Name: Médula Espinal Electrofisiología II: Fabricación de electrodos de aspiración extracelular (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-20T23:59:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: Aprende a fabricar electrodos de succión extracelulares para registrar señales electrofisiológicas en médulas espinales de roedores neonatales in vitro. Este protocolo utiliza tubo de plástico PE 90 y lámpara de alcohol.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Samuel L. Pfaff es profesor en el Laboratorio de Expresión Génica en el Instituto Salk de Estudios Biológicos y un investigador en el Instituto Médico Howard Hughes. Este trabajo fue apoyado por el Christopher y Dana Reeve Foundation. Joe Belcovson, Schnoeker Kent y Mike Sullivan en Recursos Multimedia en el Instituto Salk proporcionó asistencia con la fotografía y la edición.

Registros electrofisiológicos de la médula espinal aislada puede revelar cambios genéticos y del desarrollo de circuitos neuronales 1. Hemos demostrado previamente un método para analizar los cables neonatal espinal de ratón 2. Aquí presentamos un método para preparar electrodos de succión útil en la grabación de la locomoción ficticia en la médula espinal aislada 3. La punta de un electrodo de un tubo de plástico se pueden extraer de una punta muy fina a mano usando una lámpara de alcohol de baja temperatura 3.5. El tubo de plástico (PE90, Clay Adams Intramedic TM) se lleva a cabo sobre la llama para ablandar la tubería en una forma maleable. Como el tubo comienza a derretirse y se vuelve más transparente que se extrae de la fuente de calor y los extremos se tira suavemente de distancia. El momento de retirar el tubo de la llama es importante para asegurar que el plástico no se derrumbe o se separan, mientras está dibujando. La parte fina de la tubería se corta con una cuchilla de afeitar de acuerdo con el diámetro deseado interna, según lo dictado por la edad de la muestra o el nivel segmentario de la médula. Para facilitar la colocación de una junta tórica en el tubo, un corte de 45 ° se realiza en el extremo grueso de la tubería con una cuchilla de afeitar. Un casquillo y la junta tórica se instalan en el extremo más grueso para conectar el extremo del electrodo en el cañón del electrodo. Para permitir que los electrodos de un tamaño específico y evitar las dificultades de la mano tirando puntas de los electrodos, los electrodos pueden ser construidos usando tubos de pequeño se inserta en un tubo grueso (PE90). Las longitudes de las tuberías son específicas para los requisitos de la configuración de la grabación y son variables. Se presentan las medidas utilizadas en nuestros experimentos 1-3,5. Una longitud de 1 cm de tubo de PTFE fina (Zeus, piezas pequeñas) y una longitud de 10 cm de tubería PE90 se cortan con una cuchilla de afeitar. Los extremos de los tubos pequeños deben ser examinados para asegurarse de que no se trituran o se cierra. Que se pueden abrir con un pin de insectos (Herramientas Artes Ciencia). Una gota de adhesivo (JB Weld) se coloca en el punto medio del tubo de PTFE. Los tubos de PTFE y adhesivo se dibujan en el tubo de succión con la boca PE90 en la tubería PE90. Un corte de 45 ° se realiza en el extremo grueso de la tubería y un casquillo y la junta tórica se adjuntan, que el anterior. El conector BNC férula y se desenrosca de un electrodo de succión comercial. El conector BNC se sumerge en xileno durante una hora para quitar el sello de cera. El conector se enjuaga en agua y se seca. Un puerto del lado inferior en ángulo deben hacerse en el lado del cañón. Una barra de metal se calienta con un mechero de Bunsen y se introduce en el agujero existente en el lado del cañón en un ángulo bajo. Una longitud de 15 cm de alambre de plata .010 pulgadas (AM Systems) se corta y empapado en lejía durante quince minutos. Esto se hace para crear una capa de cloruro de plata que ayuda a la conducción de la señal 6. El cable se enjuaga con agua, se seca, y luego soldar en el conector BNC. El cable conector BNC y la plata se introduce en el cañón de electrodos de aspiración con suficiente espacio para el conector BNC para permanecer al lado del cañón. Tubo de succión se inserta en el orificio lateral de 2-3cm. Sellador de silicona que se inyecta en el cilindro de aproximadamente 2 a 3 cm. El conector BNC se enrosca en el barril del electrodo empujando el sellador hacia adelante. La punta del electrodo está enroscado en la parte delantera del electrodo. Tubo de contracción también se pueden añadir para reforzar la línea de aspiración desde el puerto de lado. Los electrodos se montan en micromanipuladores que sujetarse a la base magnética, y se coloca cerca de la fuente de grabación. BNC cables coaxiales están conectados a un cabezal que está conectado a un amplificador. El amplificador está conectado a un adaptador (PolyView) que está conectado a una tarjeta de analógico a digital (National Instruments) en un ordenador PC con el software de adquisición de datos (PolyView). Al grabar datos electrofisiológicos, es necesario eliminar todas las interferencias externas. El plato de grabación, un amplificador y etapa de la cabeza se colocan en una mesa de aire dentro de una jaula de Faraday para evitar las interferencias eléctricas y mecánicas, respectivamente. Los resultados representativos: <img src="/files/ftp_upload/2580/2580fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Un electrodo de succión disponible en el mercado pueden ser modificados mediante la adición de un alambre de calibre pesado plata y una punta de plástico que es dibujado a mano en una lámpara de alcohol, o construido con tubos de plástico disponibles en el mercado de tamaños específicos. Además, el sellador de parafina se sustituye con más sellador de masilla de silicona durable. <img src="/files/ftp_upload/2580/2580fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Un esquema de los electrodos de aspiración en relación con la mesa de aire (para aislamiento mecánico), jaula de Faraday (eléctrica isolatide), un amplificador y una computadora. Cabe señalar que hay una referencia a tierra al plato de grabación y un segundo motivo que se hace referencia a la mesa de aire y la jaula de Faraday.

