Name: Aplicación de curado con luz Resina Adhesivo Dental para los electrodos de montaje o sondas de microdiálisis en experimentos crónica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 30 s
Description: Aprende a aplicar resina dental fotocurable para montar electrodos o sondas de microdiálisis en experimentos crónicos. Este método permite el pegado directo al cráneo sin tornillos, reduciendo inflamación y mejorando la estabilidad en neurociencia.

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Agradecemos a nuestros colegas en RIKEN-BSI por su amable apoyo y consejos durante este fructífero trabajo. Me gustaría expresar mi sincero agradecimiento al profesor Shigemi Mori, profesor G frontera Juh Qué, los Dres. Kiyoji Matsuyama, Katalin AK Kesi y rp d Dobolyi que me aconsejó que método de estudio de microdiálisis en el curso de postgrado en la Universidad de Postgrado para Estudios Avanzados, Japón. Finalmente, agradecemos al Sr. Chris Sarnecky y el Dr. Akitsugu Takasu por su apoyo en la grabación de vídeo.

Paso 1. Preparación de la implantación de la sonda <ol><li> Anestesia (no se muestra en el video) Anestesiar a cada ave con una inyección intraperitoneal de ketamina (12,5 mg / kg de peso corporal) y xilazina (25 mg / kg) de la mezcla para producir un nivel constante de anestesia quirúrgica. </li><li> Fijar la cabeza a un marco estereotáxico El uso de xilocaína (TM) jalea para reducir los dolores locales de bares de presión del oído &quot;. La cabeza de pájaro se fija en un aparato estereotáxico que consiste en bares y oído el titular de pico que tiene la cabeza en un ángulo de 45 °. Durante la cirugía estereotáxica para la implantación, calentar el cuerpo del ave por plataforma quirúrgica con control térmico (temperatura = 34 ~ 36 ° C). </li><li> Desinfectar el área quirúrgica Desinfectar el campo quirúrgico con Isodine (TM) antes de la cirugía. </li></ol> Paso 2. Posicionamiento estereotáxico <ol><li> Referencia punto de alineación Alinear la sonda ficticia (vidrio micropipeta) a la Lambda (Y punto) y la marca Y-punto con la pipeta llena de tinte. Restantes Dextran-TMR del estudio de seguimiento última se utilizó en el video. </li><li> Incisión de la piel Quite la piel y exponer la superficie del cráneo. Luego, limpie la superficie del cráneo con hisopos de algodón. </li><li> Colocación de la cánula dummy (en sentido horizontal) Mover la cánula maniquí al sitio de destino (AP eje y la coordinación lateral) </li><li> Craneotomía pequeña y la incisión de la duramadre. Use unas pinzas finas para craneotomía y una fina aguja de inyección (30 G) para las incisiones de la duramadre. Luego, limpie la superficie del cráneo. </li><li> Posicionamiento final (implantación) de la cánula maniquí Localizar la punta de la cánula guía en el 0,30 mm por encima de la sonda de microdiálisis intencionados región de destino. Por último, limpiar la superficie del cráneo, de nuevo, porque una superficie limpia y seca se requiere para la unión dura. </li></ol> Paso 3. El tratamiento previo de la superficie craneal (El procedimiento similar para la &quot;restauración de obturación directa&quot; del producto dental se emplea). <ol><li> Primer tratamiento <ol><li> Mix PRIMAR A con B líquido en un plato. </li><li> Aplique la mezcla en la superficie del cráneo con un pequeño cepillo. </li><li> Dejar durante 30 segundos. </li><li> Seca con corriente de aire templado. (No se lave.) </li></ol></li><li> Aplicación de agente de unión <ol><li> Aplicar el adhesivo sobre la superficie del cráneo con un pequeño cepillo. </li><li> Aplicar una corriente suave de aire. (No se lave.) </li><li> Fotocurado durante 20 segundos. </li></ol></li></ol> Paso 4. Montaje de resina compuesta <ol><li> Montaje de resina con condensador plano Si un condensador normal no está disponible, una espátula de micro-se puede utilizar en su lugar. </li><li> Fotopolimerización </li><li> Incremental de montaje Incremental de montaje se recomienda para asegurar la reacción completa de la resina. Para el montaje incremental, aplique adhesivo antes de cada montaje. </li><li> Molde de la resina compuesta y la luz de curado de endurecimiento final. </li><li> Final de la cirugía </li></ol> Limpie el área quirúrgica, se aplican los antibióticos (pomada de gentamicina), y retire el animal de la llama estereotáxica. Entonces, mantener al animal en una cámara de termo-control (temperatura = 33-35 ° C) para la recuperación postanestésica. Como se muestra en el video, no se observó un comportamiento anormal en cualquiera de los animales al día siguiente después de la cirugía.

