Name: La caracterización de compuestos volátiles bacteriana secundaria con ionización electrospray espectrometría de masas (SESI-MS) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 54 s
Description: Aprende a caracterizar compuestos volátiles bacterianos mediante SESI-MS sin preparación previa de muestras. Este método rápido permite obtener huellas volátiles en menos de cinco minutos para aplicaciones clínicas y de seguridad alimentaria.

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Este trabajo está financiado por el NIH subvención P20 RR021905-01, CF RPD conceder STANTO07R0, y la NASA beca NNH09ZNE002C.

<img src="/files/ftp_upload/2664/2664fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Esquema de SESI-MS análisis de compuestos volátiles de bacterias. El espacio libre del cultivo bacteriano es desplazado por el CO 2 (1) en la cámara de reacción del SESI (2). Como los compuestos volátiles atravesar la cámara de reacción SESI pasan a través de la nube de electrospray y se ionizan (3). Una vez ionizados, los volátiles son introducidos en el espectrómetro de masas para el análisis (4). El exceso de gas portador y que no ha reaccionado volátiles bacterias se transmiten a través de un filtro de 0,22 micras (5), como una medida adicional de protección y ventilación a una campana química. Recuadro: La aguja electrospray SESI es un capilar de sílice (40 micras ID) con una punta de aguja afilada. Como una demostración de la utilización de SESI-MS para la caracterización de compuestos volátiles de bacterias, E. coli K12 y P. PAO1 aeruginosa son cultivadas aeróbicamente durante 24 horas en 50 ml de LB-Lennox a 37 ° C y los espectros de SESI-MS de los volátiles del espacio de cabeza se recogen en 2 minutos. El dióxido de carbono (99,99%) con un caudal de 2 l / min se usa como gas de transporte para la entrega de volátiles a la cámara de reacción. La cámara de reacción SESI fue construida y equipada a un API-3000 (Sciex), en sustitución de la fuente de electrospray ión original. Los espectros se recogen en el modo de iones positivos con 0,1% de ácido fórmico, el 5,0% de metanol, y el 94,9% de agua (v / v) como la solución electrospray, entregado en 5 nl / s a ​​través de un contenido de sílice no conductora capilar con una punta de aguja afilada (40 micras ID). El voltaje aplicado es de 2,5 kV. Analista de software 1.4.2 (Applied Biosystems) se utiliza para la recolección de datos con los siguientes parámetros: 20 - 500 Da, MCA modo, 40 escáneres, 3 s / escaneo, y 2 min de tiempo total de análisis. 1. Sistema de cultivo <ol><li> Elegir el recipiente adecuado para el crecimiento de sus cultivos, teniendo en cuenta las necesidades de crecimiento de la especie en el experimento (por ejemplo, la aireación, luz, temperatura, etc), así como la prestación eficiente de los volátiles que el espectrómetro de masas. Los frascos de cultivo que optar por utilizar son estándar de 100 ml Pyrex botellas de los medios de comunicación equipados con tapas de rosca que tienen al menos dos puertos luer. Una línea de entrada se inserta a través de un puerto luer para la entrega de gas portador de la botella de muestra y una línea de salida se inserta a través de otro puerto para la entrega de VOC en el instrumento (Figura 1). Cualquiera de los puertos adicionales están conectados. </li><li> Antes de que el cultivo de las muestras, presionar a los vasos y se sumergen en el agua para detectar fugas. Las fugas de gas son la principal causa de los resultados atípicos en forma de señales de iones débil o ausente volátiles. </li></ol> 2. Biológica experimento: puesta a punto y de seguridad consideraciones <ol><li> El crecimiento de su cultura en las condiciones adecuadas para su hipótesis. Se recomienda que al menos dos réplicas biológicas, cada uno con dos repeticiones técnica, se utilizan para cada variable. </li><li> Preparar un blanco de todas las condiciones de cultivo (medio, antibióticos, etc) e incubar el espacio en blanco en las mismas condiciones que sus muestras. </li><li> Emplear las medidas de seguridad que son apropiados para los agentes biológicos que está utilizando, teniendo en cuenta el nivel de bioseguridad (s) de la especie. </li><li> Para evitar la contaminación de su instrumento y las líneas de transferencia de gas con agentes biológicos viables, instalar filtros de tamaño de poro adecuado en la línea de gas portador. Los filtros no interfieren con la transferencia de compuestos volátiles de la cámara de reacción del SESI, pero poco puede afectar la eficiencia de la transferencia de aerosol. 