<ol><li>Gallarda, B. W., Sharpee, T. O., Pfaff, S. L., Alaynick, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+rhythmic+locomotor+burst+patterns+using+a+continuous+wavelet+transform%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Defining rhythmic locomotor burst patterns using a continuous wavelet transform.</a> Ann N Y Acad Sci. 1198, 133-139 (2010).</li>
<li>Meyer, A., Gallarda, B. W., Pfaff, S., Alaynick, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+cord+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Spinal cord electrophysiology.</a> J Vis Exp. , (2010).</li>
<li>Gallarda, B. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+axial+motor+and+sensory+pathways+via+heterotypic+trans-axonal+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Segregation of axial motor and sensory pathways via heterotypic trans-axonal signaling.</a> Science. 320, 233-236 (2008).</li>
<li>Landmesser, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+development+of+motor+projection+patterns+in+the+chick+hind+limb%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">The development of motor projection patterns in the chick hind limb.</a> J Physiol. 284, 391-414 (1978).</li>
<li>Myers, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholinergic+input+is+required+during+embryonic+development+to+mediate+proper+assembly+of+spinal+locomotor+circuits%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Cholinergic input is required during embryonic development to mediate proper assembly of spinal locomotor circuits.</a> Neuron. 46, 37-49 (2005).</li>
<li>Chanin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+determination+of+chloride+by+use+of+the+silver-silver+chloride+electrode%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The determination of chloride by use of the silver-silver chloride electrode.</a> Science. 119, 323-324 (1954).</li>
<li>Goulding, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circuits+controlling+vertebrate+locomotion%3A+moving+in+a+new+direction%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Circuits controlling vertebrate locomotion: moving in a new direction.</a> Nat Rev Neurosci. 10, 507-518 (2009).</li>
</ol>

Desarrollo del sistema nervioso pueden ser estudiados usando los cables aislados de roedores espinal. En presencia de los neurotransmisores, la locomoción ficticia puede ser generada a partir de la médula espinal en forma de patrones de actividad eléctrica 1,3. Estas explosiones rítmicas se producen en el 0,2 a 0,5 Hz y siguen el modelo de alternancia izquierda-derecha y flexor extensor. En diferentes etapas de desarrollo, la solidez y los patrones de esta actividad varía de 1. Las mutaciones genét...

