Name: Técnicas de laboratorio asépticas: Transferencias de volumen con pipetas serológicas y Micropipetas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-31T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: Aprende técnicas asépticas de laboratorio para transferencias de volumen con pipetas serológicas y micropipetas. Este método minimiza la contaminación y garantiza la precisión en experimentos microbiológicos con cultivos puros.

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Un agradecimiento especial a Cori Sanders en los diseños de Iroc para la preparación de las ilustraciones y Kris Reddi en la UCLA para el establecimiento de cultivo de las muestras para las figuras. Los fondos para este proyecto fue proporcionado por el HHMI (HHMI Grant N º 52.006.944).

<ol><li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarker%2C+K+%22At+the+Bench%3A+A+Laboratory+Navigator%22">At the Bench: A Laboratory Navigator</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor. New York. (1998).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biosafety+in+Microbiological+And+Biomedical+Laboratories+%28BMBL%29%22">Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL)</a>. , 5th Ed, US Department of Health and Human Services (DHHS), Centers for Disease Control and Prevention (CDC) and National Institutes of Health (NIH), U.S. Government Printing Office. Washington DC. Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm">http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm</a> (2009).</li>
<li>Bykowski, T., Stevenson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aseptic+Technique%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Aseptic Technique.</a> Current Protocols in Microbiology. Appendix 4, Appendix 4D(2008).</li>
<li>Coté, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aseptic+Technique+for+Cell+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Aseptic Technique for Cell Culture.</a> Current Protocols in Cell Biology. Chapter 1, Unit 1.3(2001).</li>
<li>Grimes, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+basic+laboratory+manual+for+the+small-scale+production+and+testing+of+I-2+Newcastle+disease+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22RAP+Publication%22%5BJournal%5D)">A basic laboratory manual for the small-scale production and testing of I-2 Newcastle disease vaccine.</a> RAP Publication. AC802/E, 12-13 (2002).</li>
<li>Guzman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pipetting%3A+A+Practical+Guide%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Biology+Teacher%22%5BJournal%5D)">Pipetting: A Practical Guide.</a> The American Biology Teacher. 63 (2), 128-131 (2001).</li>
<li>Jordan, T., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJordan%2C+T+%22RESEARCH%3A+National+Genomics+Research+Initiative+Phage+Resource+Laboratory+Manual%22">RESEARCH: National Genomics Research Initiative Phage Resource Laboratory Manual</a>. , Howard Hughes Medical Institute. (2008).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning+-+A+Laboratory+Manual%22">Molecular Cloning - A Laboratory Manual</a>. , 3rd Ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, New York. 978-087969576 (2001).</li>
<li>Seidman, L. A., Moore, C. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSeidman%2C+LA+%22Basic+Laboratory+Methods+for+Biotechnology%3A+Textbook+and+Laboratory+Reference%22">Basic Laboratory Methods for Biotechnology: Textbook and Laboratory Reference</a>. , Prentice Hall, Inc. Upper Saddle River, New Jersey. (2000).</li>
<li>Pipettes, Calibration & Repair Service - Pipette.com [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://pipette.com/public/staticpages/guidetopipetting.aspx">http://pipette.com/public/staticpages/guidetopipetting.aspx</a> (2012).</li>
<li>On-Line Resources for Biology: Table of Contents [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://abacus.bates.edu/~ganderso/biology/resources/index.html">http://abacus.bates.edu/~ganderso/biology/resources/index.html</a> (2012).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22PIPETMAN+P+User%27s+Guide%22">PIPETMAN P User's Guide</a>. , Gilson Inc. Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://www.gilson.com/Resources/LT801120_a_eng_030209%20BD.pdf">http://www.gilson.com/Resources/LT801120_a_eng_030209%20BD.pdf</a> (2012).</li>
<li>Sterile Technique - Laboratory Wiki [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://lab.wikia.com/wiki/Sterile_Technique">http://lab.wikia.com/wiki/Sterile_Technique</a> (2012).</li>
<li>Air displacement pipette - Wikipedia, the free encyclopedia [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://en.wikipedia.org/wiki/Air_displacement_pipette">http://en.wikipedia.org/wiki/Air_displacement_pipette</a> (2012).</li>
<li>Disinfectant - Wikipedia, the free encyclopedia [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://en.wikipedia.org/wiki/Disinfectant">http://en.wikipedia.org/wiki/Disinfectant</a> (2012).</li>
</ol>

No tengo nada que revelar.