<ol><li>Adell, A., Artigas, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+Brain+microdialysis%3A+Principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22%5BJournal%5D)">In vivo Brain microdialysis: Principles and applications.</a> In Vivo Neuromethods: Neuromethods. Boulton, A., Baker, G., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Kendrick, K. Microdialysis in large unrestrained animals: neuroendocrine and behavioral studies of acetylcholine, amino acid, monoamine and neuropeptide release in the sheep. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKendrick%2C+K+%22Microdialysis+in+the+Neuroscience%22">Microdialysis in the Neuroscience</a>. Robinson, T., Justice, J., Bateson, A. 7, Elsevier. Amsterdam. 327-348 (1991).</li>
<li>Oakley, B., Schafer, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOakley%2C+B+%22Experimental+Neurobiology%3A+A+laboratory+Manual%22">Experimental Neurobiology: A laboratory Manual</a>. , University of Michigan Press. Ann Arbor. (1978).</li>
<li>Okumura, T., Yamashita, Y., Okanoya, K., Tani, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+of+the+sensori-motor+nucleus+NIf+in+generation+of+complex+syntactical+song+in+the+Bengalese+Finch+I.+A+Biological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Soc.+Neurosci+Abst%22%5BJournal%5D)">Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese Finch I. A Biological study.</a> Soc. Neurosci Abst. 33, (2007).</li>
<li>Boulton, A., Baker, G. The relation of brain electrical activity to behavior. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBoulton%2C+A+%22In+Vivo+Neuromethods%3A+Neuromethods%22">In Vivo Neuromethods: Neuromethods</a>. Robinson, T., Bateson, A. 32, Humana Press Inc. Totowa. 325-357 (1998).</li>
<li>Yamashita, Y., Okumura, T., Okanoya, K., Tani, J. Function of the sensori-motor nucleus NIf in generation of complex syntactical song in the Bengalese finch. Proceeding of the 2nd International Symposium on Mobiligence, , 101-104 (2007).</li>
</ol>

Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices para la experimentación con animales del cerebro instituto de ciencias, RIKEN (RIKEN-BSI) y de los animales del instituto del comité de ética aprobado.

En comparación con la aplicación de resinas acrílicas convencionales auto curación, la técnica introducida tiene varias ventajas importantes: 1. Contacto directo: Acrílico autocurado se inserta en el hueso por un tiempo pero no se adhiere a los huesos. Por lo tanto, los tornillos de anclaje están obligados a fijar una base de montaje (ver Figura 2a). Por el contrario, la resina de fotopolimerización pueden unirse al hueso directamente, de forma que los tornillos no son necesarios (Figura 2B). Por lo tanto, el tamaño de...

1A fotografía muestra a la sonda de microdiálisis (a), una tuerca (b) y una cánula guía (c). En esta foto, la cánula guía se encuentra rodeado por una resina dental que se adhiere al cráneo directamente. Foto B muestra un pájaro durante la perfusión de drogas. En la parte superior de la cabeza, hay una sonda de microdiálisis que está conectado a un tubo de Tefron bien. Las barras de escala = 1 cm de A y 2 cm de B, respectivamente. <img src="http://www.jove.com/files/249_2008_8_26_3/249_Figure-01.png" /> Figura 1 - Las fotografías de una sonda de microdiálisis (A) y un pájaro durante la perfusión de drogas (B)

aplicación de curado con luz resina adhesivo dental para los electrodos de montaje o sondas de microdiálisis en experimentos crónica

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

En los experimentos de grabación crónica, auto-curado de resinas de acrílico dental se han utilizado como una base de montaje de los electrodos o sondas de microdiálisis. Dado que estos acrílicos no se unen a los huesos, tornillos han sido utilizados como anclajes. Sin embargo, en los pequeños animales de experimentación, como los pinzones o el ratón, sus cráneos son muy frágiles y no se puede sostener con éxito los anclajes. En este informe, proponemos una nueva aplicación de la luz de curado de resinas dentales base de montaje de los electrodos o sondas de microdiálisis en experimentos crónicos. Este material permite contacto directo con el cráneo. Por lo tanto, los tornillos de anclaje no son necesarias y campo quirúrgico se reduce considerablemente. Las experiencias pasadas muestran que el efecto de la vinculación mantiene más de 2 meses. Ventana de resina convencional de tiempo en que los materiales son flexibles y viables, a pocos minutos. Sin embargo, la ventana de tiempo de trabajo de estos adhesivos dentales es mucho más amplio y ajustable.