6 </li><li> Utilícese un envase secundario o un gabinete de bioseguridad cuando se conecta la tapa de transferencia de gas a su botella de la cultura de asegurar la contención adecuada en el caso de derrame de agentes biológicos. </li><li> Iniciar y terminar el flujo de gas portador a su botella de muestra de una manera que no va a construir la presión dentro de la botella. </li></ol> 3. Instrumento de optimización NOTA: SESI-MS está diseñado específicamente para los volátiles de la muestra, por lo que limitar el uso de fragantes artículos de cuidado personal (por ejemplo, colonias, enjuagues bucales, lociones, suavizante de telas), goma de mascar, cigarrillos, etc antes de usar el instrumento. Bien colmo productos químicos volátiles en el laboratorio y de control de los borradores tanto como sea posible durante la prueba. Los siguientes parámetros instrumentales, que afectan a la intensidad de la señal y la estabilidad, tendrá que ser optimizado para su instrumento y la experimentación. <ol><li> Solución de electrospray y el caudal: Elegir la solución electrospray apropiado para la clase de moléculas que desea dirigirse, teniendo en cuenta la polaridad instrumento operativo (modo positivo o negativo de iones) y el carácter molecular de los compuestos de interés. En este experimento la solución electrospray es del 0,1% ácido fórmico, el 5,0% de metanol, el 94,9% de agua (v / v), lo que aumenta la intensidad de la señal de menos moléculas polares noce dar estabilidad buena señal. La solución se entrega con un caudal de 5 nL / s. </li><li> Velocidad del gas portador: El caudal del gas portador puede afectar la estabilidad de electrospray y la intensidad de la señal. CO 2 (≥ 99,99%) con un caudal de 2 l / min se utiliza aquí. </li><li> Forma de aguja y posición: La forma de punta de la aguja y la posición afectan en gran medida la intensidad de la señal y la estabilidad. Al instalar una nueva aguja, la posición de la aguja debe ser optimizado para crear un equilibrio entre el fondo de baja y alta intensidad de la señal del analito, y la estabilidad de la señal. Con el fin de reproducir los espectros SESI después de un cambio de agujas, es necesario recoger periódicamente los espectros a medida que ajusta la posición de la aguja hasta que pueda para que coincida con el espectro observado a sus registros. La distancia desde la punta de la aguja a la masa electrospray orificio de especificaciones será de 1 - 5 mm. </li><li> Tensión aplicada: La tensión que se aplica en el sistema afecta a la intensidad de la señal de iones y la estabilidad del cono electrospray Taylor. Además, el voltaje óptimo depende de la solución de electrospray y la forma de punta de la aguja. Al inicio de su serie de experimentos, determine la tensión que produce el espectro óptimo y estabilidad de la señal para el sistema, y ​​luego utilizar esta tensión para todos los experimentos posteriores. Para nuestro sistema, voltajes aplicados de 2,0 a 5,0 kV proporcionar una intensidad de señal óptima y la estabilidad de electrospray. Para este experimento se utiliza 2,5 kV. </li></ol> 4. Encendido y puesta a punto del SESI-MS para el análisis <ol><li> Comenzar por asegurar que la tensión de alimentación está apagado y que el sistema está cargado de electricidad. Para ello, 1) asegurar que las luces indicadoras de la tensión de alimentación están apagados, 2) asegurar la tensión en el multímetro es cero, y 3) a tierra los cables eléctricos. </li><li> Instalar la solución de electrospray apropiado para su experimento. </li><li> Encienda el gas portador y establecer el flujo a la velocidad adecuada para su experimento. </li><li> Aplicar presión en el depósito de electrospray para iniciar la entrega de la solución de electrospray a la cámara de reacción. </li><li> Abra el suministro de tensión y ajustar el voltaje a un valor apropiado para sus experimentos. </li></ol> NOTA: En este punto, las superficies metálicas de la fuente de ionización son capaces de entregar un choque peligroso. Tener mucho cuidado cuando se trabaja alrededor del instrumento una vez que la tensión de alimentación se ha activado. <ol start="6"><li> Configuración de un método de ajuste para el monitoreo del espectro SESI-MS al tiempo