<table><tbody><tr><td>Tubo de PTFE de pared delgada (tubo pequeño)</td><td>Zeus</td><td>36AWG</td><td>0.005&amp;#8221;ID x 0.003&amp;#8221; de pared (piezas pequeñas). También disponible de 0.003&amp;#8221; a 0.006&amp;#8221;</td></tr><tr><td>Tubo grande (0.86 mm (0.34&amp;#8221;))</td><td>BD Biosciences</td><td>427420</td><td>0.86 mm (0.34&amp;#8221;) de diámetro exterior, 1.27 mm (0.050&amp;#8221;)</td></tr><tr><td>Cuerpo del electrodo</td><td>A-M Systems</td><td>573000</td><td></td></tr><tr><td>Adhesivo</td><td>JB Weld</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Adhesivo: silicona tipo sellador</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Estaño y soldador</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lejía</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xileno</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alambre de plata: 0.010&amp;#8221;</td><td>A-M Systems</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alfileres para insectos: Austerlitz 0.1 mm</td><td>Fine Science Tools</td><td>26002-10</td><td></td></tr><tr><td>Soporte magnético</td><td>Narishige International</td><td>GJ-8</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulador</td><td>Narishige International</td><td>MN 151</td><td></td></tr><tr><td>Minibanco (etapa de cabezal)</td><td>Grass Technologies</td><td>F-15EB/B1</td><td></td></tr><tr><td>Unidad adaptadora Polyview</td><td>Grass Technologies</td><td>PVA 8</td><td></td></tr><tr><td>Sistema amplificador fisiológico bipolar portátil</td><td>Grass Technologies</td><td>15LT</td><td></td></tr><tr><td>TARJETA ANALÓGICA A DIGITAL</td><td>National Instruments</td><td>6035E</td><td></td></tr><tr><td>Mesa antivibraciones; Vibraplane</td><td>Kinetic Systems</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

médula espinal electrofisiología ii: fabricación de electrodos de aspiración extracelular

Spinal Cord Electrophysiology II: Extracellular Suction Electrode Fabrication

Desarrollo de circuitos neuronales y la locomoción pueden ser estudiados usando roedores recién nacidos la médula espinal centro generador de patrones (CPG) de comportamiento. Demostramos un método para la fabricación de electrodos de succión que se utilizan para examinar la actividad de GPC, o la locomoción ficticia, en los cables de roedores disecados espinal. Los cables de la columna vertebral de roedores se colocan en líquido cefalorraquídeo artificial y las raíces ventrales son atraídos hacia el electrodo de succión. El electrodo se construye mediante la modificación de un electrodo de succión disponible en el mercado. Un hilo de plata pesada se utiliza en lugar del cable estándar proporcionada por el electrodo en el comercio. La punta de vidrio del electrodo comercial se sustituye con una punta de plástico para mayor durabilidad. Preparamos la mano electrodos dibujados y electrodos hechos de tamaños específicos de tubos, lo que permite la consistencia y la reproducibilidad. Los datos se recopilaron mediante un amplificador y un software de adquisición de neurogram. Las grabaciones se realizaron en una mesa de aire dentro de una jaula de Faraday para evitar la interferencia mecánica y eléctrica, respectivamente.

Una demostración de la fabricación y el uso de un electrodo de succión extracelular para medir los registros electrofisiológicos de los cables de la columna vertebral de roedores recién nacidos<em&gt; In vitro</em

Médula Espinal Electrofisiología II: Fabricación de electrodos de aspiración extracelular

El desarrollo de los circuitos neuronales y la locomoción pueden estudiarse mediante el comportamiento del generador de patrones centrales (CPG) de la médula espinal de roedores neonatos. Demostramos...