La técnica aséptica se refiere a un conjunto de procedimientos de rutina que se practican para evitar soluciones estériles y las culturas se contamine por microorganismos no deseados en el laboratorio. Tales técnicas son esenciales para los experimentos que requieren células en crecimiento. Aunque un entorno de trabajo que es completamente estéril no puede lograrse, procedimientos tales como la desinfección de superficies de laboratorio, la creación de un campo estéril utilizando un mechero Bunsen, limitar la exposición de los cultivos no niveladas y medios para el aire, esterilización de materiales tales como botellas, tubos y pipetas de vidrio, y evitar el contacto de los instrumentos esterilizados con superficies no estériles reduce la posibilidad de contaminar las soluciones y culturas en un experimento. El objetivo es que estos procedimientos de precaución para convertirse en una segunda naturaleza, lo que viene con la formación y la práctica mientras se trabaja en un laboratorio. Las transferencias de volumen con soluciones estériles y culturas que utilizan instrumentos como pipetas serológicas y de microropipettors son uno de los muchos tipos de técnicas de rutina que se practican en un laboratorio. Diferentes aplicaciones experimentales exigen instrumentos capaces de transferir volúmenes distintos, sin embargo, precisos y exactos,. Pipetas serológicas se utilizan en los laboratorios de microbiología para preparar cultivos celulares que requieren la preparación de medios con volúmenes mililitro, mientras que Micropipetas son esenciales para experimentos de biología molecular que necesitan solamente cantidades microlitros de soluciones. Cuando una técnica aséptica se practica con estos instrumentos, se minimiza la contaminación durante la transferencia de volumen sin importar la cantidad de líquido o el tipo de experimento. Aunque no se discute en el presente Protocolo, uno de los medios de otros de uso común para evitar la contaminación es trabajar dentro de una campana de flujo laminar (Figura 10). Este equipo es crítico para el cultivo de tejidos y para experimentos realizados con microorganismos clasificados como BLS-2 o superior. Una campana de flujo laminar contiene un filtro HEPA (alta eficienciapartículas de aire) de filtro que elimina los contaminantes transportados por el aire desde el aire que fluye dentro de la campana al mismo tiempo impidiendo que el aire no filtrado de la sala de la que impregna el espacio de trabajo. Es de destacar que un mechero Bunsen no se puede utilizar dentro de una campana de flujo laminar ya que el calor de la llama interrumpe el flujo de aire esencial para la funcionalidad de la campana. A menudo es útil para comprobar la calidad de su técnica aséptica al realizar experimentos. Para confirmar soluciones y medios de cultivo no se contaminan durante las manipulaciones experimentales, siempre preparar un control negativo. Por ejemplo, si la preparación de los tubos de caldo para el crecimiento de cultivos de bacterias, no inocular un tubo dejando sólo medios estériles. Incubar el medio junto con los tubos inoculados luego inspeccionar tubo sin inocular el control de signos de contaminación, tales como la turbidez del crecimiento de las células no deseadas involuntariamente introducidas en el tubo. Si el tubo de control está contaminado, el tubo experimentals probable están contaminados, así, y el experimento tendrá que ser repetido. Estas medidas cautelares se debe hacer con cada experimento.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> LB caldo </td><td> Difco </td><td> 244620 </td><td> Receta disponible también en la referencia 6 </td></tr><tr><td colspan="4"> Tampón TE: </td></tr><tr><td> EDTA disódico dihidrato de la sal </td><td> Sigma </td><td> E5134 </td><td></td></tr><tr><td> Trizma-HCl </td><td> Sigma </td><td> T-3253 </td><td></td></tr><tr><td> CiDecon </td><td> Decon Laboratories, Inc. </td><td> 8504 </td><td> Desinfectante </td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Fisher Scientific </td><td> A406 </td><td> Para su uso como desinfectante, preparar 70% (v / v) con agua destilada </td></tr></tbody></table>

técnicas de laboratorio asépticas: transferencias de volumen con pipetas serológicas y micropipetas

Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

Los microorganismos están en todas partes - en el aire, el suelo, y el cuerpo humano, así como en las superficies inanimadas, como bancos de laboratorio y teclados de computadoras. La ubicuidad de los microorganismos generan un suministro abundante de posibles contaminantes en un laboratorio. Para asegurar el éxito experimental, el número de contaminantes sobre las superficies del equipo y el trabajo debe ser minimizado. Común entre los muchos experimentos en microbiología son las técnicas que implican la medición y la transferencia de los cultivos que contienen células bacterianas o de partículas virales. Para hacerlo sin ponerse en contacto con superficies no estériles, o la contaminación de los medios de comunicación estériles requiere (1) la preparación de un espacio de trabajo estéril, (2), precisamente, de ajuste y la lectura precisa de los instrumentos para la transferencia de aséptico de líquidos, y (3) correctamente la manipulación de instrumentos, frascos, botellas y culturas tubos dentro de un campo estéril. El aprendizaje de estos procedimientos requiere entrenamiento y práctica. En un primer momento, las acciones deben ser lenta, deliberada y controlada, con el objetivo de ser asépticos para technique para convertirse en una segunda naturaleza, cuando trabajaba en el banco. A continuación les presentamos los pasos a seguir para la medición de volúmenes con pipetas serológicas y Micropipetas dentro de un campo estéril, creado por un mechero Bunsen. Volúmenes desde microlitros (l) a mililitros (ml), dependiendo del instrumento utilizado. Líquidos comúnmente transferidos incluyen caldo estéril o soluciones químicas, así como cultivos de bacterias y las poblaciones de fagos. Siguiendo estos procedimientos, los estudiantes deben ser capaces de: <ul><li> El trabajo en el campo estéril creado por la llama del mechero Bunsen. </li><li> Utilizar pipetas serológicas, sin comprometer la esterilidad del instrumento. </li><li> Aspirar líquidos con pipetas serológicas, precisamente la lectura de volúmenes calibrados alineando el menisco formado por el líquido a las marcas de graduación en la pipeta. </li><li> Mantenga las botellas de cultivo, frascos, tubos y sus respectivas tapas estériles durante la transferencia de líquidos. </li><li> Identificar las diferentes aplicaciones de plástico frente al vidrio de pepita serológicaettes. </li><li> Las limitaciones del Estado de precisión para Micropipetas. </li><li> Precisamente, y establecer con precisión los volúmenes de Micropipetas. </li><li> Sepa cómo utilizar correctamente la primera parada y el segundo en una micropipeta para aspirar y transferir volúmenes correctos. </li></ul>

Cuando se trabaja en un laboratorio, es imperativo para reducir al mínimo las fuentes de contaminación. La técnica aséptica se refiere a los procedimientos que permiten la transferencia de las culturas y los reactivos, evitando el contacto con superficies no estériles. Pipetas serológicas y Micropipetas se utilizan para medir volúmenes precisos sin comprometer la esterilidad de las soluciones utilizadas en los experimentos.

Técnicas de laboratorio asépticas: Transferencias de volumen con pipetas serológicas y Micropipetas

Los microorganismos están en todas partes: en el aire, el suelo y el cuerpo humano, así como en superficies inanimadas como los tableros de laboratorio y los teclados de computadora. El ...

