La evaluación de madriguera, la construcción del nido, y el acaparamiento en ratones

El objetivo de este procedimiento es caracterizar los comportamientos típicos de la especie en ratones. En primer lugar, se estudia el comportamiento de excavación llenando un tubo con material y midiendo la cantidad que el animal elimina. Se colocan trocitos de nido en la jaula y se cuantifica la integridad del nido como medida del comportamiento de anidación.

El comportamiento de acaparamiento se examina colocando un ratón en una caja con acceso a un túnel lleno de gránulos de alimento y midiendo la cantidad que el animal recupera del túnel. Los resultados de esta serie de pruebas indican si los ratones realizan sus actividades cotidianas. Normalmente, las implicaciones de esta técnica pueden extenderse hacia la búsqueda de tratamientos para la demencia, ya que comportamientos funcionalmente similares están alterados tanto en el ratón como en el ser humano.

Los comportamientos típicos en el ratón pueden compararse incluso con las actividades diarias del ser humano. Y los primeros efectos de la enfermedad de Alzheimer consisten en inhibir la realización de actividades normales de la vida diaria, como preparar el desayuno, atarse los cordones de los zapatos, planificar una comida o realizar un viaje de compras. En nuestros ratones modelo de Alzheimer, observamos que los comportamientos típicos de la especie están muy inhibidos.

Aquí tenemos un modelo directo, casi homólogo, entre las actividades de la vida diaria observadas en pacientes con Alzheimer en el hogar y en la clínica, y la inhibición de especies. Comportamientos típicos en el ratón: construya un refugio a partir de una tubería de plástico, de 68 milímetros de diámetro y 20 centímetros de longitud. Selle un extremo con un tapón hecho de 12 milímetros de tablero de fibra de densidad media (MDF).

A continuación, taladre dos orificios, a un centímetro del extremo abierto del tubo de perforación y con un ángulo de 90 grados. Inserte un tornillo mecánico de cinco centímetros de longitud en cada orificio y ajústelos en su lugar. Ahora el tubo debe estar elevado aproximadamente tres centímetros por encima del suelo.

En un extremo, rellene la madriguera con 200 gramos de pellets de alimento y colóquela en la jaula principal para que los animales se habitúen durante la noche. Si los ratones se mantienen en grupos, la habituación será más rápida y completa debido al efecto de facilitación social. Sin embargo, también se deben realizar pruebas de línea base en ratones mantenidos individualmente.

Posteriormente, también se pueden utilizar sustancias no alimenticias para medir el comportamiento de excavación. Algunos ejemplos incluyen bolas de arcilla, grava de guisante y arena. Después de que los animales se hayan habituado, coloque un terrón completo en la jaula de prueba alrededor de las 4:00 p.m. para realizar una prueba de línea base.

Se recomienda realizar dos pruebas de línea base, con 48 horas de diferencia. Dos horas después, mida el peso del material restante en la madriguera vaciando el contenido en un recipiente tarado.

Devuelva el material no consumido al tubo y colóquelo de nuevo en la jaula domiciliaria a la mañana siguiente. Retire el tubo y pese cualquier material restante para su análisis. Repita este procedimiento al menos 48 horas después de la última medición basal.

Los ratones C57 black six suelen excavar alrededor de 70 gramos en las primeras dos horas y cerca de 200 gramos durante la noche. Los ratones con lesión hippocampal a menudo excavan menos de cinco gramos. La enfermedad por pion inhibe la excavación, al igual que el lipopolisacárido.

La actividad de excavación puede detectar la enfermedad priónica a las 10-12 semanas tras la inyección del homogenado cerebral enfermo, mientras que los signos clínicos solo aparecen a las 22 semanas. Se ha demostrado que la excavación es sensible a las diferencias entre cepas y a la eliminación de subunidades de canales iónicos de potasio. Para medir el comportamiento de anidación, prepare jaulas individuales y cubra el suelo con material de enriquecimiento ambiental de 0,5 centímetros de espesor.

Coloque profundamente en cada jaula un cuadrado de cinco centímetros de algodón prensado, denominado nido, dentro de cada jaula. Coloque un ratón en cada jaula con nido aproximadamente una hora antes de la fase oscura y evalúe los resultados a la mañana siguiente.

Pese la cantidad de nido sin desgarrar y evalúe el nido en una escala de cinco puntos. Se otorga una puntuación de uno cuando el nido está en gran parte intacto, y un cinco se asigna a un nido casi perfecto con más del 90 % del nido desgarrado. Tanto machos como hembras construyen nidos, ya que su función es la termorregulación y también está asociada con la reproducción.

Los puntajes de anidación en ratones C57BL/6 machos y hembras se encuentran en el mismo rango. Aunque no hemos realizado una comparación controlada en una sola camada, la mayoría de los ratones C57BL/6 obtienen una puntuación de cuatro a cinco en la construcción de nidos. Sin embargo, cuando el hipocampo está lesionado, la puntuación mediana sería alrededor de dos.

Es improbable que se supere una puntuación de tres. Para medir el comportamiento de acaparamiento, prepare la caja que servirá como base colocando una botella de agua y perforando un orificio en el lateral donde se sujetará el tubo de acopio. Elabore un tubo de acopio enrollando una longitud de 45 centímetros de malla metálica alrededor de un tubo de 40 milímetros de diámetro.

Sujételo con abrazaderas Allen o con alambres torcidos. Luego, colóquelo ajustándolo en un tramo de 10 centímetros de un tubo negro de 40 milímetros. A continuación, conecte el tubo de contención a la caja preparada anteriormente y bloquee el extremo proximal con un tapón de madera extraíble.

Prepare la caja natal con un túnel de cartón y cama contaminada procedente de la jaula natal. Asegúrese de que se impida el acceso al tubo de acumulación. Coloque al ratón en la caja temprano en el día para la habituación posterior; retire el tubo de acumulación y llene el extremo distal con una mezcla de gránulos grandes y pequeños de alimento, sumando un total de 100 gramos.

Poco antes del inicio de la fase oscura. Retire el tapón de madera para permitir que el ratón acceda al tubo de almacenamiento a la mañana siguiente. Nuevamente, el momento no es crítico.

Recolecte y pese los pellets de alimento que han sido acumulados en la caja de la base principal. Utilizando ratones hembras C57BL/6. La cantidad mediana acumulada sería de alrededor de 50 a 70 gramos.

Las lesiones del hipocampo suprimen fuertemente el acaparamiento, mientras que las lesiones de la corteza prefrontal tienen solo un efecto leve. Después de ver este video, deberías tener una buena comprensión de cómo evaluar los comportamientos típicos de la especie en masa.