Hola. Mi nombre es Resh Gary Dory, y soy ayudante de investigación en el Laboratorio faf del Instituto Salk para Estudios Biológicos. Hoy les mostraré cómo fabricar electrodos de succión extracelulares utilizando dos métodos. Estos electrodos pueden utilizarse para realizar grabaciones electrofisiológicas de médulas espinales in vitro.Utilice una lámpara de alcohol como fuente de calor para fundir el tubo de plástico PE 90 hasta el ancho deseado. Sostenga el tubo sobre la llama encendida y retírelo cuando comience a fundirse, tire suavemente de los extremos hacia afuera, teniendo cuidado de no romper el centro. Este proceso se muestra nuevamente.Retire el tubo a medida que se ablanda y se derrite, y tire suavemente de los extremos hacia afuera. Corte el tubo con una cuchilla de afeitar afilada en un punto que corresponda al ancho aproximado de la muestra que se va a medir en el extremo grueso del tubo. Realice un corte en un ángulo de 45 grados.Un feral y un anillo O deben instalarse ahora en el extremo grueso. Inserte este extremo del tubo a través de la abertura hexagonal del feral. Luego inserte el extremo del tubo en el anillo O de goma.Este montaje se atornillará en la parte frontal del electrodo. Corte un trozo de un centímetro de longitud del tubo pequeño Zeus con una cuchilla afilada e inspeccione los extremos para asegurar un corte limpio y una abertura despejada. Corte un trozo de diez centímetros del tubo PE 90 utilizando una cuchilla afilada. Coloque una gota de adhesivo JB Weld en el punto medio del tubo pequeño mediante succión bucal.Introduzca el tubo pequeño y la soldadura en el interior del tubo grande y deje que este conjunto repose durante la noche. Aunque no se muestra, se debe realizar un corte de 45 grados en el extremo grueso de este tubo, y se debe colocar una tuerca cónica y una junta tórica en este extremo, de la misma manera que se indicó anteriormente.Desensamble un electrodo de succión estándar: desenrosque el cono del extremo frontal del electrodo y el conector BNC del extremo posterior. Ahora se debe hacer un puerto lateral con ángulo inferior en el costado del cuerpo del electrodo. Caliente una pieza de metal utilizando un mechero Bunsen.Presione el metal caliente en el orificio existente en el costado del barril con un ángulo bajo. Retire el alambre plateado del conector BNC tirando del alambre en el punto donde se une al conector. Sumerja el conector BNC en xileno durante una hora para eliminar la cera.Una vez eliminada la cera, enjuague el conector con agua y séquelo con toallas de papel. Corte un trozo de alambre de plata de 15 centímetros de longitud. Sumerja el alambre en lejía durante 15 minutos.Luego enjuague y seque con toallas de papel. Solderice el alambre de plata al conector BNC. Introduzca el alambre de plata en el extremo posterior del barril del electrodo de succión y deje suficiente espacio para que el conector BNC permanezca al lado.Introduzca el tubo de succión en el orificio lateral aproximadamente tres centímetros. Inyecte sellador de silicona en la abertura posterior del electrodo de succión, evitando que salga por el orificio lateral tapándolo con el dedo. Inyecte el sellador aproximadamente de dos a tres centímetros dentro del cuerpo del electrodo.Una vez fallido, atornille firmemente el conector BNC en su lugar, lo que empujará hacia adelante el sellador. Deje que el sellador se cure durante la noche. Atornille la ferula del tubo creado mediante el método de punta estirada o de punta cortada en la parte frontal del enderezador del electrodo.El tubo ayudará a facilitar el paso del alambre de plata a través del electrodo, lo cual ya está completo. La configuración de grabación se coloca dentro de una jaula de Faraday para reducir las interferencias externas. Nuestra configuración también se ha colocado sobre una mesa de aire para eliminar la interferencia mecánica.Los electrodos están montados en micromanipuladores con soporte magnético y se colocan cerca del recipiente de grabación. Los cables coaxiales BNC están conectados a una etapa de cabezal que a su vez se conecta a un amplificador. El amplificador está conectado a un adaptador poly view, el cual está conectado al ordenador.Este montaje se muestra en primer plano. Los cables coaxiales BNC están conectados a una etapa de cabezal. La etapa de cabezal está conectada al amplificador.La salida del amplificador sale de la jaula de Faraday y se conecta a un adaptador poly view. El adaptador poly view está conectado al ordenador que tiene instalado el software de grabación adecuado. Toda la configuración debe estar conectada a tierra correctamente.Se establece una tierra externa conectando la jaula de Faraday y la mesa antivibratoria a una toma de tierra. Se establece una tierra interna conectando mediante cableado el recipiente de disección al cabezal. También es necesario conectar a tierra las puertas de la jaula al cuerpo principal.Con la configuración adecuada, ahora se pueden recopilar datos. Gracias por ver este video y por permitirnos ayudarle con sus futuros experimentos.

spinal-cord-electrophysiology-ii-extracellular-suction-electrode

Research

Investigación

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociencia

Una demostración del aislamiento de la médula espinal de ratón neonatal para los estudios electrofisiológicos.