Esta demostración presenta técnicas de laboratorio asépticas en transferencias de volumen con pipetas serológicas y micropipetas en el banco de laboratorio. Trabaje dentro del campo estéril creado por la llama de un mechero Bunsen. Seleccione el instrumento de transferencia de volumen adecuado para la aplicación.Luego, utilícelos adecuadamente sin comprometer su esterilidad, manteniendo al mismo tiempo estériles los reactivos y materiales de cultivo, y aspirando líquidos con precisión de forma conjunta. Estos procedimientos son esenciales para minimizar las fuentes de contaminación y garantizar la precisión en experimentos básicos. Inicialmente, resulta difícil ajustar con precisión y leer correctamente los instrumentos, así como coordinar los movimientos con los instrumentos y los materiales de laboratorio sin comprometer la esterilidad de los líquidos que se transfieren.Practicar una técnica aséptica en el laboratorio es esencial para el éxito experimental al trabajar con especímenes vivos, por lo que es fundamental invertir tiempo en aprender estos procedimientos hasta que se conviertan en una segunda naturaleza. Al trabajar en el banco de laboratorio, el Dr. Chris Reddy, mi coordinador de laboratorio, demostrará los protocolos. Siempre lávese las manos cuidadosamente con jabón antiséptico y agua tibia antes de comenzar cualquier procedimiento de laboratorio. Primero moje las manos con agua corriente tibia.Luego aplique y distribuya abundantemente jabón con enérgico frotamiento. Frótese las manos generando fricción sobre todas las superficies, incluyendo los pulgares, el dorso de los dedos, el dorso de las manos y debajo de las uñas. A continuación, enjuáguese completamente para eliminar el jabón residual y séquese con toallas de papel dispensadas desde un portarrollos.Finalmente, con una toalla de papel nueva, cierre el grifo y despeje el área de trabajo de la bancada del laboratorio. Luego, retire una toallita desinfectante prehumedecida del recipiente y limpie toda el área. Deje que el desinfectante se evapore utilizando una luz de encendido.El mechero Bunsen. Ajuste la llama para que presente un cono azul en el centro. Organice todos los materiales necesarios para el procedimiento cerca del campo estéril de la bancada de laboratorio.Además, asegúrese de que todos los materiales estén debidamente etiquetados. Existen muchas opciones de pipetas serológicas, de plástico o vidrio, desechables o reutilizables, con punta filtrante o sin ella. Los diferentes tamaños están calibrados con tapones que funcionan como barrera para evitar el llenado excesivo de la pipeta.Tenga en cuenta que las pipetas serológicas también se calibran de dos maneras. Las pipetas TD marcadas con dobles anillos en la parte superior están calibradas para que el volumen de la punta no se entregue. Esto no se muestra aquí, pero las pipetas TC deben ser sopladas porque están calibradas para entregar todo el volumen utilizando una técnica aséptica con una pipeta serológica de plástico estéril individualmente envuelta, comience por el extremo tapado y comience a retirar cuidadosamente el papel.No retire toda la funda. Más bien, proteja la punta del mango de la pipeta, solo la parte superior de la pipeta por encima de las marcas de graduación, y coloque un accesorio para pipeta, como una bombilla o pistola, en el extremo superior de la pipeta serológica. Sujete el accesorio para pipeta con una mano y retire la funda de papel de la pipeta de plástico con la otra.Para pipetas serológicas de vidrio almacenadas en recipientes metálicos, afloje la tapa del recipiente y retire la tapa; flamee los extremos abiertos de la tapa y del recipiente. Luego coloque la tapa de lado sobre la superficie desinfectada del banco. Sostenga el recipiente horizontalmente y agítelo para que las puntas de una o dos pipetas sobresalgan.Sobresalga aproximadamente una pulgada. Coloque el recipiente horizontalmente y retire una pipeta sin tocar las demás pipetas. Mantenga la punta inferior de la pipeta libre de contacto con las manos y superficies no estériles.Proceda a colocar el accesorio para pipeta. A continuación, pase el tercio inferior de una pipeta de vidrio a través de la llama del mechero Bunsen durante uno a tres segundos. Ahora retire la tapa del frasco que contiene el medio estéril.Sujételo entre el dedo anular y la palma de una mano mientras manipula el ayudante de pipeta con el pulgar, el dedo índice y el dedo medio de la misma mano; con la otra mano, sostenga el frasco en un ángulo de 45 grados y pase el borde del frasco a través de la llama del mechero Bunsen. Introduzca la punta estéril de la pipeta en el medio. A continuación, aspire utilizando el ayudante de pipeta para controlar el flujo según las marcas de graduación.Observe el volumen aspirado en la pipeta para leer con precisión el volumen. Sostenga la pipeta verticalmente y observe el menisco del líquido directamente a nivel de los ojos. Una vez más, pase el borde del frasco a través de la llama del mechero Bunsen.Luego tápelo. Deje la botella de medio a un lado. A continuación, tome un tubo estéril y de forma aséptica.Retire el tapón como se describió anteriormente. Cree un campo estéril flameando el borde del tubo. Dispense el medio desde la pipeta