que afinar los ajustes de la tensión aplicada. Use los parámetros de adquisición que se ha optimizado para su sistema y su experimento. Autorizar la adquisición de canales múltiples (MCA) casilla (si corresponde) a fin de que cada ciclo produce un espectro independiente, establecer el tiempo de adquisición de 10 - 15 min, y comenzar la adquisición. Espectros de los antecedentes del gas portador ahora deben ser observados. </li><li> Hacer ajustes ajustado a la tensión aplicada para obtener un cromatograma total de iones estables (TIC) y las exploraciones reproducible que coinciden con el CO 2 analiza en busca de sus experimentos anteriores. Una vez que los ajustes de voltaje se han hecho, continuar recogiendo los espectros y un TIC durante cinco minutos para asegurar que el instrumento se estabilice. </li><li> Una vez que se garantiza la estabilidad fundamental, establecer el método de adquisición según sea apropiado para sus muestras, ajustar el tiempo de adquisición, el rango de datos, y la selección de MCA, según sea necesario. Recoger el gas portador del espectro de fondo para sus registros. </li></ol> 5. La obtención de una huella digital volátil de su cultivo bacteriano <ol><li> Para recoger un espectro blanco, dirigir el flujo de gas portador a través de las líneas de derivación, y luego coloque la muestra en blanco (válvulas cerradas) a las líneas de transferencia de gas del instrumento. </li><li> Abrir las válvulas de la botella de muestra, y cerrar las válvulas de las líneas de derivación. </li><li> Deje que el sistema se equilibre durante 30 segundos, tiempo durante el cual la humedad en la cámara de reacción se está estabilizando. Este período de equilibrio es esencial para obtener espectros reproducibles. Para asegurar que el sistema está equilibrado, es posible que desee monitorear las TIC, que va a cambiar durante el período de equilibrio, y estabilizar a partir de entonces. </li><li> Una vez que el sistema está equilibrado, iniciar la recogida de espectro. </li><li> Después de que el espectro se recoge, retire la botella de muestra, en primer lugar la apertura de las líneas de gas portador de bypass, luego cerrar las válvulas de la muestra, y por último la eliminación de la botella de muestra. Lave el sistema con el gas portador de 2 a 4 min, la eliminación de la humedad y volátiles adsorbidos en las líneas de transferencia, la prevención de la muestra de la muestra de arrastre. </li><li> Repita los pasos 5,2 a 5,5 por cada muestra de bacterias, de forma intermitente recogida de espectros en blanco adicionales para asegurar una buena blanco resta. Incompleta en blanco resta dará lugar a laaparición de picos de fondo químico en el espectro de procesados ​​que son comunes a técnicas de presión atmosférica de ionización (por ejemplo, los ftalatos, siliconas, etc.) 9 </li><li> Al recoger su espectro, asegúrese de que las señales de iones no son superiores a los límites de detección lineal de su instrumento, según lo determinado por las TIC y la máxima intensidad de los diferentes picos. Iones rebasen los límites superiores del detector de su instrumento puede generar picos de artefactos que no son representativos de la muestra. </li></ol> 6. Resultados representante Como ejemplo de los espectros de SESI-MS que se pueden obtener de los volátiles de bacterias, las huellas dactilares de iones positivos modo volátil para E. coli y P. aeruginosa crecido en condiciones aeróbicas LB-Lennox durante 24 horas a 37 ° C se muestran (Fig. 2). La E. espectro coli volátiles está dominado por indol en m / z = 118, que ofrece E. culturas coli su olor característico, mientras que el espectro de la P. aeruginosa contiene una mayor variedad de picos protonatable. Tenga en cuenta que las intensidades relativas de los picos en el espectro de volatilidad dependen de los parámetros instrumentales se describe en la Sección 3. Estos parámetros deben ser estrictamente controlados de experimento en experimento con el fin de obtener espectros reproducibles. <img src="/files/ftp_upload/2664/2664fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2 en blanco sustracción de iones positivos modo SESI-MS espectros (20 - 150 m / z). De E. coli K12 y P. aeruginosa PAO1 volátiles después de 24 h de crecimiento aeróbico en LB-Lennox a 37 ° C. Para más detalles sobre los picos observados en el espectro de SESI, por favor refiérase a Zhu, et al. 8.