La médula espinal de Electrofisiología

Una técnica se describe para la implantación de...

Electrodo de fabricación e implantación de Aplysia californica Para grabaciones multi-canal neural y muscular en los animales intactos, libremente Comportarse

Este video presenta grabaciones electrofisiológicas de cocultivos organotípicos de cortes de médula espinal, capturados usando una matriz de electrodos múltiples o un dispositivo MEA. Estas grabaciones evalúan la regeneración neuronal entre los cortes. La actividad eléctrica sincronizada observada confirma el éxito de la regeneración neuronal.

Registros electrofisiológicos para la evaluación de las regeneraciones neuronales en cortes de médula espinal cocultivados

Este video muestra la fabricación de un electrodo plano que envuelve los nervios. Muestra la integración de metal blindado y capas precisas de polímero para una superficie de grabación efectiva. El proceso consiste en unir, curar, recortar y cortar capas de polímero para un contacto óptimo con los nervios y un registro preciso de la señal.

Fabricación de electrodos nerviosos de interfaz plana para registrar la actividad neuronal

Este video muestra el método de implantar un sistema de electrodos en la cabeza en una rata anestesiada para la detección de convulsiones en tiempo real. El procedimiento incluye la colocación de electrodos de estimulación y registro, su fijación con cemento dental y su conexión a un amplificador montado en la cabeza.

Implantación de un sistema de electrodos en la cabeza en un modelo de rata para la detección de convulsiones en tiempo real

En los animales con grandes neuronas identificadas...

Extracelularmente Identificar las neuronas motoras de un músculo en la piscina Motor<em&gt; Aplysia californica</em

Este artículo proporciona una descripción detallada sobre el proceso de fabricación de un electrodo del nervio interfaz plana de contacto alta densidad (FINA). Este electrodo está optimizado para la grabación y la estimulación de la actividad neuronal selectiva dentro de los nervios periféricos.

Fabricación de alta densidad, Contacto-Interface plana Electrodos nerviosas para aplicaciones de registro y estimulación

Este protocolo detallado describe la colocación del electrodo de estimulación transcraneal en el hueso temporal para investigar los efectos a corto y largo plazo de la estimulación eléctrica transcraneal en mover libremente las ratas.

Estimulación eléctrica transcraneal crónica y grabación Intracortical en ratas

Aquí se presenta un protocolo para la fabricación de un sistema implantable para la grabación cronológica in vivo de potenciales electromiográficos evocados y espontáneos. El sistema se aplica a la investigación de la reinnervación de los músculos laríngeos después de la lesión nerviosa.

Un sistema implantable para la electromiografía crónica in vivo

Este protocolo describe un método que utiliza una pinza de parche para estudiar las respuestas eléctricas de las neuronas motoras a la estimulación de la médula espinal (SCS) con alta resolución espacio-temporal, lo que puede ayudar a los investigadores a mejorar sus habilidades para separar la médula espinal y mantener la viabilidad celular simultáneamente.

La preparación ex vivo del corte de la médula espinal para el registro de patch-clamp de células enteras en neuronas motoras durante la estimulación de la médula espinal

Nuestro propósito era proporcionar una guía actualizada y fácil de seguir sobre la fabricación y las pruebas de electrodos de electromiografía epimisial. Con ese fin, proporcionamos instrucciones para el abastecimiento de materiales y un recorrido detallado del proceso de fabricación y prueba.

Desarrollo de un electrodo de electromiografía epimisial de bajo costo: un flujo de trabajo simplificado para la fabricación y las pruebas

Aprende a fabricar electrodos de succión extracelulares para registrar señales electrofisiológicas en médulas espinales de roedores neonatales in vitro. Este protocolo utiliza tubo de plástico PE 90 y lámpara de alcohol.

Médula Espinal Electrofisiología II: Fabricación de electrodos de aspiración extracelular

Explorar más videos