dentro del tubo controlando el flujo de la muestra para que no salpique.Flamee el borde. Nuevamente, coloque la tapa y aparte el tubo. Ahora retire la pipeta, deseche las pipetas de plástico en un recipiente designado para objetos punzocortantes e introduzca las pipetas de vidrio en una solución de lejía al 10%.Un micropipeteador permite medir y dispensar volúmenes minuciosos con precisión, utilizando instrumentos de diferentes tamaños para rangos de volumen específicos. Tubos y puntas de plástico previamente esterilizados. Utilice también una toallita desinfectante previamente humedecida para limpiar los micropipeteadores. Nota.El Volter muestra tres números que deben interpretarse en relación con el tipo de micropipeta, con una precisión reflejada en la graduación más pequeña. Marque, por ejemplo, que la P 20 se utiliza para volúmenes entre 2,0 y 20,0 microlitros. El número superior en negro corresponde a las decenas de microlitros.El segundo número negro indica el volumen en microlitros. El número rojo marca las décimas de microlitro, de modo que cada marca de graduación equivale a un incremento de 0,02 microlitros. Primero, gire el botón de ajuste para establecer el volumen del dispensador según se indica en el volúmetro numérico.Al disminuir la configuración de volumen en la micropipeta, gire lentamente la rueda del pulgar hasta la marca de graduación. Al aumentar la configuración de volumen, gire hacia arriba pasando la marca de graduación deseada un tercio de vuelta. Luego, gire lentamente hacia abajo la rueda del pulgar para alcanzar el volumen deseado.Utilice puntas desechables de plástico estériles en todo momento. Coloque una punta firmemente en el extremo del cilindro de la micropipeta. Presione hacia abajo y gire ligeramente para asegurar un sello hermético al aire.Sostenga el micropipeteador en posición vertical. Observe que el micropipeteador tiene tres posiciones: reposo, primer paro y segundo paro.Pulse el botón del émbolo desde la posición de reposo hasta el primer tope para desplazar un volumen de aire equivalente al ajustado. A continuación, sumerja la punta en el líquido mientras mantiene pulsado el botón hasta el primer tope. Suelte lentamente el botón para aspirar el líquido dentro de la punta.Cuando el botón pulsador alcance la posición de reposo, espere un momento para que el líquido sea aspirado hacia la punta. A continuación, retire la punta del líquido. Verifique visualmente la cantidad de líquido aspirado en la punta, asegurándose de que no haya burbujas de aire.Coloque la punta en un ángulo de 10 a 45 grados contra la pared del tubo que recibirá el líquido. Ahora, presione lentamente el botón del émbolo hasta el primer tope. Expulse el líquido.Tras un momento, presione el botón pulsador hasta el segundo tope para expulsar cualquier líquido residual. En la punta, proceda a retirar la punta del líquido y luego suelte el émbolo a la posición de reposo. Finalmente, deseche las puntas en el recipiente designado para residuos cortopunzantes presionando el botón de expulsión en la micropipeta.Primero apague el quemador de la parrilla. Después de guardar todos los materiales y reactivos, pase una toallita desinfectante por las superficies externas del LabWare antes de trasladarlo a su lugar de almacenamiento. Luego, coloque el material de vidrio contaminado y los desechos peligrosos en los recipientes adecuados para su disposición final.Proceda a limpiar nuevamente toda el área de trabajo, permitiendo que el desinfectante se evapore. Finalmente, lávese las manos cuidadosamente con jabón antiséptico y agua tibia. Sin una técnica aséptica, los cultivos pueden contaminarse y retrasar el experimento.La transferencia aséptica de líquidos utilizando pipetas serológicas es esencial para amplificar cultivos bacterianos puros, como esta preparación de 25 mililitros de E. coli. Además, las pipetas serológicas facilitan la transferencia aséptica de líquidos a tubos de ensayo estériles. Este ejemplo demuestra un cultivo puro frente a un cultivo contaminado de E. coli en la entrega punto a punto de medio a los tubos.A veces se requieren volúmenes precisos. Es evidente que en este caso hay una transferencia imprecisa del medio. Este ejemplo muestra un volumen incorrecto de tampón transferido.En lugar de dispensar 12,5 microlitros, el estudiante dispensó 125 microlitros. Aunque los números se ajustaron de forma idéntica en el volúmetro, se seleccionó el micropipeteador incorrecto para la tarea. Después de ver este video, debería tener un conocimiento práctico sobre cómo aplicar una técnica séptica a procedimientos de laboratorio rutinarios, como la transferencia de soluciones y cultivos utilizando pipetas serológicas y micropipetas, sin comprometer su esterilidad.El objetivo es que los procedimientos de precaución, como flamear el vidrio, las puntas de pipeta, los tubos de cultivo y los frascos, así como trabajar dentro de los límites de un campo estéril en la bancada del laboratorio, se vuelvan habituales en cada experimento. También es esencial medir y dispensar volúmenes precisos y exactos al realizar experimentos. Aprender a utilizar correctamente estos instrumentos de transferencia de volumen mejorará la fiabilidad de los resultados experimentales.