<ol><li>Fuerstenau, S., Kiselev, P., Fenn, J. B. ESI-MS in the analysis of trace species in gases. Proceedings of the 47th ASMS Conference on Mass Spectrometry Allied Topics, Dallas, TX, , (1999).</li>
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<li>Calkins, C. R., Hodgen, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fresh+look+at+meat+flavor%5BTitle%5D)+AND+%22Meat+Sci%22%5BJournal%5D)">A fresh look at meat flavor.</a> Meat Sci. 77, 63-80 (2007).</li>
</ol>

Las bacterias producen diferentes combinaciones de sustancias volátiles, que pueden ser utilizados para la identificación bacteriana 10-12 y la evaluación del estado metabólico. El método de SESI-MS descrito aquí proporciona un medio rápido de caracterización de compuestos volátiles de bacterias (en dos minutos o menos) sin ningún tipo de preparación de la muestra, lo que genera una infección bacteriana &quot;huella digital&quot; para la identificación de la especie. 8 En las últimas décadas ionización otros la presión atmosférica técnicas de MS se han aplicado a la caracterización de los compuestos volátiles, incluyendo el tubo de flujo de iones selectivos (SIFT) y la reacción de transferencia de protones (PTR) de espectrometría de masas. La ventaja diferencial que ofrece SESI sobre estos métodos de ionización es que esto es posible a los picos fragmento específico (siempre que el tipo apropiado de espectrómetro de masas se ha adaptado para SESI), que es una herramienta importante para la identificación de compuestos. No se refirió a la fragmentación de pico en el protocolo mencionado anteriormente, pero hay ejemplos de cómo la información de fragmentación se puede utilizar en la caracterización de los compuestos volátiles de bacterias, por favor refiérase a Zhu, et al 8. SESI-MS tiene aplicación directa en la detección in situ de las infecciones pulmonares bacterianas mediante análisis de aliento, pero también puede aplicarse a cualquier entorno en el que muestra volátil es posible. Por ejemplo, el análisis de compuestos volátiles en la orina, la sangre y la respiración, que son relevantes para el diagnóstico de trastornos metabólicos, enfermedades gastrointestinales, cáncer, y la exposición del medio ambiente, se adapta bien a SESI-MS. 13,14 SESI-MS también ha una amplia gama de aplicaciones no clínicas huellas de COV, incluyendo un análisis rápido de los alimentos para los volátiles característicos asociados con la maduración, envejecimiento, o echar a perder 15-18.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del Material </td><td> Tipo </td><td> Empresa </td><td> Catálogo # </td><td> Comentario </td></tr><tr><td> API-3000 triple cuadrupolo </td><td> Instrumento </td><td> Sciex </td><td></td><td> Adquiridos con el analista 1.4.2 (Applied Biosystems) </td></tr><tr><td> SESI fuente de iones </td><td> Instrumento </td><td></td><td></td><td> Hechos a medida; véase la referencia 6 </td></tr><tr><td> Medidor de flujo de gas </td><td> Equipo </td><td> Cole-Parmer </td><td> EW-03217-74 </td><td></td></tr><tr><td> Dióxido de carbono </td><td> Equipo </td><td> Airgas </td><td> CD I300 </td><td> ≥ 99,99% de pureza </td></tr><tr><td> Nitrógeno </td><td> Equipo </td><td> Airgas </td><td> NI UHP300 </td><td> Pureza ultra alta </td></tr><tr><td> 100 ml de vidrio de los medios de botellas </td><td> Equipo </td><td> VWR </td><td> 89012-114 </td><td> GL45 roscas </td></tr><tr><td> Tapas de las botellas con los puertos luer </td><td> Equipo </td><td> Bio Chem Fluidics </td><td> 00945T-3 </td><td> Cap de montaje </td></tr><tr><td> Luer del puerto se conecta </td><td> Equipo </td><td> Bio Chem Fluidics </td><td> 009LP </td><td> Cap de montaje </td></tr><tr><td> Tubería de 1 / 4 &quot;(OD) x 8.1&quot; (ID) </td><td> Equipo </td><td> Cole-Parmer </td><td> EW-95875-02 </td><td> Cap montaje y líneas de transferencia de gas </td></tr><tr><td> Tubería de 1 / 8 &quot;(OD) x 1 / 16&quot; (ID) </td><td> Equipo </td><td> Cole-Parmer </td><td> EW-06605-27 </td><td> Cap de montaje </td></tr><tr><td> Válvulas de dos vías </td><td> Equipo </td><td> Cole-Parmer </td><td> 07391-04 </td><td> Cap de montaje </td></tr><tr><td> Filtro, Grado AAQ </td><td> Equipo </td><td> Balston Filtros </td><td> 9922-05 </td><td></td></tr><tr><td> Ácido fórmico, LC / MS de grado </td><td> Reactivo </td><td> Pescador </td><td> A117-05AMP </td><td> Electrospray solución </td></tr><tr><td> Metanol, LC / MS de grado </td><td> Reactivo </td><td> Pescador </td><td> A456-500 </td><td> Electrospray solución </td></tr><tr><td> Agua, LC / MS de grado </td><td> Reactivo </td><td> Pescador </td><td> W6-500 </td><td> Electrospray solución </td></tr></tbody></table>

