Desarrollar ovario de hámster chino anfitrión-ensayos con células de proteínas utilizando la tecnología de membrana acústica de micropartículas

El objetivo general de este procedimiento es crear un inmunoensayo robusto y personalizado para obtener resultados reproducibles con un tiempo de manipulación limitado. Esto se logra preparando primero los componentes de ensayo adecuados. El segundo paso del procedimiento es optimizar el ensayo en función de los parámetros del ensayo.

El tercer paso del procedimiento es configurar el ensayo en la plataforma Vibe simplemente cargando las placas de muestra y reactivos y definiendo el procedimiento de ensayo. Con el software Vibe, el paso final del procedimiento es iniciar el Vibe con el asistente de inicio. En última instancia, se pueden obtener resultados que muestren resultados de inmunoensayos sensibles y reproducibles con anticuerpos personalizados y un tiempo de manipulación limitado mediante el uso de la plataforma Vibe.

La principal ventaja de esta tecnología sobre los métodos existentes, como el de Eli, es que Vibe Workstation proporciona operaciones de alejamiento y datos más reproducibles de acuerdo con los protocolos estándar. Usando NHS Chromogenic, biotina Bio atin, el anticuerpo de captura para unir el anticuerpo biotinilado al estreptococo a las perlas ávidas y magnéticas comienza por vórtice el vial de tira a perlas ávidas y magnéticas durante uno o dos minutos para resuspender pipetear el volumen deseado de perlas en un tubo de fuga y eliminar el estado con la ayuda de un separador magnético. Lave las cuentas tres veces con PBST utilizando la separación magnética para recuperar las cuentas de acuerdo con el protocolo escrito.

Después de retirar el PBST del lavado final, agregue la solución de anticuerpos biotinilados a las perlas y vuelva a suspender las perlas mediante pipeteo. Asegúrese de que el volumen de anticuerpos sea de al menos 300 microlitros. Si es menor, ajústelo con PBS.

Incubar la suspensión durante 30 minutos a temperatura ambiente con agitación. A continuación, lave las cuentas con PBST como antes. Agregue BSA biotinilado de acuerdo con el mismo procedimiento que se realizó anteriormente.

Cuando el anticuerpo biotinilado bio se lava antes y vuelve a suspender las perlas en 100 microlitros de 0,05% BSA en PBS para su almacenamiento a largo plazo, se puede agregar azida de sodio de acuerdo con los protocolos estándar. Uso de fluorato de fluoresceína NHS, el anticuerpo detector. Para comenzar el desarrollo del ensayo de proteína de célula huésped de ovario de hámster chino.

Primero, prepare las soluciones de trabajo. El anticuerpo marcado con HAPTEN o HAB se prepara como una solución de trabajo de cuatro veces de 1,6 microgramos por mililitro diluida con diluyente de HAB de perlas a escala biológica, gire la solución durante al menos cinco minutos. A continuación, prepare la solución de cuentas.

Vórtice el pozo de bilis de abalorios de abalorios. Para asegurarse de que todas las cuentas estén en suspensión, retire una alícuota para preparar una mezcla de trabajo de cuatro veces 10 por la quinta cuentas por mil litro diluida con diluyente HAB de cuentas a escala biológica. Gire la solución durante al menos cinco minutos.

A continuación, prepare el búfer en ejecución. Se han desarrollado varios ensayos de CHO HCP utilizando 10 milimolares. El tampón de la pieza 1%tween pH 7.5.

Sin embargo, es posible que sea necesario optimizar el tampón para los anticuerpos utilizados para desarrollar el ensayo. Se recomienda preparar una plantilla de ensayo para cada ensayo de cinco estaciones de trabajo. La plantilla de ensayo tiene siete hojas, instrucciones etiquetadas, notas de configuración de muestras, cálculos de datos sin procesar, tabla de calibración y resultados.

Para comenzar a configurar la plantilla, seleccione la hoja de configuración de muestra y complete el rango de concentración de los estándares en la tabla. En la esquina superior izquierda de la hoja, introduzca información adicional en la tabla situada a la derecha de los estándares para indicar la estación de trabajo de vibración, cuánto tiempo deben incubarse las muestras, cuánto volumen de reactivo se va a transferir, la duración de la acumulación de muestras y si es necesario el acondicionamiento del sensor y la descontaminación de las sondas y el cartucho. A continuación, rellene el diseño de la placa, diluya los calibradores y las muestras con diluyente de muestras a escala biológica y cargue las muestras en las placas.

Cargue los reactivos en la tercera placa de pared 96. Selle las placas. Coloque las placas en los agitadores de la plataforma de la estación de trabajo y configure el sistema con tampón de lavado y solución de regeneración.

Encienda la estación de trabajo vibra y conecte el sistema de suministro y desagüe. Comience a cebar el sistema. Inserte el cartucho de vibración.

Por último, ejecute el asistente de inicio del ensayo. Siga las instrucciones en pantalla y comience La señal del ensayo se mide con la tecnología A MMP. Cuando el anticuerpo HAPTEN del antígeno de la perla se une al sensor a través de la interacción hapteno anti hapteno, la regeneración devuelve el sensor al estado inicial mediante la eliminación de los complejos inmunes. Mostrado.

Este es un ejemplo de un ensayo CHO H-C-P-A-M-M-P. El análisis de la curva de calibración se puede realizar en muestras de biorreactor con resultados reproducibles. Esta curva de calibración es para una proteína residual.

Ensayo A-A-M-M-P realizado con una proteína residual de vibración, un kit de ensayo. El mismo kit se puede utilizar para un ensayo más rápido con un período de incubación de 30 minutos o para obtener resultados más sensibles y un rango dinámico más amplio con un período de incubación más largo. La estación de trabajo Vibe también se puede utilizar para un ensayo de titulación de producto realizado de manera diferente a otros ensayos A MMP.

Este ensayo no requiere tratamiento de muestra ni perlas y la cuantificación se ha verificado en muestras sin espín que contienen más de 10 millones de células. Aquí se muestra una curva estándar de señal obtenida por el Bioanalyzer Vibe o la tecnología Alpha Screen utilizando resultados GST GAD 34 recombinantes en la plataforma Vibe. Eran un registro más sensible aquí.

La inducción de GAD 34 a partir de xenoinjertos CWR 22 se probó en presencia o ausencia de un inhibidor del proteasoma bate según lo analizado por el detector Vibe, bioanalyzer o Alpha. La plataforma Vibe fue capaz de producir resultados sensibles y reproducibles en los xenoinjertos tumorales in vivo, mientras que la señal de la pantalla alfa se apagó con un aumento de microgramos de proteína después de su desarrollo. Esta técnica ha allanado el camino para que los investigadores en el campo del descubrimiento de fármacos oncológicos exploren la inhibición de fármacos en muestras tumorales, y ha permitido operaciones más eficientes en aplicaciones de bioprocesamiento.