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Investigación

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Biología

Cuando se trabaja con medios y reactivos utilizados para los microorganismos de cultivo, una técnica aséptica debe ser practicada para asegurar la contaminación se minimiza. Una variedad de métodos de enchapado se utilizan habitualmente para aislar, propagar, o bacterias enumerar y fagos, todos los cuales incorporan procedimientos que mantienen la esterilidad de materiales experimentales.

Técnicas de laboratorio asépticas: Métodos de Revestimiento

Listeria monocytogenes es un organismo modelo para estudiar la respuesta inmune y la susceptibilidad genética a las bacterias intracelulares en ratones. Este método permite medir la carga bacteriana y generar una sola célula suspensiones de hígado y el bazo de los ratones para el análisis de FACS para determinar los cambios en las células inmunes, debido a la infección por Listeria.

La medición de la carga bacteriana y la respuesta inmune en ratones infectados con Listeria monocytogenes</em

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Detección Sensible de Proteopathic Siembra Actividad con FRET Citometría de Flujo

Este protocolo describe cómo inocular ratones C57BL / 6J con la cepa EGD de Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) y para medir el interferón-γ (IFN-γ) las respuestas de las células asesinas naturales (NK), células T asesinas naturales (NKT), y adaptativa linfocitos T después de la infección. Este protocolo también describe cómo llevar a cabo estudios de supervivencia en ratones después de la infección con una dosis DL50 modificada del patógeno.

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Demostrar el uso de gradientes discontinuos de densidad para separar poblaciones bacterianas basadas en la producción de cápsulas. Este método se utiliza para comparar cantidad cápsula entre culturas, aislar a mutantes con un fenotipo específico de la cápsula, o identificar los reguladores de la cápsulas. Se describe aquí es la optimización y funcionamiento del ensayo.

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El cultivo in vitro es un método de detección directa de la presencia de bacterias vivas. Este protocolo describe métodos para el cultivo de diversas espiroquetas de Borrelia, incluidas las del complejo Borrelia burgdorferi sensu lato, las especies de fiebre recidivante de Borrelia y Borrelia miyamotoi. Estas especies son fastidiosas y de crecimiento lento, pero pueden ser cultivadas.

Métodos de cultivo de espiroquetas de Borrelia burgdorferi Sensu Lato Complex y fiebre recidivante Borrelia

El presente protocolo describe la propagación del virus del Zika (ZIKV) en células de riñón de mono verde africano Vero y la cuantificación del ZIKV utilizando métodos de inmunodetección colorimétrica basados en células en formatos de 24 y 96 pocillos (alto rendimiento).

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