la caracterización de compuestos volátiles bacteriana secundaria con ionización electrospray espectrometría de masas (sesi-ms)

Characterizing Bacterial Volatiles using Secondary Electrospray Ionization Mass Spectrometry (SESI-MS)

Secundaria ionización electrospray espectrometría de masas (SESI-MS) es un método desarrollado para la rápida detección de compuestos volátiles, sin necesidad de pretratamiento de la muestra. El método fue descrito por primera vez por Fenn y colegas 1 y se ha aplicado a la detección de drogas ilícitas 2 y explosivos 3.4, la caracterización de los cinco compuestos volátiles de piel, y el análisis de aliento 6-7. Ionización SESI se produce por las reacciones de transferencia de protones entre la solución de electrospray y la sustancia volátil, y por tanto es adecuado para el análisis de los hetero-moléculas orgánicas, así como en la ionización por electrospray tradicionales (ESI). Sin embargo, a diferencia de ESI estándar, el proceso de transferencia de protones del SESI se produce en la fase de vapor en lugar de en la solución (Fig. 1), y por lo tanto, el SESI es el más adecuado para la detección de compuestos volátiles orgánicos y aerosoles. Estamos ampliando el uso de SESI-MS para la detección de compuestos volátiles de bacterias como un método para la identificación y caracterización bacteriana 8. Hemos demostrado que el SESI-MS huellas volátiles, combinado con un método de análisis estadístico, se puede utilizar para diferenciar los géneros de bacterias, especies y cultivos mixtos en una variedad de medios de cultivo. 8 A continuación presentamos los pasos para la obtención de huellas digitales si se usan bacterias SESI -MS, incluyendo los parámetros instrumentales que deben ser optimizados para asegurar la identificación y caracterización bacteriana resistente.

Secundaria ionización electrospray espectrometría de masas (SESI-MS) permite la detección de compuestos orgánicos volátiles (COV), sin necesidad de ningún tratamiento previo de la muestra. Este protocolo proporciona instrucciones para la rápida (en minutos) caracterización de compuestos orgánicos volátiles bacteriana con el SESI-MS.

La caracterización de compuestos volátiles bacteriana secundaria con ionización electrospray espectrometría de masas (SESI-MS)

La espectrometría de masas con ionización por electrospray secundario (SESI-MS) es un método desarrollado para la detección rápida de compuestos volátiles, sin la necesidad de...