En este informe, proponemos una nueva aplicación de la luz de curado de resinas dentales base de montaje de los electrodos o sondas de microdiálisis en experimentos crónicos. Este material permite contacto directo con el cráneo.

Aplicación de curado con luz Resina Adhesivo Dental para los electrodos de montaje o sondas de microdiálisis en experimentos crónica

En los experimentos de registro crónico, se han utilizado resinas acrílicas dentales de autocurado como base de montaje para electrodos o sondas de microdiálisis. Dado que estas...

En experimentos crónicos de electrofisiología o microdiálisis, se ha utilizado ampliamente la resina dental autopolimerizable como base de montaje para electrodos o sondas de microdiálisis. Dado que estos acrílicos no se adhieren a la superficie ósea, se han empleado tornillos como anclajes. Sin embargo, en animales pequeños experimentales, como FIEs o ratones, el cráneo es muy frágil y no puede sostener con éxito los anclajes.A veces, estos tornillos de tobillo causan infección e inflamación del tejido. En este informe, proponemos una nueva aplicación de la resina dental de curado inmediato como base elevada para su montaje. Este material permite la unión directa al cráneo.Por lo tanto, no se requieren tornillos de anclaje y el campo quirúrgico puede reducirse considerablemente. El peso total de una sonda, una cánula guía, un gabinete y una base de montaje era inferior a un gramo. Experiencias previas muestran que el efecto de unión se mantiene durante más de dos meses.Esta técnica también puede utilizarse con otros animales de experimentación como ratones, peces, etc. Se grabaron en video dos implementaciones en dos barras. En esta demostración en video, se seleccionaron y utilizaron las mejores tomas en cada paso del protocolo.Estos están separados estereotácticamente y la cámara de recuperación controlada por verano. Estos son cien instrumentos para cirugía. PR principal a la izquierda y microproblema.Sus accesorios a la derecha. Si no hay disponible un programa principal, se puede usar en su lugar una espátula micro. Este es un conjunto de resina dental de curado derecho.El cebador AP y un agente de unión se guardaron en estos frascos de medicamento. Elegimos este producto porque es un sistema autoreactivo y de curado dual. Si elige alternativas, modifique el procedimiento detallado según las instrucciones del producto; el instrumento con forma de pistola en el lado izquierdo es una unidad de curado con luz visible.Puede ensamblar una unidad de luz LED artesanal como se muestra a la derecha. Consulte la documentación para obtener más detalles. A continuación, se indujo anestesia quirúrgica, se eliminó más tejido de la zona quirúrgica y se fijó la cabeza al marco estereotáxico.Antes de la inserción de las EVA, se aplicó DI en las puntas de las EVA para prevenir el dolor. Se fijó la cabeza del animal al marco y se ajustó adecuadamente el ángulo de la cabeza. Se desinfectó el área quirúrgica con yodo, y se colocó una micropipeta de vidrio en el portaelectrodos.Esta micropipeta se utilizó para crear un punto de referencia en un experimento defectuoso. El punto Lambda Y se usó como punto de referencia. Se realizó una pequeña incisión en la piel para exponer el punto de referencia.Marque el lugar con una micropipeta de vidrio llenada con un colorante. Corte la piel para exponer la superficie craneal y limpie la superficie del hueso con un hisopo de algodón para eliminar sangre y humedad. Se requiere una superficie verde y seca para lograr una unión resistente.Después de marcar la posición objetivo, se realizó una craneotomía pequeña con fórceps fino. También se pueden utilizar microfórceps o fórceps para hueso para realizar la craneotomía. Luego, se retiró el microtubo grueso de un soporte y se fijó una cánula o electrodo al soporte.La punta de la cánula guía se alineó con el punto de referencia y luego se movió cuidadosamente hasta el punto objetivo. Se realizó la incisión más pequeña posible en la sustancia gris mediante una inyección con aguja de calibre 30. La cánula guía se desplazó a la posición objetivo.La segunda evaluación de la superficie ósea fue Supp aplicada. Este cebador consiste en los componentes rígidos A y B. Se colocó una gota de cada componente rígido sobre un recipiente y se mezclaron con un pincel. Se aplicó el cebador mediante hisopado en la zona de contacto. La superficie de la cánula guía también se hisopó. Se proporcionó un suave flujo de aire para extender y secar el cebador, se cambió el pincel y se aplicó un agente de unión en la zona. Este agente de unión es sensible a la luz, por lo que debe cubrirse durante el procedimiento. También se pasó un hisopo por la superficie de la cánula guía.Se proporcionó aire suave y se eliminó la luz azul visible para acelerar la reacción química del agente de unión. Se debe utilizar semilla transparente de Coral Naranja para proteger los ojos del operador. No se deben dar a los ojos de los animales una corrección directa si es necesario.Se utiliza un orificio de aluminio para proteger los ojos de los animales. Se aplicó una pequeña cantidad de resina compuesta sobre la superficie craneal y la cánula guía mediante un tapón liso. Luego, se eliminó la luz azul visible para curar la resina durante el montaje incremental.Se aplicó un agente de unión antes de cada montaje. El área quirúrgica se mantuvo en posición correcta continuamente debido a la grabación en video. Sin embargo, es mejor evitar una fijación fuerte porque podría acortar el período de tiempo en el que los materiales son capaces.El montaje incremental y la corrección son recomendables para asegurar la reacción completa del régimen. Puede reformar la forma hasta que sea visible. Se administraron antibióticos o se aplicó menta en el área quirúrgica para prevenir infecciones.Ahora que la cirugía ha finalizado, el adaptador estéreo se soltó del portaelectrodos. Se retiró el adaptador estéreo. En su lugar, se insertó una varilla DAMing y se liberó al animal del marco estereotáxico.Finalmente, el animal fue trasladado a la cámara de control de verano para la recuperación de la anestesia. Fue el día posterior a la cirugía. En comparación con la aplicación de la técnica convencional de curado automático, la técnica introducida presenta varias ventajas importantes.Primero, se une directamente al hueso. El acrílico autorretráctil puede fijarse al hueso mediante alambre, pero no se adhiere al hueso. En contraste, el acrílico fotopolimerizable puede unirse directamente al hueso.Además, se adhiere a algunos materiales, incluyendo plásticos y metales, si se utiliza un imprimador metálico con él. Esta capacidad de unión a materiales variables permite una amplia gama de aplicaciones. En segundo lugar, es fácil de manipular; el tiempo de procesamiento de las resinas convencionales tiene una ventana relativamente corta.En pocos minutos tiene una alta fluidez y no es fácil de manipular rápidamente. Sin embargo, una vez que comienza la reacción química, esta se acelera por el calor exotérmico. El calor y la resina se endurecen en poco tiempo.Las ventanas de tiempo de procesamiento para la resina de curado correcto son significativamente más amplias y ajustables. Básicamente, las resinas permanecen constantemente desde el inicio hasta el momento en que están listas. La tercera reacción curada no genera calor.La reacción de curado de la resina autopolimerizable es exotérmica. Cuando la base de montaje es gruesa, este calor se acumula y causa daño. La reacción del tejido a la resina fotopolimerizable no genera calor y el material es biocompatible.El costo de los materiales y del equipo especializado, como la unidad de luz, puede ser un problema. En el documento complementario presentamos una unidad de luz LED casera que no tiene un costo elevado. Consulte el documento rápido para obtener más detalles.Esta técnica es aplicable a la implementación de electrodos o microsondas en otros animales experimentales, como peces, ratones, conejos, gatos y monos.

