Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:07 min. • August 31st, 2026
Tomar un plato de microinyección con una gota de medio de cultivo de embriones en el centro, cubierto con aceite mineral para prevenir la evaporación.
Coloque el plato bajo un microscopio invertido.
Coloque una capilar de microinyección y una pipeta de sujeción en un sistema de micromanipulador bajo el microscopio.
La micropipeta de inyección se carga con una suspensión de vectores lentivirales que portan el transgén.
Luego, transfiera embriones de rata fertilizados al medio.
Sujete un embrión utilizando la pipeta de sujeción aplicando succión.
Bajo mayor aumento, inserte la capilar de microinyección a través de la cubierta de glucoproteínas extracelulares del embrión, la zona pelúcida, e inyecte la suspensión de lentivirus en el espacio perivitelino.
Luego, transfiera los embriones inyectados a un plato de cultivo e incube.
El virus ingresa al embrión y libera su genoma que contiene el transgén en el citoplasma.
Posteriormente, se transcribe inversamente a ADN e integra en el genoma del embrión, incorporando el transgén.
Los embriones transducidos ya están listos para su procesamiento.
Para la microinyección de vectores lentivirales bajo la zona pelúcida de embriones en estadio de una sola célula, utilice un extractor de pipetas para preparar capilares de vidrio borosilicato para microinyección con un filamento. Después de cada cambio de filamento o cada vez que se utilice un nuevo capilar de vidrio, realice una prueba de rampa para establecer los parámetros óptimos.
A continuación, utilice una punta microloader para cargar aproximadamente dos microlitros de solución de lentivirus recién descongelada por pipeta de microinyección bajo una campana de flujo laminar con seguridad biológica. Añada una gota de 100 microlitros de medio M2 al centro de la tapa de un plato de Petri de 60 milímetros. Cubra el medio con aceite mineral y monte la pipeta de sujeción y la capilar de microinyección cargada con virus en un micromanipulador.
Coloque el plato de microinyección bajo un microscopio invertido y transfiera de 15 a 20 embriones de un solo célula al gota de M2 en el plato de microinyección. Capture un embrión con la pipeta de sujeción y utilice un aumento de 400 veces y la capilar de vidrio para inyectar la solución lentiviral bajo la zona pelúcida hacia el espacio perivitelino, manteniendo la capilar bajo la zona pelúcida durante un momento después de que se haya administrado el virus. Una vez que todos los embriones hayan sido inyectados, use una pipeta fina para devolver las células inyectadas al plato de cultivo y regrese el plato al incubador de cultivo celular hasta su implantación.