La ionización secundaria por pulverización electrospray, espectrometría de masas o CS EMS permite el análisis de volátiles bacterianos sin necesidad de ningún tratamiento previo de la muestra. El espacio de cabeza del cultivo bacteriano es desplazado por dióxido de carbono hacia la cámara de reacción CS SI. A medida que los compuestos volátiles atraviesan la cámara de reacción SSI, pasan a través de la nube de pulverización electrospray y se ionizan.Una vez ionizados, los compuestos volátiles son extraídos hacia el espectrómetro de masas para su análisis. El exceso de gas portador y los volátiles bacterianos no reactivos pasan a través de un filtro de 0,22 micrones para eliminar cualquier agente bacteriano, como medida adicional de protección, y son expulsados hacia una campana química. En definitiva, este protocolo de EM con ionización por captura de iones (CSI) ofrece perfiles de volátiles bacterianos en cuestión de minutos.Se prevé que esta tecnología pueda utilizarse en muchas aplicaciones, incluyendo el aire espirado, el análisis del aliento para enfermedades infecciosas, o incluso aplicarse a sistemas alimentarios donde podríamos detectar rápidamente patógenos presentes en o sobre nuestros alimentos. Esta técnica presenta varias ventajas principales frente a métodos existentes como GCMS, espectrometría de masas y PT, RM S. En primer lugar, los compuestos volátiles no requieren ningún tratamiento previo antes del análisis.Segundo, es posible fragmentar iones específicos en la mezcla volátil, lo que facilita la identificación de compuestos. Y tercero, es rápido. Normalmente toma menos de cinco minutos.Para analizar cada muestra, elija el recipiente adecuado para cultivar su cultivo, considerando los requisitos de crecimiento de la especie, así como la entrega eficiente de los compuestos volátiles al espectrómetro de masas. En esta demostración, hemos seleccionado botellas estándar de medio de cultivo de 100 mililitros de vidrio pyrex. Los volátiles bacterianos se entregan al espectrómetro de masas mediante un flujo de gas portador para armar el portador.Las líneas de gas se ajustan a los frascos de cultivo con tapas roscadas que tienen al menos dos puertos de conexión. Inserte las líneas de entrada y salida de gas a través de los puertos de conexión y tape cualquier puerto adicional antes de incubar sus muestras. Presurice los recipientes y sumérjalos en agua para verificar fugas.Las fugas de gas son una causa principal de resultados atípicos en forma de señales iónicas volátiles débiles o ausentes que aumentan durante la noche. Cultivos de e coli, K 12 y pseudomonas aerogen, PAO uno en LB Lennox preparando dos réplicas biológicas para cada especie.Prepare nueve frascos estériles de cultivo que contengan 50 mililitros de LB Lennox y un frasco sin inocular que se utilizará como blanco; inocule cada cultivo nocturno en dos frascos de muestra. Creando réplicas técnicas, incube los cultivos y el blanco durante 24 horas a 37 grados Celsius. Dado que el CEMS está diseñado específicamente para muestrear compuestos volátiles, limite el uso de productos de cuidado personal perfumados antes de utilizar el instrumento con precisión.Tape todos los productos químicos volátiles en el laboratorio y controle las corrientes de aire tanto como sea posible durante las pruebas para evitar la contaminación de su instrumento y de las líneas de transferencia de gas. Con agentes biológicos viables, instale filtros del tamaño de poro adecuado en la línea de gas portador. Los filtros no interferirán con la transferencia de compuestos volátiles a la cámara de reacción sesi, pero podrían afectar ligeramente la eficiencia de la transferencia de aerosoles.Para verificar que la fuente de voltaje está apagada y que el sistema está descargado de electricidad, compruebe que las luces indicadoras de la fuente de voltaje estén apagadas. Asegúrese de que el voltaje en el multímetro sea cero y conecte a tierra las puntas eléctricas. En este momento, instale la solución de electroaspersión para su análisis.En modo de iones positivos, utilizamos una solución de electroaspersión compuesta de 0,1 % de ácido fórmico, 5 % de metanol y 94,9 % de agua. Para lograr una intensidad y estabilidad óptimas de la señal, encienda el gas portador de dióxido de carbono y ajuste el caudal a dos litros por minuto. Aplique presión al depósito de electroaspersión para iniciar la entrega de la solución de electroaspersión a la cámara de reacción a un caudal de cinco nanolitros por segundo. A continuación, encienda la fuente de voltaje y ajuste el voltaje a 2,5 kilovoltios.El voltaje aplicado afecta la intensidad del ion señal y la estabilidad del cono de electro-spray para los voltajes de nuestro sistema entre dos y cinco kilovoltios. Proporcionan los mejores resultados en modo de iones positivos. Ejercer precaución, ya que en este punto las superficies metálicas de la fuente de ionización son capaces de producir una descarga peligrosa. Ahora configure un método de ajuste para monitorear el espectro de SEMS.Desactive la casilla de adquisición de múltiples canales o MCA. Establezca el tiempo de adquisición entre 10 y 15 minutos e inicie la adquisición de datos. Observe los espectros del fondo del gas portador y realice ajustes finos al voltaje aplicado para obtener un cromatograma de iones totales estable y escaneos reproducibles.Continúe recolectando espectros y A TIC durante cinco minutos para asegurar que el instrumento se haya estabilizado con el instrumento asegurado. Ingrese los parámetros de adquisición según sea apropiado para su experimento. Registre un espectro de fondo del gas portador para experimentos futuros.Para recopilar un espectro en blanco. Dirija el flujo de gas portador a través de las líneas de derivación y luego conecte la muestra en blanco, con las válvulas cerradas, a las líneas de transferencia del instrumento. Abra las válvulas hacia el frasco de la muestra y cierre las válvulas de las líneas de derivación.Para obtener espectros reproducibles. Permita que el sistema se equilibre durante 30 segundos, tiempo durante el cual la humedad en la cámara de reacción se estabiliza. Para asegurar que el sistema ha alcanzado el equilibrio, supervise la CIC, que cambiará durante el período de equilibración y luego se estabilizará.Una vez que el sistema esté equilibrado, inicie la recopilación del espectro. Después de recopilar el espectro, retire el frasco de la muestra abriendo primero las líneas de derivación del gas portador. Luego cierre las válvulas de la muestra.Y por último, retire el frasco de la muestra. Lave el sistema con el gas portador durante dos a cuatro minutos para eliminar la humedad y los compuestos volátiles absorbidos de las líneas de transferencia y evitar la contaminación cruzada entre muestras. Recolecte datos del perfil volátil de cada muestra bacteriana, recolectando intermitentemente espectros en blanco adicionales para asegurar una sustracción completa del blanco.Las huellas volátiles en modo de iones positivos para E. coli y P. aeruginosa, cultivadas aeróbicamente en LB Lennox durante 24 horas a 37 grados Celsius, son distintas. El espectro volátil de E. coli está dominado por un pico a una relación masa/carga de 118, mientras que el espectro de Pseudomonas aeruginosa contiene una mayor variedad de picos atribuibles a proteínas.Al intentar este procedimiento, es importante que registre los parámetros instrumentales que ha optimizado para su análisis, como el voltaje aplicado, la composición de la solución de electroaspersión y la velocidad de flujo del gas portador. También es fundamental que conserve registros de sus espectros representativos para poder reproducir sus análisis en el futuro. No olvide que trabajar con bacterias patógenas y alto voltaje podría ser extremadamente peligroso.Por lo tanto, siempre se deben tomar precauciones como limitar el acceso al CSS CMS durante el experimento. Ahora debería poder obtener de forma reproducible un CSS y un espectro EMS de los volátiles bacterianos en su sistema. Buena suerte.