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Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

El video muestra un procedimiento para implantar una unidad de electrodo multicanal bidireccional inalámbrica en el cerebro de una rata para grabar y estimular redes neuronales multicanal.

Implante de un sistema inalámbrico de microelectrodos bidireccionales en el cerebro de una rata

Las técnicas tradicionales de fijación de la cabeza han utilizado marcos metálicos unidos al cráneo como interfaz para el aparato de fijación de la cabeza. Este protocolo demuestra una técnica de fijación de la cabeza basada en moldeo de resina acrílica sin marco para tareas de comportamiento en roedores.

Técnica de fijación en el acrílico resina de moldeo basado en Jefe en roedores

Un colorante radiométrica sensible al pH se usa en combinación con microscopía confocal de barrido láser y análisis digital de imágenes para monitorizar el pH extracelular en biofilms dentales, en tiempo real.

Imaging radiométrica de pH extracelular en los biofilms dentales

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En este estudio, se presenta la metodología sobre cómo realizar registros electrofisiológicos in vivo en múltiples sitios a partir de la vía hiperdirecta bajo anestesia con uretano.

Agudo<em&gt; In Vivo</em&gt; Grabaciones electrofisiológicas de potenciales de campo locales y actividad de múltiples unidades de la vía hiperdirecta en ratas anestesiadas

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Un método integrado para crear optrodes electrofisiológicos flexibles y convenientes para el registro in vivo en múltiples regiones

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Protocolo quirúrgico para una ventana craneal grande y resellable que permite grabaciones electrofisiológicas longitudinales y multimodales de la red de modo predeterminado del ratón

Aprende a aplicar resina dental fotocurable para montar electrodos o sondas de microdiálisis en experimentos crónicos. Este método permite el pegado directo al cráneo sin tornillos, reduciendo inflamación y mejorando la estabilidad en neurociencia.

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