarquitectura tisular.

Culturas Organotípicos Slice para Estudiar Oligodendrocyte Dinámica y mielinización

registros de pares son registros simultáneos de pinza de parche de célula completa de dos neuronas conectadas sinápticamente, lo que permite una caracterización electrofisiológica y farmacológica precisa de las sinapsis entre neuronas individuales. Aquí describimos la metodología detallada y los requisitos para establecer esta técnica en cultivos organotípicos de cortes de hipocampo en cualquier laboratorio equipado para electrofisiología.

Pareadas Grabaciones de células enteras en organotípicos de hipocampo rebanadas

Se presenta un protocolo para cultivos de cortes organotípicos entorinino-hipocampales, que permite reproducir muchos aspectos de la lesión cerebral isquémica. Al estudiar los cambios en la neurovasculatura además de los cambios en las neuronas, este protocolo es una herramienta versátil para estudiar los cambios plásticos en el tejido neural después de una lesión.

El análisis de la remodelación neurovascular en cultivos de cortes organotípicos entorinino-hipocampales

Aquí se describe una técnica para el estudio de la neurogénesis postnatal del hipocampo mediante la técnica de cultivo de cortes organotípicos. Este método permite la manipulación in vitro de la neurogénesis adulta y permite la aplicación directa de agentes farmacológicos para el hipocampo cultivadas.

Culturas organotípicos rebanada de Estudios de Postnatal neurogénesis

Las culturas Organotypic rebanada hippocampal (OHSC) representan un modelo en vitro que simula muy bien la situación en vivo . Aquí describimos un vibratome base mejorado rebanar protocolo para obtener rodajas de alta calidad para uso en la evaluación del potencial neuroprotector de nuevas sustancias o el comportamiento biológico de las células tumorales.

Culturas de rebanada Hippocampal Organotypic como un modelo para estudio neuroprotección e invasividad de las células tumorales

Describimos un protocolo para la expresión específica de tipo celular del sensor basado en FRET genéticamente codificado ATeam1.03YEMK en cultivos de rebanadas organotípicas del forebrain del ratón. Además, mostramos cómo utilizar este sensor para imágenes dinámicas de los niveles de ATP celular en neuronas y astrocitos.

Imagen de ATP intracelular en rebanadas de tejido organotípico del cerebro del ratón utilizando el sensor basado en FRET ATeam1.03YEMK

Aquí, describimos la preparación de las rebanadas organotípicas de la corteza rinal-hipocampo. Bajo una privación gradual y controlada del suero, estas rebanadas representan la evolución epiléptica-como acontecimientos y se pueden considerar un modelo ex vivo del epileptogenesis. Este sistema representa una excelente herramienta para monitorear la dinámica de la actividad espontánea, así como para evaluar la progresión de las características neuroinflamatorias a lo largo del curso de la...

Un Modelo De Epileptogénesis En La Corteza Rinal-Hipocampo Organotípica Slice Cultivos

Este protocolo describe la preparación de rodajas horizontales de corteza hipocampal-entorrinaal (HEC) de ratones que exhiben actividad espontánea de ondulación de onda aguda. Las rodajas se incuban en una cámara de retención de interfaz simplificada y las grabaciones se realizan en condiciones sumergidas con líquido cefalorraquídeo artificial de flujo rápido para promover la oxigenación tisular y la aparición espontánea de la actividad a nivel de red.

Corte cerebral de ratón agudo para investigar la actividad espontánea de la red de hipocampo

Este artículo tiene como objetivo describir un protocolo sistemático para obtener rebanadas cerebrales hipocampales horizontales en ratones. El objetivo de esta metodología es preservar la integridad de las vías de fibra del hipocampo, como la trayectoria perforante y el tracto de fibra musgo para evaluar los procesos neurológicos relacionados con el giro desánido.

Rebanadas hipocampales horizontales del cerebro del ratón

Aprende a cultivar rebanadas organotípicas de hipocampo preservando su arquitectura celular durante dos semanas. Este método permite estudiar la función hipocampal en neurociencia con integridad tisular.

Organotípicos culturas rebanada hipocampo

Explorar más videos