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Investigación

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Bioengineering

Bioingeniería

Untargeted metabolómica ofrece una hipótesis de generación instantánea de un perfil metabólico. Este protocolo se demostrará la extracción y el análisis de los metabolitos de las células, suero, o tejidos. Una gama de metabolitos se examinó utilizando extracción en fase líquido-líquido, microflujo UltraPerformance cromatografía líquida / de alta resolución de la espectrometría de masas (UPLC-HRMS) acoplado al software de análisis diferencial.

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La desorción de ionización por electrospray espectrometría de masas (DESI-MS) es un método por el cual las muestras ambiente, incluidos los tejidos biológicos, se pueden obtener imágenes con la preparación mínima de la muestra. Por rastering la muestra por debajo de la sonda de ionización, esta técnica de aerosol a base proporciona una resolución espacial suficiente para discernir las características moleculares de interés dentro de las secciones de tejido.

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La extracción de Fizzy es una nueva técnica de laboratorio para el análisis de compuestos volátiles y semivolátiles. Se disuelve un gas portador en la muestra líquida aplicando sobrepresión y agitando la muestra. La cámara de muestra se descomprime a continuación. Las especies de analito se liberan a la fase gaseosa debido a la efervescencia.

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Captura de compuestos orgánicos volátiles microbianos producidos activamente a partir de muestras asociadas con humanos con extracción de sorbente asistida por vacío

Este protocolo describe la imagen por espectrometría de masas de célula única de células OVCAR-8 utilizando ionización por electropulverización por desorción acoplada a espectrómetros de masas Orbitrap para análisis metabolómico de alta resolución espacial.

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